Зачет по микробиологии. Зачет 1. Режим работы микробиологической лаборатории
 Скачать 48.08 Kb.
|
|
Режим работы микробиологической лаборатории. Зависит от степени опасности работы с тем или иным возбудителем. Выделяют по степени патогенности и опасности работы на группы: Первая – возбудители чумы, в лабораториях с разрешением от Минздрава. Вторая группа – возбудители высоко-контагиозных эпидемических заболеваний (бруцеллез, туляремия, сибирская язва и другие), с разрешением от Минздрава Третья группа – возбудители эпидемических инфекций: кишечные, туберкулез, дифтерия, патогенные анаэробы. Лаборатории – Санитарно-эпидемиологическая станция Четвертая группа – все патогенные кокки, сальмонеллы, гемоглобинофильные бактерии. Изучают все лаборатории. Соответственно в лабораториях ведутся журналы: журнал регистрации, журнал выделенных культур и их уничтожение, журнал движений материалов, подозрительных на зараженность. Помещение изолировано, в состав микробиологической лаборатории входит: лабораторные комнаты – просторная, хорошо освещенная, отделаны легко дезинфицирующими материалами, находятся обязательно: термостат, микроанаэростат, холодильник, сушильный шкаф, центрифуга, полуавтоматический прибор счета колоний; для проведения работ в стерильных условиях предбокс и бокс с рабочим столом, бактерицидной лампой, табуреткой. Рабочий стол содержит: горелка, штативы, бактериологические петли., банка с дез. раствором моечная комнаты подготовки лаб. посуды, приготовления пит. сред автоклавная комната приема исслед. материала и выдача результатов виварии – для содержания лабораторных животных Правила персонала: в медицинском стерильном халате, шапочке, волосы собраны посторонние вещи не хранить, нельзя принимать пищу следить за чистотой рук и соблюдать осторожность при работе с исследуемом материалом исследуемый материал ставят на поднос, обрабатывают дез. раствором по окончанию работы руки, инструменты и рабочее место обработать дез. раствором Уборка: проводится ежедневно до и после работы с применением дез. средств бокс убирают в конце рабочего дня, перед работой облучат бактерицидными лампами посуду с заразным материалом обеззараживают в автоклаве стеклянную посуду моют ершами с полужидким мылом, замачивают в 5-10% растворе хлористоводородной кислоты, ставят в сушильный шкаф предметные стекла хорошо обезжирены, бывшие в использовании опускают на 2 часа в конц. серную кислоту и кипятят в 5% растворе бикарбоната натрия 30-40 мин 2-5. Световой, электронный, люминесцентный микроскопы. Устройство и применение. Иммерсионная система и темнопольная микроскопия. Световой микроскоп. Применение: изучение морфологических признаков микроорганизмов, величина которых не менее 0,2-0,3 мкм. Устройство: Оптическая часть представлена объективами – нижняя линза увеличивает, коррекционная линза (исправляет недостатки оптического изображения). Делят на сухие – по 2 на МБР-1, МБИ-1, и один иммерсионный с надписью ОИ или МИ, черной линией в нижней части. Указывают увеличение, заводской номер и числовую апертуру. Люминесцентный микроскоп. Применение: основано на способности микроорганизмов к фотолюминесценции – люминесценция при действии источником света, выделяют первичную – без предварительного окрашивания, вторичную. Устройство: стандартным биологическим микроскопом с двумя светофильтрами (дополнительное приспособление) Позволяет обнаруживать микроорганизмы при очень низких концентрациях за счет высокой контрастности. Электронный микроскоп. Применение: изучение субмикроскопических объектов, вирусов, и тонкого строения микроорганизмов. Устройство: световые лучи заменяют поток электронов, имеющих длину волны 0.005 нм; обладают высокоразрешающей способностью 0,1-0,2 нм, что позволяет увеличивать изображение в 1 000.000раз. Высоковольтный кабель через раскаленную вольфрамовую нить испускает пучок электронов, проходящий через линзу конденсора, попадает на препарат, далее проходит линзу объектива, линзу проектора и изображение клетки отображается на флуоресцентном экране. К дополнительным приспособлениям микроскопа относятся: светофильтры осветители темнопольные параболоид и кардиоид-конденсоры фазово-контрастные приспособления направительный столик микронасадка для микрофотографий микро- установка для прерывистой микросъемки Иммерсионная система. Основана на введение между объективом и предметным стеклом иммерсионной жидкости, когда луч света проходит через нее, то не преломляется, поэтому изображение более высокого качества. Фронтальная линза имеет короткое фокусное расстояние, а разрешающая способность 0,2мкм Иммерсионной жидкостью могут быть: кедровое масло, дистиллированная вода, вазелин, физраствор, водный раствор глицерина Темнопольная микроскопия. Основана на явлении дифракции света при сильном боковом освещении взвешенных в жидкости мельчайших частиц – эффект Тиндаля. Применяют доп. приспособления: кардиоид конденсор – лучи отражаются сначала от выпуклой, а после от вогнутой параболоид-конденсор – имеет в центре затемнение, задерживающие центральные лучи света, и внутреннюю зеркальную поверхность для отображения лучей Вышедшие лучи идут косо и не попадают на объектив, т.к. в объектив попадают отраженные от объекта лучи в виде ярко светящихся, например, контуров. 6. Микропрепараты. Мазок, нативный препарат, способы приготовления. Микропрепарат – приметное стекло с расположенным на нем объектом, подготовленным для исследования под микроскопом. Сверху объект обычно накрывают тонким покровным стеклом. Различают: Постоянные микропрепараты – объект, накрытый тонким покровным стеклом заключен в канадский бальзам Временные – заливка глицерин-желатином, либо физраствором, либо водой. Типы микропрепаратов: Тотальные – из мелких микроорганизмов, или их частей. Требуют дополнительной обработки в просветляющих растворах, обезвоженные тотальные микропрепараты могут заключать в постоянные среды Шлифы – из материалов, которых нельзя резать на микротоме, преимущественно в петрографии. Срезы – из фиксированных или залитых в пластический материал объектов на микротоме. Мазки – применяют в гематологии при изучении крови, для изучения бактерий или тканевых элементов, простейших. Влажные мазки – фиксируют, не давая материалу высохнуть. Сухие – высушивают не давая высохнуть Метод приготовления нативного препарата. метод раздавленной капли – на предметное стекло наносят каплю исследуемого материала и накрывают покровным стеклом. при 40х микроскопируют метод висячей капли – на покровное стекло наносят каплю исследуемого материала, накрывают предметным стеклом с лункой, так чтобы капля была в центре лунки, затем быстро переворачивают. капля не должна касаться лунки прижизненная окраска – взвесь микроорганизмов вносят каплю метиленового синего или нейтрального красного, и готовят по методу висячей капли или раздавленной капли. Приготовление мазка: Первый этап – берут петлей материал и наносят на предметное стекло: с жидкого непосредственно на предметное стекло; с твердого – на стекло сначала наносят каплю воды и потом материала, эмульгируют распределяя материал Высушивают – над пламенем спиртовки или на воздухе Фиксируют для прикрепления микробов к стеклу и мертвые проще окрасить: физический метод: над пламенем горелки и химический: погружают в фиксатор на определенное время – формалин. Окрашивают – наливают на определенное время и промывают водой до появления бесцветных струй воды, осторожно высушивают фильтрованной бумагой. простые – с применением красителя анилинового ряда кислого или основного: генциановый фиолетовый, фуксин, эозин, метилиновый синий – только морфология; сложные – применение красителей нескольких – основная и обесцвечивающая жидкость: по Граму, Целлю-Нильсену, Гинса-Бури – морфология и химический состав. 7. Основные отличия эукариот и прокариот. Прокариоты: генетический материал представлен нуклеоидом – замкнутая кольцевая двунитевая молекула ДНК, прикрепленная в одной точке к ЦПМ нет органелл, только мезосомы – инвагинации ЦПМ, которые связаны с нуклеоидом и участвуют в делении, в дыхании и спорообразовании наличие КС, состоящей из пептидогликанf плазмиды – автономно реплицирующийся участок молекулы ДНК, находящиеся в цитоплазме или нуклеоиде; несут наследственную информацию, но не являются обязательными, выполняют ряд функций: F-плазмиды – отвечают за конъюгированный перенос между бактериями R- плазмиды – плазмиды лекарственной устойчивости, обеспечивающие цркуляцию генов, детерминирующих чувствительность к химиотерапевтическим веществам при лечении заболеваний рибосомы типа 70S Эукариоты: наследственный материал в виде линейной ДНК, заключенный в ядре диплоидность наличие органелл обладают эндоцитозом: пиноцитоз и фагоцитоз КС имеют только грибы – хитин, глюкагон, протисты и растения -целлюлоза, гликопротеины синтезируют энергию из света, либо потребляют готовую имеют жгутик – вырост цитоплазмы, окруженный мембраной с аксонемой из 9 пар периферических микротрубочек и 2 микротрубочек в центре рибосомы 80S 8. Основные принципы классификации микроорганизмов. В основу классификации входило деление микроорганизмов по окрасу КС по методу Грама. Выделяли Грамположительные в сине-фиолетовый цвет, грамотрицательные в красный цвет. В настоящее время в основу классификации положена: степень генетического сродства к рРНК количество ГЦ-связей построение рестрикционной карты генома степень гибридизации фенотипические признаки: отношение к окрасу по Граму, морфологические, культуральные и биохимические свойства, антигенная структура. 9. Классификация бактерий. Основные формы бактерий. патогенные - инфективность, включающая адгезию и колонизацию; токсичность; инвазивность условно-патогенные – вызывают болезни при определенных условиях микробы-резиденты – состоят в симбиотчиеских отношениях с организмом и приносят большую пользу, когда находятся под контролем иммунной системы и механизмов неспецифической резистентности Микроорганизмы относятся к трем царствам: • Vira — к ним относятся вирусы; • Eucariotae — к ним относятся простейшие и грибы; • Procariotae — к ним относятся истинные бактерии, риккетсии, хламидии, микоплазмы, спирохеты, актиномицеты. Домен Bacteria:
Существует внутривидовая дифференцировка бактерий на варианты: • по биологическим свойствам (биовары или биотипы) • по биохимической активности (ферментовары) • по антигенному строению (серовары или серотипы) • по чувствительности к бактериофагам (фаговары или фаготипы) • по устойчивости к антибиотикам (резистентовары) Формы бактерий: сферические формы – кокки – шаровидные размером 0,5-1мкм: микрококки - одиночные диплококки – по два стрептококки – составляют цепочку стафилококки – в виде грозди винограда сарцины – пакеты по 8 кокков и более палочковидные – от 1 до 10мкм длиной, толщина 0,5-2мкм: правильная и неправильная булавовидная форма концы заостренные, обрезанные, закругленные или в виде утолщения слегка изогнутые – вибрионы могут располагаться под углом друг к другу или в виде цепочки Извитые: спириллы – штопорообразно извитые клетки с крупными завитками спирохеты – тонкие и длинные извитые бактерии, более мелкие завитки Ветвящиеся – палочковидные закрученные как буква игрек или нитевидные разветвления, образуя мицелий – актиномицеты. 10. Строение бактериальной клетки. Бактерии — это прокариотические, преимущественно одноклеточные микроорганизмы, которые могут также образовывать ассоциации (группы) сходных клеток, характеризующиеся клеточными сходствами. Бактериальная клетка окружена оболочкой, состоящей из КС и ЦПМ, некоторые окружены капсулой. Под оболочкой содержится протоплазма, включающая цитоплазму с включениями и генетическим материалом, представленного виде нуклеоида – двунитевая замкнутая кольцевая ДНК, прикрепленная в одной точке к ЦПМ. Некоторые бактерии способны при неблагоприятных условиях образовывать споры. Имеются и поверхностные структуры: капсула, жгутики и пили(микроворсинки) КС – прочная упругая структура, окружающая бактериальную клетку, придающая ей форму и сдерживающая высокое осмотическое давление бактериальной клетки. ЦПМ – представляет билипидный слой фософолипидов с поверхностными, интегральными белками, отсутствуют стеролы(за исключением микоплазм), имеющая текучую структуру Цитоплазма занимает основной объем и является коллоидом из растворимых белков, РНК, включений рибосом типа 70S Капсула – слизистая структура, прочно связанная с КС и имеющая толщину более 0,2мкм, четкие границы. Жгутики – тонкие нити, берущие начало от цитоплазматической мембраны базальным тельцем крюком, продолжаясь в спиралевидную нить, и обеспечивают подвижность бактерий. белок флагеллин Пили (фимбрии или микроворсинки) – более тонике и короткие нитевидные образования 3-10м на 0,3-10мкм. белок пилин. Спора – своеобразная форма покоящейся бактерии с грамположительным типом строения кс. Мезосомы – инвагинации цитоплазматической мембраны, участвующие в делении и спорообразовании бактерий Рибосомы типа 70S- около 20нм. Плазмиды – автономные кольцевые молекулы двунитевой ДНК, расположенные в цитоплазме или включенные в нуклеоид. Несут генетическую информацию, не являясь обязательной структурой. 11. Жгутики, капсула, спора. Строение. Спорообразование. Капсула – слизистая структура, прочно связанная с КС и имеющая толщину более 0,2мкм, четкие границы. выявляется по Бурри-Гинсу. Состоит из экзополисахаридов, поэтому гидрофильна и включает большое количество воды, антигенна. Микрокапсула – слизистое образование с толщиной менее 0,2мкм. Слизь – мукоидные экзополисахариды, без четких границ. Содержаться в мокроте. Функции капсулы: антигенная защита, защищают фагоцитоза, участвуют в адгезии, предохраняют от повреждений и высыхания. Жгутики – тонкие нити, берущие начало от цитоплазматической мембраны базальным тельцем крюком, продолжаясь в спиралевидную нить, и обеспечивают подвижность бактерий. Белок флагеллин, который выполняет роль антигена. Базальное тельце содержит диски: две пары у Гр+, одна пара у Гр-. Источник энергии: разность протонных потенциалов ЦПМ, а механизм вращения АТФ-синтетазы. По количеству жгутиков: монотрих – один , перитрих- по периметру от одного до сотни, лофотрихи – пучок жгутиков на одном конце, амфитрихи – на каждом конце по одному или пучку жгутиков. Спора – своеобразная форма покоящейся грамположительных бактерий. Если спора не превышает диаметр клетки – род Bacillus, если превышает – Clostridium. Так как кислоустойчивы, то при окраске по Целлю-Нильсену окрашены в красный цвет, а вегетативная клетка в синий цвет. Является видовым свойством: форма – овальная, шаровидная; расположение в клетке – терминальное (на конце), субтерминальное (ближе к концу), центральное. Спорообразование или споруляция. Включает ряд стадий, в результате которых часть цитоплазмы и хромосома бактериальной вегетативной клетки отделяются, окружаясь врастающей ЦПМ – проспора. В протоплазме проспоры находятся белоксинтезирующая система, без АТФ, т.к. энергия в виде 3-глицеринфосфата, система получения энергии и нуклеоид. Проспору окружают: оболочка споры(из кератиноподобных белков, обеспечивает резистентность к химическим агентам) - наружная ЦПМ – кортекс (из пептидогликана и много сшивок)- стенка споры (источник КС при прорастании споры, из пептидогликана)- внутренняя ЦПМ. Некоторые имеют экзоспориум липопротеиновой природы. Прорастание споры: Активация – готовность к прорастанию, при температуре 60-80 Инициация – несколько минут Вырастания – быстрый рост, с разрешением оболочки и выходе проростка. 12. Ультраструктура бактериальной клетки. Наружная мембрана – мозаичная структура, представленная ЛПС, ФЛ и белками. ЛПС – наружный слой – ЛПС заякорен в мембране липидом А (отождествляют с эндотоксином), от него отходит стержневая часть и от нее отходит О-специфическая полисахаридная цепь, обуславливающая серогруппу. Ее пронизывают белки порины. Между наружной и цитоплазматической мембраной находится периплазматическое пространство или периплазма, содержащая ферменты и компоненты транспортных систем. Нуклеоид – эквивалент ядра у бактерий. двунитевая ДНК, плотно уложенная в виде клубка. Одна молекула ДНК, представленная замкнутым кольцом, но у некоторых линейные хромосомы. Выявляется по Романовскому-Гимзе. Светлые зоны с фибриллярными, нитевидные ДНК присоединенные к участкам цитоплазмы или мезосомами. КС – прочная упругая структура, окружающая бактериальную клетку, придающая ей форму и сдерживающая высокое осмотическое давление бактериальной клетки. Представлена пептидогликаном- полимер из полисахаридной гликановой цепи (повторяющиеся остатки N-ацетилглюкозамина и N-ацетилмурамовой кислоты), и тетрапептида: L-аланин+ N-ацетилмурамовой; D-глутамин+ у Гр+ L-лизин/ Гр- ДАП. ЦПМ – трехслойная: два темных и один светлый промежуточный; представляет билипидный слой фософолипидов с поверхностными, полуинтегральными, интегральными белками, отсутствуют стеролы (за исключением микоплазм), имеющая текучую структуру. Обеспечивает регуляцию осмотического давления, транспорте веществ, энергетическом метаболизме. Инвагинаты – мезосомы. Цитоплазма занимает основной объем и является коллоидом из растворимых белков, РНК, включений рибосом типа 70S Пили (фимбрии или микроворсинки) – более тонике и короткие нитевидные образования 3-10м на 0,3-10мкм. белок пилин. Пили общего типа – за прикрепление к субстрату, питание и водно-солевой обмен; пили половые – контакт между клетками; пили 4 типа – антигенны и отвечают за контакт с клеткой-хозяином. 13. Особенности строение КС Грам+ и Гарм-
14. Строение кислоустойчивых бактерий. Включение бактерий. У кислоустойчивых бактерий особое строение имеет КС: Толщина более 10нм, высокая вязкость, повышенная стабильность, низкая проницаемость. Тонкий слой пептидогликана ковалентно связан с арабиногалактаном, который в свою очередь связан с миколовыми кислотами – разветвленные жк, покрывающие всю поверхность гидрофобным липидным слоем. Гликолипиды связаны нековалентно с миколовыми кислотами; гидрофобный слой пронизан пориноподобными белками. Включения: гликоген – гранулах, сера, крахмал. Волютин – полифосфат неорганической природы, имеющий сродство к основным красителям, по Нейссеру – окрашен почти в черный, а цитоплазма в желтый. Они в виде метахроматических гранул специфично расположены у дифтерийной палочки. 17-19 вопросы
20.Классификация и морфология грибов. Грибы относят к царству Fungi. Выделяют несовершенные: тип Дейтеромицеты, и совершенные: тип Зигомицеты, Аскомицеты, Базидиомицеты. По способу размножения: совершенные половой и бесполый способы, несовершенные – бесполое – эндогенные споры, созревающие внутри спорангия и конидий – экзогенные споры на кончиках плодоносящих гиф. Плесневые грибы или гифальные грибы: Грибы состоят из гиф – тонкие нити, образующих мицелий. Гифы низших грибов не имеют перегородок, а высших имеют. Тело гриба – талом. Выделяют Демациевые – пигментированные и гиалиновые непигментированные. Выделяют питательные гифы – обращены к субстрату, гифы над субстратом воздушные и половые. Дрожжи. Грибы овальной формы размерами 3-15мкм, зачастую клетки поодиночке или формируют компактные колонии. По типу полового размножения их относят к аскомицетам и базидиомицетам. При бесполом размножении делятся почкованием или бинарно. Иногда формируют псевдогифы. К аскомицетам относят – возбудитель пневмоцистной пневмонии, возбудитель эрготизма. К базидиомицетам телеоморфы. Дрожжеподобные грибы – грибы которые имеют только бесполый тип размножения и относят их к Дейтеромицетам – несовершенным грибам. Для них харакетерен мицелий с перегородками, размножаются конидиями. Род Кандида – кожное заболевание, поражающее слизистые и органы – кандидоз: овальная форма, 2-5мкм, почкование. 21. Классификация и морфология спирохет. 22.Особенности строения спирохет тип Спирохеты Гр- бактерии: роды Leptospira, Treponema, Borillia. Винтообразные извитые и длинные бактерии, покрытые гликозаминогликановым слоем, КС с наружной мембраной, под которой идут фибриллы направленные навстречу друг к другу с обоих концов клетки – вращательное, поступательное движение. Treponema – штопорообразная нить с 8-12 мелкими завитками, вокруг протопласта 3-4 фибриллы. Возбудитель сифилиса, тропической болезни – фрамбезии. Borillia – более тонкие и длинные с 3-8 крупными завитками и 8-20 фибриллами. Возбудитель возвратного тифа, болезни Лайма. Leptospira – завитки частые, неглубокие как веревка. Концы изогнуты и имеют утолщения. Имеют 2 осевые нити и вторичные завитки придают форму S. 23. Классификация и морфология Рикетсий. Гр- бактерии. Палочковидные мелкие облигатные паразиты членистоногих, 0,3-2мкм. Окрашиваются по Романовскому-Гимзе и Макивовелло – красный цвет. Имеют неправильную форму, изменяющуюся в зависимости от условий среды. К ним относят возбудителя эпидемического сыпного тифа, пятнистой лихорадки скалистых гор, клещевой рикетсиоз. 24. Классификация и строение Микоплазм. Гр+, класс Моликутес: роды Микоплазма и Уреоплазма. – мелкие бактерии 0,15-1мкм, не имеющие КС, только ЦПМ. Содержат стеролы. Осмотически чувствительные. Выделяют L-форму, кокковые, нитиевидные, колбовидные. Вызывают хронические инфекции микоплазмоза – атипичная пневмония, поражение мочеполового тракта. 25. Морфология актиномицет. Гр+ ветвящиеся бактерии, которые формируют в пораженных тканях друз – гранулы плотно переплетенных нитей, отходящих от центра, оканчивающиеся утолщениями. Могут размножаться мицелием, бывает питательный и воздушный с спорами. Нокардиоподобные актиномицеты – собирательная группа палочковидных бактерий с кислоустойчивой КС. Микобактерии туберкулеза, лепры и Коринебактерии дифтерии. 27.Классификация вирусов
28-29. Строение и химический состав вирусов. Характеристика вируса, вириона, приона и вироида. Вирусы Это микроорганизмы неклеточного строения, которые являются генетической структурой и внутриклеточными облигатными паразитами, лишённые собственной метаболической системой. Имеют размеры от 15 до 400 нм, по форме различают: сферы пули палочковидные сперматозоиды нити Для них характерно разобщенная репродукция- дезъюнктивная- – в разных частях клетки формируются компоненты, которые после сборки образуют вирусные частицы, а зрелые вирусные частицы - вирионы. Выделяют ДНК и РНК содержащих вирусов. Причем среди РНК-вирусов выделяют однонитевые + и -: минус нить – служит наследственным материалом, для синтеза белков на ее базе комплементарная ей нить синтезируется плюс-нить – выполняет геномную функцию, матричную функцию, т.е функцию иРНК, она является инфекционной. + и - нити, т.е. амбиполярные Выделяют простые – безоболочечные вирусы и сложные – оболочечные вирусы: Простые вирусы – состоят из нуклеиновой кислотой, которая связана с капсидом (белковая структура), состоящая из нуклеопротеинов; ассоциация НК и капсида – нуклеокапсид. Капсид состоит из повторяющихся субъединиц – капсомеров. Функции капсида: участвует в прикреплении к клетке хозяина; защищает нк от деградации Сложные вирусы – помимо капсида имеют еще оболочку – суперкапсид - состоящую из двух слоев липопротеинов, которая приобретается почкованием через мембрану клетки. На ней расположены гликопротеиновые шипики, а под оболочкой может находится матриксный белок М-белок. Капсид имеет несколько типов симметрии: икосаэдрический (кубический) – изометрически полое тело из капсида с вирусной нк внутри спиральный тип – винтообразная структура нуклеокапсида сложный тип Функции капсида и суперкапсида: защита от факторов окружающей среды избирательное взаимодействие с определенными клетками обуславливают антигенные и иммуногенные свойства вирионов Характерно наличие липидов, полисахаридов у сложных вирусов, а также нескольких типов белков: неструктурные белки – участвуют в репродукции структурные белки – обуславливают строение вирусоспецифические белки и клеточные белки Прионы Это инфекционные белковые частицы, вызывающие особые конформационные изменения нормального клеточного прионового протеина, который отвечает за регуляцию. Ген клеточного прионового протеина локализует в коротком плече 20 хромосомы человека. Прионный протеин инфекционный имеют форму фибрилл, отличаясь от нормального строением тройничной или четвертичной структуры. Вызывает инфекционные трансмиссивные губкообразные энцефалопатии. Вироиды Это небольшие молекулы кольцевой, суперспирализованной РНК, не содержащие белок; вызывают заболевания у растений. Вирион Полноценная вирусная частица, состоящая из нуклеиновой кислоты, капсида и находящаяся вне живой клетки. Вирионы большинства вирусов не проявляют никаких признаков биологической активности, пока не соприкоснутся с клеткой-хозяином. 30. Типы взаимодействия вирусов с клеткой Продуктивный тип взаимодействия – результатом является появление новых вирусов (вирионов), которые выходят путем лизиса – разрушение клетки и выход простого вируса; почкованием – экзоцитоз сложные вирусы. Интегративный тип – внедрение провируса (геном вируса) в хромосому клетки-хозяина и их совместное существование; вирусный геном реплицируется как составная часть клетки. Такой тип наследуется – вирогения, но из=за различных причин геном вируса выпадает и переходит в продуктивный тип. Абортивный тип – в результате нового вируса нет, т.е. прерывание инфекционного процесса в клетке. Причины: заражение дефектным вирусом чувствительную клетку; заражение стандартным вирусом генетически резистивной клетки; заражение стандартным вирусом при непермиссивных условиях: на плазматической мембране нет рецепторов; клетка-хозяин не можен инициировать трансляцию вирусной РНК; нет специфических ферментов; изменение температуры, рН, противовирусные препараты. При устранении факторов может перейти в продуктивный тип. Характеристика продуктивного типа взаимодействия вируса с клеткой. Фазы репродукции. Характеристика Этапов1-3; этапа4; этапов 5-6 Этап1- Адсорбция – за счет электростатического взаимодействия антигенов на поверхности вируса и чувствительных к нему рецепторов, вирус адсорбируется на поверхности клетки-хозяина, рецепторы также обеспечивают транспортировку вируса в клетку. Запускается инфекционный процесс Этап 2 – Проникновения вируса в клетку – путем рецепторного эндоцитоза (самый распространенный) или виропексии – происходит инвагинация участка плазматической мембраны клетки-хозяина и образуется вакуоль с вирусом, которая сливается с лизосомами. Этап 3 – распаковка вируса – за счет лизосомальных ферментов происходит удаление вакуоли, защитных оболочек. Конечный продукт – нуклеокапсид Этап4 – Транскрипция, трансляция и репликация – происходит согласна закону генетического кода ДНК переписывается на иРНК
Этап5-Сборка вириона – синтезируется вирусная нк, белки капсида, которые образуются в различных частях клетки, и происходит взаимораспознавание белков вируса и их самопроизвольное соединение Этап6-Выход вирусной частицы из клетки - Сложные вирусы выходят почкованием – плазматическая мембрана клетки-хозяина формирует их суперкапсид; Простые путем лизиса клетки. 32. Характеристика интегративного типа взаимодействия вируса с клеткой Попав в клетку-хозяина, вирус встраивает геном в хромосому клетки-хозяина. При вирогении происходит изменение информации в клетке, что приводит к образованию опухолевых клеток, аутоиммунных и хронических заболеваний. Процесс протекает по-разному у ДНК-вирусов и РНК-вирусов: ДНК-вирусы: геном клетки взаимодействует с ДНК-вируса и происходит нуклеотидное последовательное встраивание вирусного генома в определенный участок хромосомы с помощью ферментов. РНК-вирусы: на матрице РНК происходит при участии ревертазы транскрипция ДНК, которая и будет интегрироваться в геном вируса 39. Правила кипячения, прокаливания, фильтрования через бактериальные фильтры. Кипячение: метод дезинфекции хирургических инструментов, игл, резиновых трубок. Помещают в стерилизаторы, в которые набирают воду. Для устранения жесткости и повышения температуры кипения добавляют 1-2% раствор бикарбоната натрия. Кипячение производят не менее 30 мин, т.к. некоторые споры и вирусы не погибают. Прокаливание над спиртовкой: применяется для стерилизации бактериологических петель, препаровальных игл, пинцетов, предметные стекла Фильтрование через бактериальные фильтры: основан на механической задержке микроорганизмов и их спор мелкопористыми фильтрами – асбсетовые с марками ф и сф, мембранные по размеру пор делятся на номера1-5. Фильтры помещают в разъемную часть цилиндрической воронки Зейтца, затем ее обе части скрепляют барашкообразными болтами. Трубчатый конец воронки через резиновую трубку помещают в колбу Бунзена. Фильтрацию проводят вакуум-насосом, к которому присоединяют колбу Бунзена. Фильтрование проводят для жидких материалов, которые не терпят высоких температур – сыворотка, кровь, антибиотики, для получения бактериальных токсинов, фагов и различных продуктов их жизнедеятельности. 40. Методы стерилизации, автоклавирование, пастеризация, тиндализация. Химические методы – применение химических веществ с бактерицидным действием и применяют ограниченно. Механическая стерилизация – мембранные фильтры. Физические методы: прокаливание; кипячение; сухим жаром в шкафу Пастера – воздух нагретый до 165-180 градусов, стерилизуют стеклянную посуду; УФ-лучами – длина 260-300мкм стерилизация воздуха в боксах, операционных, детских учреждениях Автоклавирование - стерилизация паром поддавлением в автоклаве - перевязочный материал при 1 атм 15-20 мин, питательные среды при 0.5атм – 15 мин; инфицированный материал 1.5-2атм 20-25мин; текучим паром в автоклаве – стерилизуют материала не выдерживающие высоких температур питательные среды с витаминами, углеводами, против вегетативных клеток, а споры остаются жизнеспособными: 3 дня подряд при 100градусах по 20-30мин; Тиндализация – дробная стерилизация при 56-58градусах по 1 часу в течение 5-6 дней подряд; Пастеризация – против вегетативных клеток. при 50-65 градусах по 15-30мин или 70-80 градусов по 5-10 мин с последующим быстрым охлаждением, стерилизуют пищевые продукты и напитки. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||