методы окраски. методы окраски маша. Сложные методы окраски
 Скачать 21.22 Kb.
|
|
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ МОСКОВСКОЙ ОБЛАСТИ Государственное бюджетное профессиональное образовательное учреждение Московской области «Московский областной медицинский колледж № 3 имени Героя Советского Союза З.Самсоновой» СООБЩЕНИЕ тема «Сложные методы окраски» Выполнил: студент 2 курса группы 21 ЛАБ специальность 31.02.03 Лабораторная диагностика Вольнова М.С. Руководитель: Преподаватель Ситников А.П. Принят «___»_____________ 202__ г. Оценка: __________________ Орехово-Зуево – 2022 Введение Актуальность: Исследование бактерий в окрашенном препарате дает возможность изучить не только их морфологию, но и позволяет судить о некоторых деталях их химического строения. Это достигается с помощью специальных красок. Клетки микроорганизмов окрашивают главным образом анилиновыми красителями. Различают кислые и основные красители. У кислых красителей ион, придающий окраску (хромофор), - анион, у основных - катион. К кислым красителям относятся эозин, кислый фуксин, эритрозин и др. Они интенсивно связываются с цитоплазматическими компонентами клетки. Основные красители - метиленовый синий, основной фуксин, генциан фиолетовый, кристаллический фиолетовый, сафранин - активнее соединяются с ядерными компонентами клетки. Высокая концентрация ДНК и рибосомальной РНК в клетке бактерий делает ее более чувствительной к основным красителям. В микробиологической практике применяются только основные красители. Интенсивность окрашивающей способности красителя зависит от pH среды: основные красители окрашивают объект тем интенсивнее, чем больше щелочи в среде, кислые - в более кислой. Различают простые и сложные (дифференциальные) способы окраски микроорганизмов. Простые методы окраски Простая окраска позволяет быстро изучить морфологические особенности микроорганизмов. Наиболее пригодными являются основные и нейтральные анилиновые красители. Для простой окраски используют только один краситель, чаще всего красного цвета - фуксин, фиолетового - генцианвиолет (окраска производится в течение 1-2 мин) или синего - метиленовый синий (окраска производится в течение 3-5 мин). Чтобы приготовить мазок, на середину чистого предметного стекла наносят небольшую каплю воды, с помощью бактериальной петли помещают в нее исследуемый материал и равномерно распределяют его на стекле до образования тонкого мазка. Препарат высушивают и фиксируют над пламенем горелки. После окраски промывают водой и высушивают, после чего его можно микроскопировать. Сложные методы окраски На препарат последовательно наносят определенные красители, различающиеся по химическому составу, цвету, протравы, спирты, кислоту и т. д. Это позволяет выявить определенные структуры клеток и дифференцировать один вид микроорганизмов от других. Метод окраски по Граму Для изучения строения клеточной стенки бактерий применяют методику окраски по Граму в различных модификациях(например, Синева). 1. На фиксированный мазок наносится краситель генциан-фиолетовый в течение 1 мин. 2. Не промывая водой, наносится раствор Люголя – 30 сек. 3. Не промывая водой, нанести этиловый спирт, до прекращения отхождения фиолетовых струек краски -30 сек. 4. Промыть мазок водой. 5. Нанести водный фуксин 1-2 мин. 6. Промыть мазок водой, высушить. Грамположительные бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет, грамотрицательные – в красный цвет. Метод окраски по Цилю-Нильсену Кислотоустойчивые бактерии обнаруживают методикой окраски по Цилю-Нильсену 1. Фиксированный мазок окрашивают карболовым фуксином через полоску фильтровальной бумаги с подогреванием над пламенем спиртовки /до появления паров/ 2-5 мин. 2. Снимают бумагу, и после охлаждения стекла промывают мазок водой. 3. Обесцвечивают препарат 5% серной кислотой. 4. Промывают мазок водой. 5. Окрашивают метиленовым синим 3-5 мин. 6. Промывают водой, высушивают и микроскопируют Кислотоустойчивые микроорганизмы окрашиваются в рубиново-красный цвет, некислотоустойчивые - в сине-голубой. Метод окраски по Ожешки Обнаружение спор Методика окраски по Ожешки 1. На нефиксированный мазок наносят 0,5% раствор соляной кислоты и подогревают в пламени спиртовки 2-3 мин. 2. Кислоту сливают, препарат промывают водой, просушивают и фиксируют над пламенем. 3. Далее препарат окрашивают по Цилю-Нильсену. Споры окрашиваются в розовый цвет, бациллы в синий Методы окраски жгутиков бактерий В основе методов окрашивания жгутиков лежит обработка их протравителями, в результате которой они увеличиваются в объеме. Прежде чем приступать к работе, необходимо проверить подвижность клеток в висячей капле. Методика окраска жгутиков по методу Леффлера 1. Микробную культуру вносят в 1 мл стерильной водопроводной воды. Через 20 минут каплю микробной суспензии наносят на стекло и высушивают на воздухе. 2. Препарат протравливают в течение 15 мин. (состав протравы: 1 мл насыщенного спиртового раствора основного фуксина; 10 мл 25% водного раствора танина; 5 мл насыщенного водного раствора сернокислого железа) 3. Препарат промывают водой 4. Окрашивают фуксинов Циля, разведенным водой 1:1 в течение 5 мин. при небольшом нагревании. 5. Промывают водой, высушивают При таком способе окраски жгутики набухают, становятся видимыми и прокрашенными в красный цвет. Методы окраски по Романовскому-Гимзе Окраска по Романовскому-Гимзе. Сущность метода заключается в избирательном окрашивании базофильных и оксифильных элементов клеток. Окраска проводится следующим способом: 1. Мазок фиксируют химическим способом. 2. Раствор краски, приготовленный непосредственно перед употреблением, наносят на мазок, через 1 ч краску сливают. 3. Промывают мазок водой. 4. На мазок наносят 10 % раствор метиленовой синей, на 20-30 сек. 5. Препарат промывают водой. При этом способе окраски цитоплазма окрашивается в голубой цвет, ядра клеток и зернистость в красно-фиолетовый. Это основной метод изучения морфологии паразитов крови и форменных элементов крови. Вывод: Для окраски бактерийных препаратов широко применяются различные методы окраски. Их применение позволяет судить о форме, размере, расположении микробных клеток, а также особенностях их химического состава. Окраска бактерий может применяться в фиксированных микробных препаратах и прижизненно. Литература: 1. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. 2. А.А. Воробьев, В.В. Зверев , А.С. Быков.- М.: МИА.- 2008. -272 с. 3. Д.А. Васильев А.А. Щербаков Л.В. Карпунина С.Н. Золотухин, И.Г. Швиденко. Методы общей бактериологии Учебно-методическое пособие. Ульяновской ГСХА. - 1998. 4. А.С.Лабинская, Н.Н.Костюкова, С.М.Иванова. Частная медицинская микробиология и этиологическая диагностика инфекций. М.: Издательство БИНОМ. - 2012. -1152 с. 5. Методы общей бактериологии (в трех томах). Под ред. Ф.Герхардта и др. Москва: Мир.- 1983. |