Тонкослойная хромотография. ХЕР. Тонкослойная хроматография
 Скачать 10.02 Kb.
|
|
Тонкослойная хроматография-- это вид планарной хроматографии, в которой подвижная фаза (элюент) движется по инертной подложке( стеклянная, металлическая, пластиковая), на которую нанесена тонким слоем неподвижная фаза (сорбент). Элюент перемещается за счёт капиллярных сил, возникающих между гранулами сорбента. Компоненты элюента движутся с разной скоростью вдоль сорбента и тем самым происходит разделение. Движение элюента происходит в ламинарном режиме из-за чего разделение более эффективно. =Требования к неподвижной фазе: - образуют физически и химически стабильные слои - не образуют ковалентные связи с подвижной фазой - не растворяются в подвижной фазе и не переносятся с ней - не имеют индифферентных частиц, мешающих проведению анализа или детектированию разделяемых компанентов - частицы фазы должны обладать размерами от 5 до 20 мкм В качестве материала для подложки используют алюминиевую фольгу, стекло и полимерный плёнки. В качестве стабилизирующего вещества между сорбентом и подложкой используют, например, гипс, силикагель, крахмал, силикаты щелочных металлов. = Требования к подвижной фазе: - Растворитель должен быть осушен и очищен. - Смеси веществ могут различаться с помощью одного или нескольких растворителей, но зачастую используют систему растворителей. Выбор растворителей основан на элюирующей способности, которая зависит от полярности, протонодорных и протоноакцепторных свойств. - Элюент подбирают таким образом, чтобы пятно целевого вещества выходило с Rf не более 0.5-0.6 . =Общий принцип работы: на подложку тонким слоем наносится неподвижная фаза (100-300 мкм). В качестве сорбента могут быть использованы оксид алюминия, силикагель, целлюлозу и полиамид. На линию старта, расположенную примерно в 2х сантиметрах от края пластины, наносят малым пятном анализируемую смесь и стандартные вещества. Для этого используют капилляры, микропипетки и шприцы. Затем пластину помещают в герметичную камеру с растворителем, который выполняет роль подвижной фазы. Под действием капиллярных сил растворитель движется вдоль слоя сорбента до финиша и с разной скоростью переносит компоненты смеси, что приводит к их разделению. После достижения растворителем (элюентом) линии финиша пластинку высушивают и проводят идентификацию компонентов. Разделенные компоненты на пластинке или полоске бумаги образуют отдельные зоны (пятна) (рис. 5.94). Многие вещества не обнаруживаются в видимой области, и для их определения невидимые зоны проявляют опрыскиванием пластины ТСХ специальными реагентами. Для обнаружения пятен можно использовать УФ-излу- чение или термическую деструкцию веществ. Для надежности идентификации веществ при определении часто используют «свидетелей». Для этого на пластинке вместе с разделяемой смесью веществ хроматографируют стандартные вещества («свидетели»). Величина Rf определяется как отношение расстояния, пройденного фронтом пятна компонента разделяемой смеси, к расстоянию, пройденному фронтом растворителя. Величина Rf является характеристикой данного соединения, хроматографируемого на данном сорбенте, в данном растворителе и в данных условиях опыта. Достоинства: Простота использоваия, экономичность, небольшое время анализа (от 2х до 100 минут), доступнось оборудования Недостатки: низкая эффективность разделения за счёт действия только капиллярных и диффузионных сил. |