Практика по искусственному осеменению. Тема Работа искусственного осеменения. Племенные предприятия
 Скачать 332.52 Kb.
|
|
Задание № 2. Разбавление спермы быка, хряка, барана. Разбавление спермы быка. Разбавление и расфасовку спермы быков производят только в том случае, если концентрация спермиев в 1 мл спермы не ниже 0,5 млрд., их подвижность— не ниже 8 баллов, а количество микробных тел — не более 5000 при коли-титре 1 : 10. Время с момента получения спермы от быка до разбавления не должно превышать 10, мин. Разбавители для спермы нельзя хранить дольше 3 - 4 ч. Дистиллированную или бидистиллированную воду, предназначенную для приготовления разбавителей, кипятят перед употреблением. Все вещества, входящие в состав разбавителей, должны быть безвредными для спермиев. В качестве бактерио-статических веществ используют спермосан-3 (пенициллин, стрептомицин, стрептоцид). На 100 мл разбавленной спермы берут до 75—95 тыс. ед. пенициллина и стрептомицина и 0,1—0,2 г стрептоцида. В горячей воде растворяют стрептоцид, сахар, лимоннокислый натрий и гликокол. Желток добавляют в среду при 35 - 40°. Антибиотики растворяют в воде при 30°. В момент разбавления температура разбавителя — 30—35°. Сначала сперму разбавляют в соотношении 1:1, 1 :2 и после 5 - 10-минутной выдержки разбавляют дополнительно до требуемого объема. Разбавление и хранение спермы быка при 2 - 4°. Такая температура поддерживается в пищевых вакуумных или специальных термосах, в которых содержится тающий лед. Пенициллин кристаллический (калиевая или на- 75 - 100 триевая соль) для внутримышечных инъекций, тыс. ед. Стрептомицин сернокислый или солянокислый для 75—100 внутримышечных инъекций, тыс. ед. Для разбавления спермы молочно-желточной средой молоко получают от здоровых коров (через 2 месяца после отела и за 1 месяц до запуска), процеживают его в стеклянную или эмалированную посуду и подогревают до кипения, предотвращая выпаривание. Затем молоко охлаждают до 30 - 35° и фильтруют. К 100 мл такого молока добавляют 20 мл желтка свежих куриных яиц, а также антибиотики и стрептоцид. Разбавленную сперму разливают во флаконы (ампулы, пробирки и пр.) и выдерживают при комнатной температуре (18 - 25°) в течение 20 - 30 мин, считая с момента разбавления. Затем емкости со спермой помещают в бытовой электрохолодильник или термос со льдом. Для предотвращения температурного шока спермиев используют термоизолирующие приспособления (вату, породой и пр.) с тем, чтобы сперма охладилась до 2 - 4° в течение 3 - 4 ч. В термосе должно быть не менее емкости тающего льда. Флаконы со спермой герметизируют в полиэтиленовых либо резиновых упаковках. Упаковка со спермой может находиться на поверхности льда либо обкладываться льдом со всех сторон. По мере таяния льда талую воду нз термоса сливают и добавляют лед. При работе со спермой следует помнить, что на жизнеспособность спермиев влияют следующие факторы: - свет - солнечные лучи убивают спермиев, поэтому сперму надо хранить в темном месте, а работать с ней при рассеянном (неярком) дневном или искусственном свете; лучше иметь окно и электролампы с матовым белым стеклом. Стол, за которым работают со спермой, устанавливают вне зоны прямого освещения; температура - нагревание выше 42 °С и охлаждение до минус 1 °С опасны для спермиев. Сперму следует хранить при установленных температурах,не допуская резкого ее охлаждения или нагревания, а работу с ней проводить в лаборатории при комнатной температуре; вода - губительно действует на спермиев, в связи с чем сперму необходимо помещать в сухую, чистую, герметически закрываемую посуду, а при хранении в тающем льду или при появлении в термосе холодной воды упаковывать так, чтобы вода не могла проникнуть в однодозовую пробирку (флакон); спирт - вызывает гибель спермиев, поэтому инструменты и посуду после обеззараживания спиртом следует обмывать 1%-ным стерильным раствором бикарбоната натрия или 2,9%-ным раствором лимоннокислого натрия. Запрещается хранить медикаменты и дезинфицирующие средства, не предусмотренные для использования на пунктах по осеменению животных. Курить в помещении, где хранят сперму, запрещается. На пункты искусственного осеменения для использования сперму доставляют с племпредприятия (станции по искусственному осеменению животных) и хранят одним из способов. Сперму, сохраняемую при низких температурах, замораживают на племпредприятиях при минус -196 °С в соломинках, необлицованных и облицованных гранулах. При работе со спермой следует соблюдать следующие правила: - не допускается преждевременное оттаивание спермы и повторное ее замораживание. Кратковременное повышение температуры, например при перекладывании расфасованной спермы из стационарного хранилища в транспортный сосуд Дьюара или из одного сосуда в другой, оказывает отрицательное воздействие на ее качество. До использования сперму необходимо постоянно хранить в жидком азоте; - перед использованием оператор в защитных очках и перчатках извлекает дозу спермы (соломинку или гранулу) из сосуда Дьюара и оттаивает, предварительно подготовив все необходимые инструменты и оборудование для этой работы. Сперму, сохраняемую при 2 – 4 °С (кратковременное хранение), после взятия у производителей разбавляют и постепенно охлаждают, затем отправляют на пункты упакованные в одноразовые пробирки или ампулы (флаконы) в термосе со льдом. При транспортировке лед должен находиться в термосе под и над упаковкой со спермой. Получив термос со спермой, нужно: - проверить количество и расположение льда, слить накопившуюся воду из термоса, проконтролировать качество упаковки пробирок или ампул (флаконов), дополнить термос тающим льдом, обеспечив дальнейшее хранение спермы при температуре не выше 4 °С. Пробирки, ампулы или флаконы должны быть в теплоизолирующей обертке (ватно-марлевая слоем 1 - 2 см или поролоновая) и в водонепроницаемых полиэтиленовых мешочках; - использовать сперму необходимо в течение 3 суток с момента взятия ее у быка, при этом подвижность спермиев на третьи сутки хранения должна быть не ниже 7 баллов; - перед осеменением сперму осторожно перемешать вращением пробирки, ампулы или флакона и проверить подвижность спермиев под микроскопом при температуре нагревательного столика 38 °С. Оттаивание спермы в соломинках. Правой рукой поднимают крышку сосуда Дьюара и кладут рядом, а левой - поднимают пластмассовый стакан из канистры (со спермой нужного быка) до нижнего края горловины емкости. Правой рукой берут пинцет и концы его охлаждают в жидком азоте до прекращения кипения. Охлажденным пинцетом вынимают одну соломинку, быстро и энергично стряхивают остатки жидкого азота и немедленно переносят в воду для оттаивания. Канистру с оставшимися соломинками опускают на дно сосуда, который сразу же закрывают крышкой. Оттаивание спермы в соломинках проводят в водяной бане при 38 °С в течение 10 с. Затем соломинку вынимают, насухо протирают стерильной салфеткой. Одновременно оттаивают не более 2 доз при условии немедленного их использования (в течение 10-15 мин). Размеры водяной бани должны соответствовать размерам соломинок (высота не менее 150 мм, ширина 100 - 120 мм). Качество спермы определяют по общепринятой методике. Оттаивание спермы в гранулах. Гранулы бывают трех видов: необлицованные малого объема 0,1 - 0,2 мл (с высокой концентрацией спермиев при разбавлении дозы перед осеменением изотоническим раствором лимоннокислого натрия); необлицованные большого объема 0,5 - 1,0 мл (со средней концентрацией спермиев, не требующей при оттаивании разбавления дозы раствором цитрата натрия); облицованные в полимерную оболочку объемом 0,25 мл. Для оттаивания гранул объемом 0,1 - 0,2 мл необходимо иметь: стеклянные стерильные флаконы из-под пенициллина, 2,9 %-ный раствор лимоннокислого натрия промышленного производства, расфасованного по 1 мл в ампулах вместимостью 3 мл; водяную баню вместимостью не менее 1 л; мерные стеклянные пипетки на 5 - 10 мл (по одной); пинцет анатомический длиной 25 - 30 см. Для оттаивания гранул объемом 0,1 - 0,2 мл берут 1-2 ампулы или флакона с раствором лимоннокислого натрия и ставят в водяную баню (38°С) на 2 - 3 мин. Быстро (за 4 - 5 с) подтягивают к горловине сосуда Дьюара канистру (со стаканом) или матерчатый мешочек с гранулами, извлекают стерильным и охлажденным в жидком азоте пинцетом нужное число их и опускают в подготовленные флаконы или ампулы с раствором лимоннокислого натрия. Ампулы или флаконы с гранулами спермы оттаивают 8-10 с и сразу же вынимают из водяной бани, не допуская дальнейшего нагревания спермы, вытирают насухо полотенцем или марлевой салфеткой и ставят в штатив. У подогретой до 18-25 °С спермы определяют качество. От оттаивания до введения спермы животному должно проходить не более 10 - 15 мин. Оттаивание гранул объемом 0,5 - 1,0 мл проводят без добавления раствора лимоннокислого натрия. Флакон погружают в водяную баню, подогревают до температуры воды 38 °С, выдерживают 2 - 3 мин, затем в него вносят 2 гранулы замороженной спермы и дают постоять до перехода их в жидкую фазу. Флакон со спермой извлекают из водяной бани, вытирают насухо наружную поверхность и оценивают качество спермы. Сперму в облицованных гранулах объемом 0,25 мл оттаивают следующим образом. Облицованную гранулу извлекают из сосуда Дьюара пинцетом с широкими браншами, быстро помещают в водяную баню с температурой 38 °С и оттаивают в течение 8 - 10 с. Затем насухо протирают гранулу стерильной салфеткой и проверяют ее на герметичность путем легкого сжатия между двумя пальцами. После этого сперму оценивают на подвижность. Разбавление спермы хряка. Для санации необходимо применять антибиотики и белый стрептоцид. Этой средой сперму хряка, в зависимости от концентрации спермиев, разбавляют в 2—6 раз, с таким расчетом, чтобы в 1 мл содержалось не менее 50 млн. биологически полноценных спермиев. На 1000 мл дистиллированной р.оды берут пенициллина 750 тыс. ед., стрептомицина 300 тыс. ед., белого стрептоцида 2 г или спермосана 250—300 тыс. ед. Среды приготавливают также из сухой заготовки, в состав которой входят все указанные выше компоненты. Сперму после разбавления перечисленными средами рекомендуется хранить и транспортировать в течение трех суток, чтобы сохранить ее высокую оплодотворяющую способность. Для приготовления глюкозо-хелато-цитратно-сульфатной среды или глюкозо-хелато-цитратной среды в чистую химическую колбу наливают требуемый объем прокипяченной дистиллированной воды, добавляют к ней все выше перечисленные компоненты, за исключением антибиотиков, и размешивают. Закрыв колбу бумажным колпачком, смесь кипятят в водяной бане 5 - 10 мин, охлаждают до 40 - 45° и добавляют в нее антибиотики и белый стрептоцид. В чистую сухую колбу насыпают навески глюкозы и химически чистого хлористого натрия и наливают в нее прокипяченную и остуженную до 35° дистиллированную воду. Раствор тщательно размешивают и в теплом виде используют при фракционном способе осеменения свиней. Приготовив среду, проверяют ее качество: берут каплю неразбавленной, проверенной на активность спермы, смешивают с каплей среды и просматривают под микроскопом, в случае резкого снижения активности спермиев среду бракуют и готовят новую. Сперму хряка разбавляют средами при активности спермиев не ниже 8 баллов с концентрацией не ниже 100 млн. спермиев в 1 мл. Перед разбавлением посуду со средой нагревают в термостате или водяной бане до 30 - 35°. Сперму хряка разбавляют через 20 - 30 мин после получения и определяют ее качество. Перед разбавлением сперму фильтруют и определяют ее объем в теплой мензурке. Разбавляют сперму хряка в стерильных колбах. Среду приливают к ней небольшими порциями, осторожно и смешивают после каждой добавленной порции. После разбавления спермы ее проверяют под микроскопом на активность спермиев. Разбавление спермы барана. На племпредприятиях (станциях) и основных пунктах искусственного осеменения к хранению и транспортировке допускают сперму барана с оценкой не ниже Г-9 (до разбавления). В зависимости от концентрации спермиев в эякуляте сперму разбавляют в 2—3 раза специально приготовленными средами, чтобы повысить выживаемость спермиев и увеличить число осемененных животных. Если на племпредприятиях (станциях) и пунктах искусственного осеменения нет готового препарата синтетических сред, то разбавитель готовят по пропнеи: к 100 мл дистиллированной воды добавляют 2,8 г цитрата натрия трехзамещенного пятиводного и 0,8 г глюкозы медицинской химически чистой (или такого же количества фруктозы, что повышает выживаемость спермиев). Чтобы предотвратить рост микроорганизмов в сперме, в среду добавляют антибиотики и белый стрептоцид, предназначенные для медицинских целей и проверенные на токсичность (безвредность). На 100 мл раствора вносят следующее количество антибиотиков и стрептоцида: Пенициллина кристаллического (натриевая или 50—75 тыс. ед. калиевая соль) Стрептомицина серно- или солянокислого 50—75 тыс. ед. Стрептоцида белого растворимого химически чистого 0,1—0,2 г. Затем в раствор добавляют желток свежего куриного яйца из расчета 20 мл на 100 мл среды. Желток должен быть ярко-оранжевого цвета. Приготовленную среду можно хранить не более 4 ч. Промышленность изготовляет препарат под названием «спермосап» для санаций (обеззараживания) спермы, содержащий пенициллин, стрептомицин и белый стрептоцид. Препарат следует применять в соответствии с заводской инструкцией. Разбавляют сперму в спермоприемнике. На одну часть спермы добавляют от одной до двух частей среды. После разбавления сперму оценивают под микроскопом. Если активность спермиев снижается, среду бракуют и готовят заново. Во избежание холодового удара среду подогревают до 25—30°. После разбавления сперму разливают доверху в сухие стерильные пробирки (флаконы) емкостью 5—8 мл с корковыми пробками. Расфасованную в пробирки (флаконы) сперму выдерживают при комнатной температуре в течение 10 мин, а затем пробирки со спермой, плотно закрытые пробками, вкладывают в гнезда поролонового вкладыша, который вместе с ордером помещают в полиэтиленовый мешочек, переносят их в термос с тающим льдом и ставят на хранение или отправляют в обслуживаемые хозяйства. В термос поверх полиэтиленового мешочка кладут небольшой слой льда. Сперму барана охлаждают до температуры 2—4° постепенно, по следующему режиму: Пробирки (флаконы) со спермой нумеруют. В накладной (ордер) против каждого номера указывают номер производителя, дату и час получения спермы, ее объем и другие данные. Термосы со спермой можно перевозить любым видом транспорта, в котором обеспечивается сохранность спермы от перегрева, механических повреждений, перевертывания и встряхивания. Охлажденную сперму барана используют в течение 24 ч. Оплодотворяемость овец выше, если охлажденная сперма барана хранилась не более 15—18 ч. В этом случае сперму от производителей получают на племпредприятиях (станциях) во второй половине дня (от 17 до 20 ч) и сейчас же отправляют в обслуживаемые хозяйства с тем, чтобы она была использована на пунктах искусственного осеменения колхозов и совхозов утром следующего дня. Если по условиям работы пунктов и хозяйств время, затрачиваемое на перевозку и использование спермы, не превышает 2—3 ч с момента се получения пелесообразио ие охлаждать сперму до +2—4°, а перевозить ее в разбавленном виде при комнатной температуре около +17—18°. При этом ВНИИОК рекомендует разбавлять сперму не глюкозо-цитратной, а глюкозо-фосфатной средой, приготовленной по рецепту: вода дистиллированная — 100 мл, натрий фосфорнокислый двухзамещенный 12-водный—2,08 г,калий фосфорнокислый однозамещенный — 0,08 г, глюкоза безводная медицинская— 3,2 г. При проведении работы на пунктах с температурой ниже +18° на 100 мл разбавителя добавляют 20 мл желтка свежего куриного яйца. Задание № 3. Хранение и транспортировка спермы от быка, хряка, барана. Хранение и транспортировка спермы от быка. Во время эякуляции к содержимому эпидидимиса примешиваются секреты придаточных половых желез. Они изменяют рН среды, насыщают плазму электролитами (соли натрия, калия, магния); последние вызывают разрушение липопротеидного покрова спермиев. Отмеченные сдвиги обуславливают переход спермиев из анабиоза в активное состояние; это, в свою очередь, приводит к быстрой их гибели. Непосредственными причинами сокращения срока жизни спермиев вне организма являются: - истощение источников энергии в спермальной плазме и самих спермиях; - интоксикация продуктами жизнедеятельности спермиев; - разрушение липопротеидного покрова, набухание мембран и снятие электрического заряда; - отрицательное действие находящихся в сперме и размножающихся в ней микроорганизмов; - температурные перепады. Следовательно, для продления срока жизни спермиев во внешней среде требуется: - уменьшить активность спермиев; - обеспечить их дополнительными источниками энергии; - защитить мембраны спермиев от разрушения; - предотвратить накопление токсических продуктов метаболизма; - блокировать размножение находящихся в сперме микроорганизмов; - повысить устойчивость спермиев к температурным перепадам и криогенным воздействиям. Это достигается применением специальных разбавителей. Помимо защитных функций, разбавление спермы облегчает дробление эякулята на порции (спермодозы). Это особенно существенно для животных с маточным типом естественного осеменения (свиньи, лошади), поскольку спермодоза наряду с нормативным числом подвижных спермиев должна быть достаточно объемной. Синтетические и биологические среды для хранения спермы Разбавители могут быть биологическими и синтетическими (искусственными) средами. Из биологических сред использовалось коровье молоко, кокосовое молоко, 7%-ный раствор пчелиного меда, а также томатный сок. Применяемые в настоящее время разбавители спермы сельскохозяйственных животных относят к синтетическим средам. Синтетическая среда обычно состоит из трех и более компонентов, например, глюкозо-цитратно-желточная среда (ГЦЖ). Основные компоненты разбавителей и их роль В состав большинства разбавителей входят следующие компоненты: Сахара (глюкоза, лактоза). Служат источником энергии для спермиев. Помимо этого они участвуют в поддержании осмотического давления, понижают электропроводность среды, предохраняют спермии от потерь электрического заряда. Цитрат натрия. Создает буферность среды, нейтрализует конечные продукты жизнедеятельности спермиев, связывая ионы кальция и тяжелых металлов. Трис-буфер (2-амино-2-гидроксиметил-1, пропандиол). Устойчиво удерживает первоначальную рН среды, обладает осмотическим действием, устраняет явления дыхательного ацидоза в спермиях. Трилон Б (хелатон, двунатриевая соль этилендиамин-тетрауксусной кислоты). Образуя временные связи с ионами кальция, тормозит активность протеаз, АТФаз и других ферментов, участвующих в метаболических процессах в спермиях. ЭДТА (тринатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты). Подобно трилону Б, образует хелатные комплексы с ионами кальция, тем самым блокирует активность ферментных систем спермиев. Сульфат аммония. Предохраняет от разрушения сульф-гидрильные группы в мембранах спермиев, задерживает выход электролитов в окружающую среду. Глицерин. Обладает криопротекторными свойствами, легко проникает внутрь спермия, понижает температуру замерзания и препятствует образованию кристаллов связанной воды, что позволяет избежать повреждений клеточных структур. Благодаря высокой гидрофильности препятствует дегидратации цитоплазмы. Желток куриных яиц. Содержит лецитин и липопротеины, которые создают на поверхности спермия адсорбционный слой, предохраняющий его от холодового шока. Спермосан ППК. Комплексный антибактериальный препарат,состоящий из пенициллина, полимиксина, канамицина. Такая комбинация эффективно тормозит размножение микроорганизмов в сперме. В состав некоторых разбавителей входят антиоксиданты (токоферол), загустители (гуммиарабик), свободные аминокислоты (гликокол, аргинин) и другие компоненты. Санитарно-гигиенические требования к приготовлению сред и разбавлению спермы. Для приготовления сред и разбавления спермы отводят специально оборудованное лабораторное помещение со средствами стерилизации воздуха и предметов (бактерицидные лампы). Колбы, мерные цилиндры, пипетки, бумажные фильтры и другие принадлежности накануне взятия спермы стерилизуют в сушильном шкафу при температуре 130 - 150 °С; перед использованием их переносят в термостат с постоянной температурой 37 – 36 °С. Для приготовления сред используют дистиллированную воду, имеющую рН 6,8-7,0. Пригодны только химически чистые и проверенные на безвредность для спермиев сухие компоненты. Их хранят в герметически закрытых стеклянных банках в темном месте. Яйца используют только свежие (со сроком хранения до 7 суток), полученные от здоровых кур при выгульном их содержании. Хранение спермы при температуре +2…+5 °С Сперму,сохраняемую при +2…+5 °С,разбавляют глюкозоцитратножелточной,молочно-желточной,глюкозоцитратножелточной с хелатоном и аргинином, гликоколцитратножелточной средами. После разбавления сперму расфасовывают в одноразовые стерильные полиэтиленовые ампулы, полиэтиленовые пробирки или во флаконы из-под антибиотиков; их обертывают теплоизолирующим материалом (для постепенного охлаждения), заключают в полиэтиленовый пакет. Пакеты с расфасованной спермой вкладывают в широкогорлый термос со льдом или помещают на полку бытового холодильника. Сперму быков и хряков используют в течение трех суток, барана – в течение суток. Хранение спермы при температуре +16…+20 °С Вандемарк и Шарма из Иллинойского университета (США) в 1957 г. сообщили о разработанном ими методе краткосрочного хранения спермы быков без охлаждения. Для иммобилизации спермиев они применяли угольную кислоту, которую получали посредством насыщения углекислым газом специального разбавителя (ИВТ) до величины рН 6,3-6,35. Разбавленную сперму хранили в запаянных стеклянных ампулах, заполненных на 2/3 объема, при 18-20°С. Сперма была пригодна для осеменения в течение 3 суток. В среде, предложенной А.А. Зальцманом (ТВТ-12), угольная кислота была заменена на лимонную кислоту. Краткосрочное хранение спермы при плюсовых температурах путем блокирования метаболических процессов в сперми-ях основано на использовании трилона Б (хелатона). Среды с хелатоном получили широкое применение в практике искусственного осеменения свиней. Наиболее эффективной оказалась глюкозо-хелато-цитратно-сульфатная среда (ГХЦС-среда). Разбавленную ГХЦС-средой сперму хранят и используют в течение 3 суток. Замораживание и хранение спермы при температуре -196°С в жидком азоте. Для замораживания пригодна сперма быка с активностью спермиев не ниже 8 баллов и концентрацией их не менее 0,8 млрд в 1 мл. Замораживают сперму быков в гранулах (0,1-0,2 мл). Эта расфасовка обеспечивает более эффективное использование сосудов Дьюара для хранения спермы, несколько лучшую выживаемость и оплодотворяющую способность спермиев. После оценки сперму разбавляют средой № 1 (11%-ный раствор лактозы – 63 мл, желтка – 30 мл, глицерина – 7 мл) в соотношении 1:1, затем средой № 2 (11%-ный раствор лактозы – 81,5 мл, желтка – 15 мл, глицерина – 3,5 мл), доводят степень разбавления до нужного показателя. Для замораживания спермы гранулами по 0,5-1 мл используют среду: вода дистиллированная – 100 мл, лактоза – 11,5 г, желток куриного яйца – 20 мл, глицерин – 5 мл. После разбавления сперму охлаждают при +2…+5оС в течение 4-7 ч. Затем берут фторопластовую пластину, на которой с двух сторон имеется по 300-324 лунки для накапливания спермы, обеззараживают ее с помощью бактерицидных ламп, опускают в широкогорлый сосуд с жидким азотом и охлаждают до тех пор, пока прекратится кипение азота. Охлажденную пластинку приподнимают над поверхностью жидкого азота и при помощи шприца наносят разбавленную сперму объемом по 0,1 мл в каждую лунку. Спустя 2-3 минут после нанесения спермы в последнюю лунку, пластинку погружают в жидкий азот на 1-2 мин. После этого, вынув пластинку, замороженные гранулы собирают в пластмассовые коробочки с небольшими отверстиями (или в марлевые мешочки) и хранят их в жидком азоте. Главным недостатком замораживания спермы в гранулах является их незащищенность. Под руководством Ф.И. Осташко разработана Харьковская технология Транспортируют сперму и хранят на пунктах искусственного осеменения в сосудах Дьюара различной емкости (от 4 до 50 л жидкого азота). Азот доставляется на пункты искусственного осеменения в транспортных резервуарах, установленных на автомобилях высокой проходимости. Размораживание спермы, хранящейся в жидком азоте (при температуре -196°С). Хранение и транспортировка спермы от хряка. Сперма хряков разбавленная, сохраненная: Разбавленная сперма может храниться на предприятии-изготовителе и предприятии-потребителе не более3-х суток при темп. 16 – 20 °С Разбавленная сперма должна храниться в стеклянных сосудах не герметически закрытых, либо в приборах для осеменения в герметически закрытом состоянии Транспортировка должна производиться в термоконтейнерах при температуре 16 – 18 °С На пунктах искусственного осеменения сперма должна храниться в термобоксах, бытовых холодильниках с поддержанием температуры 16 – 18 °С Замороженная сперма должна храниться предприятии-изготовителе и предприятии-потребителе. Замороженную сперму хранят в сосудах Дьюара, закрывающихся канистрах, тубах (погруженные в жидкий азот) Замороженная сперма транспортируется в сосудах с жидким азотом при температуре -196 °С Хранение и транспортировка спермы от барана. Главное преимущество искусственного осеменения как зоотехнического метода –возможность максимально использовать высокоценных производителей путём осеменения многих самок одним эякулятом. Для этого сперму разбавляют специальными средами, чтобы увеличить объём, продлить срок переживаемости спермиев вне организма и сохранить их оплодотворяющую способность. Методы разбавления и хранения спермы основаны на снижении обменных процессов между половыми клетками и плазмой спермы, на создании условий, в которых половые клетки впадают в состояние анабиоза. Способы подготовки к хранению спермы для разных видов животных неодинаковы и основаны на особенностях спермы в физиологическом и химическом аспектах. 1. Сперма производителей не одинакова по степени разбавления секретами половых желёз. По этому признаку сперму подразделяют на две группы: А) сперма быка, барана и козла разбавляется секретами незначительно; Б) сперма жеребца и хряка разбавлена секретами в значительной степени. В этой связи и концентрация спермы различна (баран, козёл – 2-5 млрд/мл, бык – 1-2 млрд/мл, жеребец, хряк 0,1-0,2 млрд/мл). 2. По способу получения энергии сперма у производителей также подразделяется на две группы: А) сперме барана, козла и быка присущ метод получения энергии путём гликолиза; Б) энергия для спермиев жеребца и хряка образуется в результате дыхания. 3. По проявлению анабиоза сперма также подразделяется на два вида: А) Анабиоз спермиев барана, быка, козла наступает при повышении кислотности – рН ниже 6,8; Б) анабиоз спермиев жеребца, хряка наступает при рН свыше 7,4. Следовательно, на основе биохимических особенностей спермы у производителей и разработаны методы разбавления и хранения. Требования к разбавителям. Для сохранения спермы вне организма используют специальные синтетические среды. Среды увеличивают объём спермы, что имеет важное практическое значение для интенсивного использования производителей, а также защищают спермии от неблагоприятных воздействий внешней среды и поддерживают их биологическую полноценность. Разбавители должны иметь определённые физико-химические свойства и такую концентрацию составных частей, при которой осмотическое давление было бы наиболее благоприятным для жизни спермиев того или иного вида животных. При приготовлении среды должна соблюдаться строгая дозировка компонентов среды. В качестве основы возможно использование только бидистиллированной воды с рН 5,0-7,0. Качество компонентов имеет существенное значение, поэтому применяют только те из них, которые имеют этикетки с обозначением наименования предприятия-производителя, названия и степени его чистоты (ХЧ или ЧДА), номера контрольного анализа. Все исходные компоненты должны быть проверены на безвредность для спермиев в соответствии с утверждёнными методиками контроля их качества. Ингредиенты, входящие в состав разбавителя, должны отвечать требованиям. Занятие № 10. Тема: Техника осеменения коров и телок различными методами. Цель: изучить различные техники осеменения коров и телок. Задание: 1. Анатомия и физиология половых органов самки. 2. Маноцервикальный способ осеменения. 3. Ректоцервикальный способ осеменения. 4. Визоцервикальный способ осеменения. 5. Эпицервикальный способ осеменения. 6. Обоснование и способы искусственного осеменения самок с влагалищным и маточным типами осеменения. Задание № 2. Маноцервикальный способ осеменения. Мано-цервикальный способ заключается в том, что сперму при помощи полиэтиленовой ампулы, соединённой со стерильным укороченным полистироловым катетером, вводят глубоко в шейку матки коровы непосредственно рукой, защищенной стерильной полиэтиленовой перчаткой. Катетер представляет собой трубку с оплавленным концом из прозрачного полистирола или полиэтилена, не токсичных для спермы; длина его 75 мл, наружный диаметр 4,8 мм. Катетеры упаковывают в полиэтиленовые перчатки и стерилизуют; остальные предметы те же, что и при ректо-цервикальном способе. Ампулу со спермой извлекают из термоса, протирают тампоном, смоченным 96%-ным спиртом, осторожно встряхивают, чтобы хорошо перемешать в ней сперму. Отрезают колпачок стерильными ножницами, выдавливают каплю спермы на предметное стекло для определения активности спермиев, затем соединяют ампулу с катетером, не вынимая его из упаковочного полиэтиленового пакетика. После туалета наружных половых органов коровы надевают перчатку, смачивают её стерильным физиологическим раствором, осторожно вводят руку во влагалище коровы и пальцами делают лёгкий массаж шейки матки. Вызвав сокращение матки, не вынимая кисти руки из влагалища, другой рукой подают подготовленную для осеменения ампулу со вставленным катетером. Для удобства в работе катетер располагают вдоль среднего пальца и прижимают большим. Не меняя положения ампулы, вводят кисть руки до шейки матки и вставляют под контролем указательного пальца катетер на глубину 1,5-2 см. в канал шейки матки. Массируя шейку матки кончиками пальцев, подталкивают ампулу ладонью до тех пор, пока катетер полностью (на 7см) не войдет в канал шейки матки. После этого приподнимают ампулу вверх на 2 см (угол наклона 15-20°) и выдавливают из неё сперму большим и указательным пальцами. Сдавливать ампулу нужно вначале у донышка, затем перемещать давление по направлению к шейке ампулы, чтобы полностью выдавить сперму из ампулы и катетера. Этот приём необходимо предварительно отрабатывать. Шейка матки при массаже периодически сокращается, поэтому сперму следует выдавливать из ампулы в момент расслабления шейки матки и всасывающего действия матки. Если шейка матки перестала сокращаться, следует осторожно подвигать катетером из стороны в сторону или назад и вперёд. При возобновлении сокращений сперма выдавливается легко. После введения спермы в канал шейки матки, не разжимая ампулы, надо осторожно вынуть катетер и помассировать шейку матки не вынимая руку из влагалища. Задание № 3. Ректоцервикальнный способ осеменения. Перед осеменением корову фиксируют в станке и делают туалет (обмывают наружные половые органы с помощью тампона, чистой тёплой водой из кружки Эсмарха, орошают раствором фурацилина или фуразолидона, насухо вытирают) наружных половых органов. Затем моют руки и дезинфицируют их раствором фурацилина или спиртом, обтирая тампоном, берут пакетик с пипетками, протирая его тампоном, смоченным 96%-ным спиртом, надрезают стерильными ножницами или прорывают концом пипетки уголок пакета. Выдвинув пипетку на 1/3 длины, соединяют её с пустой стерильной ампулой, у которой предварительно срезают колпачок стерильными ножницами, или со стерильным шприцем при помощи резиновой или полиэтиленовой муфты, или с баллончиком, извлекают пипетку полностью. Надорванный пакетик с пипетками запаивают над пламенем спиртовки или спички сразу же после извлечения каждой пипетки. Взяв ампулу со спермой протирают её тампоном, смоченным 96%-ным спиртом, срезают со стороны дна, после чего всасывают из неё сперму в пипетку, сжимая и отпуская пустую ампулу, соединенную с ней. Если сперма доставлена или разморожена (гранулы) во флаконах, то из флакона в пипетку набирают её 0,5 - 1,0 мл (сперму перед всасыванием в пипетку нужно смешать осторожным вращением ампулы или флакона). Когда доставили в соломинках-капиллярах (пайеттах), то её размораживают, затем открытый конец капилляра с помощью полиэтиленовой муфты присоединяют к укороченной полистироловой пипетке, соединённой со шприцем, и прокалывают свободный конец стерильной иглой. Подготовленные для осеменения инструменты кладут на стерильную подставку. Каплю спермы выдавливают на предметное стекло, сверху кладут покровное и определяют под микроскопом активность. Когда всё готово, большим и указательным пальцами одной руки, одетой в полиэтиленовую перчатку, раскрывают у животного срамные губы и не касаясь пипеткой наружных половых органов, вводят её другой рукой во влагалище до соединения со шприцем (ампулой, баллончиком). После введения пипетки во влагалище, руку в полиэтиленовой перчатке увлажняют тёплой водой и вводят в прямую кишку, несколько отведя пипетку другой рукой в сторону. Если пипетка на своём пути к влагалищной части шейки попадает в складку влагалища, то шейку матки рукой, введенной в прямую кишку, подвигают несколько вперед (к голове животного), что приводит к натяжению стенок влагалища и распрямлению складок. Убедившись, что конец пипетки лежит вблизи отверстия шейки матки, приступают к исследованию матки и яичников. Если при исследовании устанавливают беременность или отмечают ненормальности в половых органах, то осеменять животное не следует. Окончательный диагноз должен поставить ветеринарный специалист. Следует иметь в виду, что шейку матки нельзя фиксировать в период напряжения кишечной стенки, так как возможно травмирование её слизистой оболочки или прободение. Ослабление напряжения достигается лёгким поглаживанием слизистой оболочки. После исследования, влагалищную часть шейки матки фиксируют всей кистью руки. При этом отверстие шейки матки нащупывают мизинцем или большим пальцем и под его контролем направляют пипетку. Убедившись, что пипетка попала в отверстие, осторожно лёгкими вращательными движениями, чтобы не повредить поперечных складок слизистой оболочки, шейку матки как бы натягивают на пипетку. Введя пипетку на глубину 6-8 см, медленно надавливают на ампулу или поршень шприца-катетера, одновременно несколько оттягивая пипетку назад. Затем, не разжимая ампулу пальцами или не вытягивая поршень, пипетку осторожно извлекают из влагалища, а руку из прямой кишки. Нельзя при фиксации захватывать тело матки, а не саму шейку матки; влагалищная часть шейки матки в этом случае опускается вниз, и конец пипетки трудно ввести в её отверстие. При отсутствии одноразовых пластмассовых инструментов можно применять стеклянные пипетки с резиновыми баллончиками и резиновые перчатки. Все эти предметы после употребления тщательно отмывают и стерилизуют в кипящей воде. Задание № 4. Визоцервикальный способ осеменения. Для подготовки шприца – катетера к использованию перед осеменением необходимо иметь четыре нумерованные баночки с притертыми пробками. В баночке № 1, 3, 4 наливают свежеприготовленный стерильный 1%-ный раствор хлористого натрия. А в баночку № 2 - 70%-ный спирт – ректификат. Кроме того, надо приготовить баночку со стерильными марлевыми салфетками и баночку с полувлажными ватными тампонами, пропитанными 96%-ным спиртом, для фламбирования влагалищных зеркал, обработки наружной поверхности шприца-катетера и других инструментов. Перед началом работы вымытый и обеззараженный шприц-катетер отмывают от дезинфектора (70%-го спирта ректификата), набирая в шприц 3-4 раза 1%-ный раствор хлористого натрия из баночки № 3, а затем № 4. Ухватив канюлю шприца стерильной марлевой салфеткой, движением поршня удаляют остатки хлористого натрия и набирают сперму для осеменения. Раствор в баночках № 3 и № 4 должен быть теплым (38 - 40°С) для нагревания шприца перед наполнением его спермой. Остатки физиологического раствора из шприца можно удалить, держа его тонким концом вниз и передвигая несколько раз поршень. Набрав сперму, шприц поворачивать вертикально катетером вверх, движением поршня вниз втягивает сперму из катетера, а затем продвигает поршень вверх, вытесняют из цилиндра воздух до появления капли спермы на конце катетера. Корову фиксируют в специальном станке и перед осеменением обмывают наружные половые органы с помощью тампона, чистой теплой водой из кружки Эсморха, орошают раствором фурацилина или фуразолидола, насухо вытирают, раскрывают половые губы и вводят обеззораженое фламбированием, охлаждённое стерильным физиологическим раствором теплое влагалищное зеркало (обычно с осветителем). Влагалищное зеркало вводят так, чтобы ручки были направлены в сторону, затем поворачиваем ручки вниз и открываем влагалищное зеркало. Обнаружив визуально шейку матки, подготовленный шприц-катетер или осеменительную пипетку с баллончиком вводят через раскрытое влагалищное зеркало в шейку матки коровы на глубину 4-6 см., слегка оттягивают влагалищное зеркало назад и медленно, нажимая на поршень или баллончик, вводят сперму. После этого шприц-катетер или осеменительную пипетку с баллончиком, а затем и влагалищное зеркало извлекают, предварительно провернув влагалищное зеркало в исходное положение – ручки в сторону с не полностью сомкнутыми ветвями (с тем, чтобы не ущемить слизистую оболочку влагалища). По окончании работы шприц-катетер с начало тщательно отмывают от спермы (5-6 раз) раствором из баночки № 1, после чего дезинфицируют кипячением или 70%-ным спиртом из баночки № 2; спирт оставляют в цилиндре шприца-катетера и в таком состоянии шприц-катетер помещают на хранение в специальный шкаф. При каждом промывании растворы из шприца-катетера выливают. Не следует во избежание загрязнения выливать обратно в баночку раствор, которым пользовались для промывания или дезинфицирования шприца-катетера. Влагалищное зеркало после осеменения коровы моют тёплым 3%-ным раствором двууглекислой соды, затем обмывают прокипяченной тёплой водой, насухо вытирают и обеззараживают фламбированием или в кипящей воде. Нельзя пользоваться при обмывании нескольких коров и той же ватой, марлей или поролоном, так как это может способствовать распространению заразных болезней. При осеменении нескольких коров спермой одного быка наружную поверхность шприца-катетера после осеменения каждой коровы нужно обязательно продензифицировать ватным тампоном, пропитанным 96%-ным спиртом, тщательно обтереть скользящим движением по направлению к цилиндру, при необходимости обрабатывают и сам цилиндр шприца-катетера. После такой обработки можно осеменять этим шприцем-катетером следующую корову. В настоящее время и при визо-цервикальном способе широко используют одноразовые осеменительные пипетки с баллончиком, особенно при осеменении размороженной спермой. Задание № 5. Эпицервикальный способ осеменения. Название способ получил по греческим словам "эпи" - около и "цервикс" - шейка. Иными словами - введение спермы как можно ближе к каналу шейки матки. Таким образом, при таком способе осеменения частично имитируется естественный способ, при котором сперма изливается как можно ближе к влагалищному отверстию канала шейки матки. Используется только при осеменении телок. Возможность применения этого способа обусловлена отсутствием у телок растягиваний (кармашек) влагалища. Это определяет то, что при глубоком введении катетера кончик его почти совпадает с влагалищным отверстием шейки матки. В этом случае вводимая сперма изливается на влагалищное отверстие шейки матки и, при стимуляции ее всасывающей функции путем легкого массажа клитора, попадает в канал шейки матки. В набор инструментов входят: стерильная полиэтиленовая ампула для спермы или пластмассовый шприц, стерильный полистероловый катетер 35-40 см. В одной дозе для осеменения должно быть не менее 10 млн. активных спермиев с поступательным движением. Техника_осеменения: Животное фиксируют. Подготавливают инструменты. Для этого полиэтиленовую ампулу присоединяют к катетеру. Проводят размораживание и оценку спермы по определенной методике. Затем ампулу сдавливают для удаления из нее воздуха и засасывают порцию замороженно-оттаяного или свежеразбавленного семени. После тщательного туалета наружных половых органов телки катетер вводят в преддверие влагалища и проталкивают катетер приблизительно на половину его длины под углом приблизительно 20-30 градусов вверх от линии позвоночника. После этого направление движения катетера ориентируют в направлении приблизительно 20-30 градусов вниз от линии позвоночника. Катетер продвигают до упора, содержимое ампулы выдавливают. Ампулу отсоединяют и делают легкий массаж клитора, наблюдая визуально за продвижением спермы по катетеру. Осторожно вытягивают катетер. После осеменения обеспечивают спокойные условия для животного. Недостаток способа: применяется только для телок. Показатель оплодотворяемости телок - около 60-70%. Занятие № 11. |