Выделение чистой культуры анаэробов
 Скачать 175.82 Kb.
|
|
ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ АНАЭРОБОВ Теория занятия Сущность условий, необходимых для культивирования анаэробов, заключается в снижении парциального давления молекулярного кислорода, что достигается механическими, физическими, химическими и биологическими способами. Механические методы удаления кислорода 1. Посев анаэробной культуры уколом в высокий столбик сахарного агара или среды Вильсон-Блера. Это наиболее простой способ. 2. Способ Виньяля-Вейона. В расплавленный и остуженный до 50°С агар вносят исследуемую анаэробную культуру, перемешивают и засасывают в пастеровскую пипетку, конец которой запаивают. В среде вырастают ясно видимые снаружи колонии бактерий, которые можно извлечь, распилив трубку. 3. Метод Перетца. В пробирку с растопленным и остуженным до 45°С сахарным агаром вносится и размешивается исследуемая культура. Смесь выливается в стерильную чашку Петри, охлаждается. На поверхность накладывается стерильное стекло. Чашку в закрытом виде помещают в термостат на 18-20 часов. Под стеклом вырастают колонии, которые извлекают, отодвинув стекло. Физические методы удаления кислорода 1. Анаэростат, из которого воздух выкачивается насосом. Можно использовать вместо анаэростата эксикатор, где на дно которого помещеныхимические поглотители кислорода (щелочной растворпирогаллола и др.) 2. Аппарат Киппа, где воздух заменен водородом. 3. Среда Китта-Тароцци (МПБ, 0,5 % глюкозы и кусочками свежих органов животных, например, печени или с мясным фаршем). Кусочки органов, а также глюкоза обладают рецидивирующими свойствами. Перед посевом её кипятят и заливают сверху вазелиновым маслом. Химические методы удаления кислорода 1. Прибор Омелянского, где для поглощения кислорода используется пирогаллол. 2. Среда Вильсон-Блера (железо-сульфитный агар). Черные колонии образует Cl.perfringens за счет образования сульфата железа (FeS). Биологический метод удаления кислорода по Фортнеру В чашку Петри с толстым слоем агара делят на 2 половины, на одну половину засевают облигатный аэроб – «чудесную» палочку (S.marcescens), на другую половину чашки засевают исследуемую анаэробную культуру. Чашку заливают растопленным парафином. Через 24-48 часов в чашке вырастают аэробы, затем, когда запас кислорода исчерпывается, начинают размножаться анаэробы. Схема выделения чистой культуры анаэробов Смесь микроорганизмов 1 день бактериоскопический бактериологический метод метод приготовление и окраска мазка посев регенерированную по Граму среду Китта-Тароцци 2 день (1) (3) (2) характер роста пересев колоний по мазок из бульонной Вейнбергу, по Цейсслеру культуры 3 день (1) (3) (2) характер колоний пересев колоний на мазок из колоний среду Китта-Тароцци 4 день (1) (3) (2) характер роста пересев в мазок для проверки цветной ряд чистоты культуры (5) (4) проба нейтрализации проба на протеолитическую с диагностическими сыворотками активность 5 день 1. учет результатов исследования 2. заключение |