Тема Учение об иммунитете. Содержание учебного материала
 Скачать 145.37 Kb.
|
|
Применение серологических реакций:
Серологические реакции применяют также для определения активности (титра) сывороток и в научных исследованиях. РА-реакция агглютинации — это склеивание и выпадение в осадок микробов или других клеток под действием антител вприсутствии электролита (изотонического раствора натрия хло рида). Образовавшийся осадок называют агглютинатом. РГА - реакция гемагглютинации 1РГА - относится к серологическим. В этой реакции эритро циты агглютинируются при взаимодействии с соответствующи ми антителами (гемагглютининами). Реакцию широко исполь зуют для определения группы крови. 2РГА — не является серологической. В ней склеивание эрит роцитов вызывают не антитела, а особые вещества, образуемые вирусами. Например, вирус гриппа агглютинирует эритроциты кур и морских свинок, вирус полиомиелита — эритроциты бара на. Эта реакция позволяет судить о наличии того или иного ви руса в исследуемом материале. Реакция торможения гемагглютинации. Это серологическая реакция, в которой специфические противовирусные антитела, взаимодействуя с вирусом (антигеном), нейтрализуют его и ли шают способности агглютинировать эритроциты, т.е. тормозят реакцию гемагглютинации. Высокая специфичность реакции торможения гемагглютинации (РТГА) позволяет с ее помощью определить вид и даже тип вирусов, обнаруженных при поста новке РГА. Реакция непрямой гемагглютинации. Реакция непрямой (пас сивной) гемагглютинации (РНГА) основана на том, что эритро циты, если на их поверхности адсорбировать растворимый анти ген, приобретают способность агглютинировать при взаимодей ствии с антителами к адсорбированному антигену. При помощи РНГА можно определять неизвестный антиген, если на эритроциты адсорбировать заведомо известные антите ла. Реакцию гемагглютинации можно ставить в объеме 0,025 мл (микрометод), пользуясь микротитратором Такачи. Реакция преципитации. В реакции преципитации происхо дит выпадение в осадок специфического иммунного комплекса, состоящего из растворимого антигена (лизата, экстракта, гаптена) и специфического антитела в присутствии электролитов. Образующееся в результате этой реакции мутное кольцо или оса док называют преципитатом. От реакции агглютинации эта ре акция в основном отличается размером частиц антигена. Реак цию преципитации обычно применяют для определения анти гена при диагностике ряда инфекций (сибирская язва, менин гит); в судебной медицине — для определения видовой принад лежности крови, спермы; в санитарно-гигиенических исследо ваниях — при установлении фальсификации продуктов; с ее по мощью определяют филогенетическое родство животных и растений. Для реакции необходимы:
Реакция лизиса (иммунный цитолиз). Иммунный лизис — это растворение клеток под воздействием антител при обязатель ном участии комплемента. Для реакции необходимы: антиген — микробы, эритроциты или другие клетки; антитело (лизин) — иммунная сыворотка, реже — сыворотка больного. Бактериолитическая сыворотка содержит антитела, участвующие в лизисе бактерий; гемолитическая — гемолизи ны, способствующие лизису эритроцитов; для лизиса спирохет нужны спирохетолизины, клетки цитолизина. Комплемент — больше всего комплемента в сыворотке морс ких свинок. Эту сыворотку обычно используют в качестве комп лемента. Свежий (нативный) комплемент нестоек и легко раз рушается при нагревании, встряхивании, хранении, поэтому пользоваться им можно не дольше двух дней после получения. Для консервации комплемента к нему добавляют 2%-ную бор ную кислоту и 3%-ный сульфат натрия. Такой комплемент мож но сохранять при 4 °С до двух недель. Чаще применяют сухой комплемент. Перед употреблением его растворяют в изотони ческом растворе до первоначального объема. Реакция связывания комплемента РСК — основана на том, что специфический комплекс антиген—антитело всегда адсорбиру ет на себе (связывает) комплемент. Эту реакцию широко приме няют при идентификации антигенов и в серодиагностике ин фекций, особенно заболеваний, вызванных спирохетами (реак ция Вассермана), риккетсиями и вирусами. РСК— сложная се рологическая реакция. В ней участвуют комплемент и две системы антиген—антитело. Молекулярно-биологический метод диагностики: полимеразная цепная реакция, ее механизм и применение Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — экспериментальный метод молекулярной биологии, позволяющий добиться значи тельного увеличения малых концентраций определенных фраг ментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материа ле (пробе). Помимо амплификации ДНК, ПЦР позволяет проводить множество других манипуляций с нуклеиновыми кислотами (вве дение мутаций, сращивание фрагментов ДНК) и широко исполь зуется в биологической и медицинской практике, например для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, выделения новых генов. Исследование методом ПЦР очень эффективно для обнаружения вируса иммунодефицита человека (ВИЧ). Этот вирус опасен тем, что он блокирует защитные функции организма, открывая путь в тело человека для возбудителей са мых разных болезней. Заражение ВИЧ происходит при половом контакте и при контакте с кровью инфицированного. Для обна ружения ВИЧ используется как иммуноферментный анализ (ИФА), с помощью которой определяется наличие в крови чело века антител на вирус, так и метод ПЦР-диагностики. Иммунный статус Иммунный статус — структурное и функциональное состоя ние иммунной системы индивидуума, определяемое комплек сом клинических и лабораторных иммунологических показате лей. Иммунный статус (иммунный профиль, иммунореактивность) характеризует способность организма данного конкретного ин дивидуума к иммунному ответу на определенный антиген в дан ный момент времени. Оценка иммунного статуса организма на чинается с ориентировочного клинического этапа: анамнез, ча стота инфекционных заболеваний; лабораторные исследования в иммунологической лаборатории. Оценку иммунного статуса проводят в клинике при трансплантации органов и тканей, при аутоиммунных и других иммунопатологических заболеваниях, тяжелых аллергиях, онкологических, инфекционных и многих соматических болезнях. Для заключения о состоянии иммунной системы необходи мо руководствоваться:
Данные общего клинического обследования включают жало бы пациента, анамнез, описание клинического состояния. За канчиваются клинические исследования общим анализом кро ви, определением абсолютного числа лимфоцитов и фагоцитов. Для оценки состояния факторов неспецифической резистент ности выявляют состояние системы фагоцитоза и комплемента. При необходимости определяют содержание интерферона и лизоцима. Функциональную активность фагоцитов определяют по их подвижности, адгезии, способности к поглощению бакте рий, дезгрануляции клеток, внутриклеточному килингу и образованию активных форм кислорода. С этой целью исполь зуют такие тесты, как фагоцитарный индекс, НСТ-тест (нитро-синий тетразолий), хемилюминесценцию и др. Для оценки си стемы комплемента обычно проводят титрование в реакции ге молиза. Гуморальное звено иммунитета оценивают по содержанию иммуноглобулинов разных классов в сыворотке крови, титру спе цифических антител, ГНТ, количеству В-лимфоцитов в перифе рической крови, их бласттрансформации под действием В клеточных митогенов. Состояние клеточного звена иммунитета определяют по количеству Т-лимфоцитов и их субпопуляций в периферической крови, бласттрансформации под действием Т-клеточных митогенов, содержанию гормонов тимуса, уровню секретируемых цитокинов, а также по кожным пробам с аллерге нами. Для проведения кожных проб используют аллергены, к которым в норме должна быть сенсибилизация у большинства людей (например, проба Манту с туберкулином). Кожные пробы, основанные на аллергических реакциях за медленного типа, — наиболее простой и доступный способ оцен ки клеточного иммунитета. В качестве дополнительных тестов для оценки иммунного статуса можно использовать определе ние бактерицидности сыворотки крови, титрование комплемен та, содержание С-рективного белка, ревматоидных факторов и других аутоантител в сыворотке крови. Тесты для оценки иммунного статуса
Иммунобиологические медицинские препараты
Сыворотки:
Вакцины — медицинский препарат, применяемый для созда ния активного искусственно приобретенного иммунитета. Вак цины изготавливаются из ослабленных или убитых микроорга низмов, продуктов их жизнедеятельности или из их антигенов, полученных генноинженерным или химическим путем. Первая вакцина получила свое название от слова vaccinia (ко ровья оспа) — вирусная болезнь крупного рогатого скота. Анг лийский врач Эдвард Дженнер впервые применил на мальчике Джеймсе Фиппсе вакцину против натуральной оспы, полученную из пузырьков на руке больного коровьей оспой, в 1796 г. Лишь спустя 100 лет Луи Пастер сформулировал главный принцип вак цинации — применение ослабленных препаратов микроорганиз мов для формирования иммунитета против вирулентных штам мов. Вакцинами называют иммунобиологические препараты, предназначенные для создания активного специфического им мунитета. Применяют их главным образом для профилактики, но иног да используют для лечения инфекционных болезней. Действу ющим началом вакцины является специфический антиген. В ка честве антигена используют:
Иммуноглобулины класса G у человека являются наиболее важ ными. Концентрация их достигает 9-18 г/л. Иммуноглобулины этого класса обеспечивают противоинфекционную защиту, свя зывают токсины, усиливают фагоцитарную активность, активи руют систему комплемента, вызывают агглютинацию бактерий и вирусов, они способны переходить через плаценту, обеспечивая новорожденному так называемый пассивный иммунитет. Иммуноглобулины класса А делят на две разновидности: сыво роточные и секреторные. Первые из них находятся в крови, вто рые — в различных секретах. Соответственно этому сывороточ ный иммуноглобулин А принимает участие в общем иммуните те, а секреторный обеспечивает местный иммунитет, создавая барьер на пути проникновения инфекций и токсинов в организм. Секреторный находится в наружных секретах — в слюне, слизи трахеобронхиального дерева, мочеполовых путей, молоке. Сек реторный компонент образуется в эпителиальных клетках и в дальнейшем присоединяется к молекуле IgA. IgA нейтрализует токсины и вызывает агглютинацию микроорганизмов и вирусов. Концентрация сывороточных IgA колеблется от 1,5 до 4 г/л. Со держание IgA резко возрастает при заболеваниях верхних ды хательных путей, пневмониях, инфекционных заболеваниях желудочно-кишечного тракта. Иммуноглобулины класса Е принимают участие в нейтрализа ции токсинов, опсонизации, агглютинации и бактериолизисе, осуществляемом комплементом. Содержание IgE повышается при инфекционных заболеваниях у детей и взрослых. Иммуноглобулины класса D представляют собой антитела, ло кализующиеся в мембране плазматических клеток, в сыворотке концентрация их невелика. Значение IgD пока не выяснено, предполагают, что они участвуют в аутоиммунных процессах. Иммуноглобулины класса М (IgM) — показатель гуморального иммунитета. Основные показания к применению: оценка им мунитета, течения инфекционных процессов, заболеваний пе чени, почек. IgM — белки, представляющие класс антител М. Они первыми вырабатываются в ответ на острую инфекцию и появляются в кровяном русле, обеспечивая первичный иммуни тет. Снижение их содержания свидетельствует о дефиците гумо рального иммунитета. Увеличение концентрации наблюдается при остром инфекционном процессе различного генеза (вирус ные, бактериальные, паразитарные, грибковые заболевания), при острых вирусных гепатитах, аутоиммунных заболеваниях, сис темной красной волчанке, миеломной болезни, пиелонефрите. Содержание IgM снижается при хронической вирусной инфек ции, заболеваниях, приводящих к истощению иммунной систе мы. К классу иммуноглобулинов М относится ревматоидный фактор. Иммуноглобулины класса М (IgM) — класс иммуноглобулинов, преимущественно обеспечивающий первичный иммунный от вет. IgM — эволюционно наиболее древний класс антител. Они синтезируются плазматическими клетками, составляют 5-10% от общего количества иммуноглобулинов в сыворотке крови. Циркулируют в крови в виде пентамеров, состоящих из 5 субъеди ниц мономерного IgM. Иммуноглобулины класса М называют макроглобулинами из-за высокой (около 900 кДа) молекуляр ной массы; антитела этого класса мало проникают в ткани. Пе риод их полураспада в крови составляет около 5 суток. Первич ный иммунный ответ связан преимущественно с IgM-антитела ми (в отличие от вторичного, в котором участвуют преимуще ственно антитела класса IgG). IgM наиболее эффективно связываются с комплементом (для запуска этого механизма достаточно связывания антигена всего лишь одной молекулой IgM), вызывают агглютинацию бактерий, нейтрализацию виру сов. Значительное повышение концентрации IgM в крови на блюдается при ряде инфекций, как у взрослых, так и у новорож денных. Они играют важную роль в активации фагоцитоза и эли минации возбудителя из кровеносного русла. IgM вырабатыва ются уже у плода и участвуют в противоинфекционной защите. В период внутриутробного развития IgM матери не проникают через плаценту в кровь ребенка из-за высокого молекулярного веса. Повышенное содержание IgM в пуповинной крови — диаг ностический критерий внутриутробной инфекции плода. |