Лабораторная работа по молекулярной биологии. Выделение днк из растительного материала
 Скачать 1.38 Mb.
|
|
Лабораторная работа по молекулярной биологии На тему: «Выделение ДНК из растительного материала» Выполнила: Баймулдинова Арайлым группа «БГ-32» Проверила: Литвиненко Алена Павловна Материалы и оборудование: синия пипетка дозатор (P1000мкл), пробирки (15мл), пробирки эппендорф, фарфоровые чаши, фольга, растительный материал, ТЕ буфер( 400 мкл NaCl, 25 мкл EDTA, 20 мкл Tris-HCl), 5М NaCl, 70% этиловый спирт, лабораторные весы, центрифуга, вортекс, пипетка. Цель: Углубить знания о ДНК и её роли в организме, выделить и рассмотреть ДНК и тканей растения, изучить простой и доступный метод выделения ДНК из биологического материала. Ход работы: Перед началом работы мы провели расчеты необходимые для дальнейшей работы с успешным результатом.  Для начала при помощи лабораторной пипеткой-дозатором переменным объемом от 100-1000 мкл добавляем 400мкл хлорид натрия в 15 мл колбу, а после с помощью той же пипетки, но уже с чистым наконечником добавляем 1000мкл EDTA, еще раз тем же наконечником добавляем в колбочку 250мкл EDTA, а после уже с чистым наконечником добавляем к общему раствору 2000мкл TRIS. Доведя его до нужного нам объема, плотно закрываем все ненужные нам больше пробирки с растворами, мы перемешиваем данный раствор с помощью Вортекса. Для экстракции мы используем 2 экземпляра растительного материала - листья каланхоэ массой 0,6 грамм на две чаши. Взвесили растительный материал на фольге с помощью лабораторных весов. Добавляем по 2мл (2000мкл) экстракционного буфера в фарфоровые чашки с растительным материалом, и тщательно перетираем до образования «кашицы». Переливаем полученную смесь в пробирки эппендорфа, до максимального уровня. Далее, пробирки с материалом помещаем в центрифугу на 5 минут 6.3rpm. После завершения цетнрифугирования надо переместить супернатант в чистые пробирки эппендорф в объёме 1 мл(1000мкл). Добавляем к нему SDS 250мкл в пробирки с супернатантом. Аккуратными легкими движениями перемешиваем получившийся раствор. Удаляем с помощью пипетки излишние 500мкл из пробирки с супернатонтом. Добавляем с помощью пипетки дозатора 5 молярный NaCl (метод высаливания) 500мкл в пробирку эппендорф. Помещаем пробирки в центрифугу на 2 минуты 6.3rpm. Выделили белки. Забираем 500мкл с помощью пипетки супернатант из пробирки и поместили его чистую пробирку эппендорфа. Добавляет 500мкл этанола. Аккуратно перемешиваем руками вверх-вниз. Помещаем данную пробирку с этанолом и супернатантом в центрифугу на 90 секунд при 6.3 rpm. После вытаскиваем и убираем супертанант с помощью пипетки и высушиваем осадок. В конечном итоге мы должны были рассмотреть и изучить полученный мазок ДНК, но так как растительного материала было мало мы не смогли его увидеть, его было очень мало и невозможно было увидеть невооруженным глазом.          ВЫВОДЫ 1. Исходя из литературных источников, выяснили, что ДНК это двухцепочечный полимер, который состоит из нуклеотидов четырёх типов. 2. Выделили ДНК из клеток 3. Лучшим растительным объектом для получения ДНК является зелёный горошек. 4. Лучшим детергентом для получения ДНК из растительных клеток является моющее средство. 5. Лучшим детергентом для получения ДНК из человеческих клеток является смесь моющего средства с пищеварительным средством «Панкреатин». 6. Окрашивание ДНК происходит при добавлении спирта уже содержащего краситель. |