|
|
Микробиология. Серологические реакции, используемые для диагностики вирусных инфекций Вахобова Мадина Фазлиддиновна
Серологические реакции, используемые для диагностики вирусных инфекций Вахобова Мадина Фазлиддиновна МЛ-325
В лабораторной диагностике вирусных инфекций имеются три основных подхода:
- 1. непосредственное исследование материала на наличие вирусного антигена или нуклеиновых кислот;
- 2. изоляция вируса из клинического материала и идентификация вируса;
- 3. серологическая диагностика, основанная на установлении значительного прироста антител к вирусам в течение болезни.
Реакция нейтрализации.
• проводится путем введения смеси антигенантитело животным или в чувствительные
тест-объекты (культуру клеток, эмбрионы).
• При отсутствии у животных или тестобъектов повреждающего действия
микроорганизмов или токсинов говорят о
нейтрализующем действии иммунной
сыворотки и, следовательно, о
специфичности взаимодействия
комплекса антиген-антитело.
Реакция нейтрализации вирусов в культуре клеток.
• А - цитопатогенный эффект (ЦПЭ) в результате
размножения вирусов;
• Б - ЦПЭ отсутствует в результате
предварительной нейтрализации вирусов
антителами.
Реакция торможения гемагглютинации (РТГА)
- Используется для диагностики заболеваний, вызванных гемагглютинирующими вирусами.
- Она основана на связывании стандартного вируса (вирусный диагностикум) с антителами сыворотки больного.
- При отсутствии специфических антител эритроциты агглютинируются вирусом (формирование характерного "зонтика").
Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации ( РПГА или РНГА ) для серодиагностики
Ставится в планшете ( развернутая РПГА )
Компоненты :
- раститрованная сыворотка больного (в ней ищут АТ к определенному АГ)
- эритроцитарный диагностикум (АГ бактерий, адсорбированные на эритроцитах I группы крови человека)
Учет визуальный :
- при “+” реакции – осадок в виде “зонтика”
- при “ - ” реакции – осадок в виде “пуговки”
Реакция связывания комплемента
- РСК является одной из традиционных серологических реакций и используется для диагностики многих вирусных инфекций.
- В реакции принимают участие две системы: антитела сыворотки больного + стандартный вирус и эритроциты барана + антитела к ним, а также комплемент.
- При соответствии антител и вируса этот комплекс связывает комплемент и лизиса бараньих эритроцитов не происходит (положительная реакция).
- При отрицательной РСК комплемент способствует лизису эритроцитов.
Реакция диффузионной преципитации в геле (РДП)
- Для постановки реакции растопленный агаровый гель тонким слоем выливают на стеклянную пластинку и после затвердевания в нем вырезают лунки.
- В лунки геля раздельно помещают антигены и иммунные сыворотки, которые диффундируют навстречу друг другу.
- В месте встречи в эквивалентных соотношениях они образуют преципитат в виде белой полосы.
***У многокомпонентных систем между лунками с антигенами и антителами появляется несколько линий преципитата; у идентичных АГ линии преципитата сливаются; у неидентичных АГ - пересекаются.
Реакция торможения гемадсорбции (РТГАд)
- Принцип РТГадс базируется на явлении гемадсорбции. Оно заключается в том, что эритроциты приобретают способность адсорбироваться на поверхности культур клеток, которые испытали модификацию в результате появления в оболочке антигенов (гликопротеинов) вирусов. Антитела иммунной сыворотки при взаимодействии с поверхностными антигенами вирусов, представленными в оболочке, связывают их, вследствие чего тормозится адсорбция эритроцитов на клетках.
Иммуноферментный анализ
- ИФА применяется для определения антител в сыворотке.
- На твердую фазу (дно лунок полистироловых планшет) сорбируется вирусный антиген.
- При добавлении соответствующих антител, находящихся в сыворотке, происходит их связывание с сорбированными антигенами.
- Наличие искомых антител обнаруживается с помощью анти-антител (например, человеческих), конъюгированных с ферментом (пероксидазой).
- Добавление субстрата и реакция субстрат – фермент дают окраску.
Заключение
- Количество методов, используемых для диагностики вирусных инфекций, непрерывно растет. Одни уходят в прошлое и имеют в основном историческое значение, другие совершенствуются.
- В настоящее время выпускается большое количество коммерческих сертифицированных тест-систем, в том числе и отечественных, для диагностики наиболее распространенных и социально значимых вирусных инфекций.
- Государственный реестр содержит более 600 диагностических препаратов.
- Однако далеко не для всех групп вирусов имеются диагностические тест-системы. Например, из большой группы энтеровирусов (более 80) только для определения вирусов полиомиелита имеются тест-системы, в то же время для диагностики ВИЧ-инфекции выпускается более 15 различных наборов.
Спасибо за внимание! |
|
|
Скачать 1.87 Mb.