Реакции иммунитета. Реакции иммунитета гемолиза, рск, преципитации. Серологический метод диагностики инфекционных болезней серологические реакции, протекающие с участием комплемента реакция гемолиза
 Скачать 15.31 Kb.
|
|
Реакции иммунитета: гемолиза, РСК, преципитации. Серологический метод диагностики инфекционных болезней СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ, ПРОТЕКАЮЩИЕ С УЧАСТИЕМ КОМПЛЕМЕНТА РЕАКЦИЯ ГЕМОЛИЗА: литическое действие иммунной сыворотки в присутствии комплемента особенно четко проявляется в отношении эритроцитов. Если кролика иммунизировать эритроцитами барана, кроличья сыворотка приобретает специфическую гемолитическую активность, т.е. способность вызывать гемолиз эритроцитов, использованных для иммунизации. Этот эффект абсолютно зависим от иммунизации. Таким образом, наличие или отсутствие активного комплемента в гемолитической сыворотке очень четко выявляется по результатам ее взаимодействия с гомологичными эритроцитами: при наличии комплемента - гемолиз, образование «лаковой крови»; при его отсутствии - гемагглютинация, эритроциты выпадают на дно пробирки, образуя осадок в виде зонтика, жидкость бесцветна. РЕАКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА Преимущество РСК состоит в том, что природа антигена, участвующего в ней, не имеет значения, так как комплемент связывается с Fc - фрагментом любого антитела, относящегося к IgG и IgM, независимо от его антительной специфичности. РСК очень чувствительна: она позволяет обнаружить количество антител в 10 раз меньшее, чем в реакции преципитации. В основе РСК лежат два свойства комплемента: 1) способность связываться с комплексом антиген + антитело 2) вызывать лизис эритроцитов, использованных для получения гемолитической сыворотки. РСК ставят в два этапа и в ней участвуют две системы - опытная (диагностическая) и индикаторная. Диагностическая система состоит из исследуемой сыворотки и антигена. К этой системе добавляют стандартный комплемент. Его источником служит сыворотка морской свинки. Смесь инкубируют при 37 С в течение одного часа. Если в исследуемой сыворотке имеются антитела, произойдет их взаимодействие с добавленным антигеном, и образующиеся комплексы антиген-антитело свяжут добавленный комплемент. Если же в сыворотке антитела отсутствуют, образования комплекса антиген-антитело не произойдет, и комплемент останется свободным. Никаких видимых проявлений на этой стадии обычно нет. Для выяснения вопроса, произошло или нет связывание комплемента, добавляют индикаторную систему (гемолитическая сыворотка и эритроциты барана). Если комплемент связался с диагностической системой, т.е. в сыворотке больного имеются антитела, и произошло связывание комплемента комплексом антитело + антиген, лизиса эритроцитов не будет - РСК положительная (жидкость бесцветна, на дне осадок эритроцитов). Если же в сыворотке специфические антитела отсутствуют и связывания комплемента не произойдет, т.е. РСК отрицательна, то комплемент связывается с комплексом эритроциты + антитела индикаторной системы и произойдет гемолиз - в пробирке «лаковая кровь», осадка эритроцитов нет. Интенсивность РСК оценивают по четырехкрестной системе в зависимости от степени задержки гемолиза и наличия осадка эритроцитов. Реакция сопровождается соответствующими контролями: контроль сыворотки (без антигена) и контроль антигена (без сыворотки), так как некоторые сыворотки и некоторые антигены обладают антикомплементарным действием. РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ И ЕЕ ВАРИАНТЫ Качественная реакция кольцепреципитации применяется часто. Для ее постановки в тонкие преципитационные пробирки наливают сначала неразведенную преципитирующую сыворотку и сверху наслаивают раствор антигена. В случае гомологичности антител и антигена на границе между этими растворами через 3-10 минут появляется кольцо преципитата. Одним из наиболее эффективных методов анализа растворимых антигенов является реакция преципитации в геле. Она позволяет выявить число индивидуальных антигенов в исследуемой жидкости и провести анализ их антигенного родства. Разработан метод встречной иммунодиффузии, позволяющий проводить прямое сравнение различных антигенов и сывороток. Этот метод часто применяют для определения токсигенности дифтерийных бактерий. Используют 1%-ный агар, приготовленный на физиологическом растворе, который разливают в чашки Петри слоем 0,5 см толщиной. После застывания в пластинке агара вырезают луночки: одну - в центре чашки, 4-5 - по окружности. В центральную луночку наливают преципитирующую сыворотку, а в периферический - раствор гомологичного и сравниваемых с ним антигенов. Учет результатов проводят через 24,48, и 72 часа инкубации при комнатной температуре. Антитела и антигены диффундируют навстречу друг другу, и в участках, где создаются их эквивалентные концентрации, образуются дугообразные полосы преципитации. |