Задание по цитологии и гистологии. ТК-2_цитология_Воронина-ХБ34. Вопросник Визуальное наблюдение объекта
 Скачать 18.95 Kb.
|
|
Тема 2: Методы цитологии Вопросник: 1.Визуальное наблюдение объекта. 2. Принцип работы современных световых микроскопов и их использование в цитологии. 3.Изучение клеток методом фазово-контрастной, поляризационной и интерференционной микроскопии. 4.Витальное (прижизненное) изучение клеток. 5.Методы культивирования клеток. 1) Главным методическим приемом в цитологии является визуальное наблюдение объекта. При этом исследователь не просто изучает и описывает морфологию объекта, он может видеть степень его сложности, локализовать отдельные детали, получить сведения о химизме той или иной части клетки, визуально и достаточно точно оценить ее метаболические свойства, выяснить строение этой части на макромолекулярном уровне. Это создает своеобразие цитологии как науки, использующей главным образом методы изучения клетки непосредственно глазом, вооруженным увеличивающими оптическими системами. Кроме того, в цитологии применяются многочисленные приемы препаративной и аналитической биохимии, методы биофизики. 2) Главный принцип работы светового микроскопа состоит в том, что через прозрачный или полупрозрачный предмет (объект исследования), размещенный на предметном столике, проходят лучи света и попадают на систему линз объектива, которые увеличивают изображение. Эту же роль играют линзы окуляра, через которые исследователь изучает объект. Метод световой микроскопии, в свою очередь, делится на ультрафиолетовую, люминесцентную, светлого и темного полей и т.д. Использование оптического микроскопа дает возможность выявлять измененные или опухолевые клетки, изучать различные штаммы вирусов. Точность результатов данного метода стремится к 100%. К числу недостатков относится ограниченное разрешение – частицы меньше 200 нанометров исследовать не получится. 3) Фазово-контрастная микроскопия, впервые описанная в 1934 году голландским физиком Фрицем Цернике, является оптическим методом усиления контраста для формирования высококонтрастных изображений прозрачных образцов, таких как живые клетки (обычно в культуре), микроорганизмы, тонкие срезы тканей, литографические рисунки, волокна, дисперсии латексов, фрагменты стекла и субклеточные структуры (включая ядра и другие органеллы). Поляризационная микроскопия – эффективный метод исследования структуры и свойств цитологических и гистологических препаратов. Поляризационный (петрографический) микроскоп аналогичен обычному биологическому микроскопу, но имеет поляризатор перед конденсором и анализатор в тубусе между объективом и окуляром. Известно, что многие биологические объекты являются анизотропными. Поэтому поляризационные методы позволяют оперативно и просто обнаружить оптически неоднородные объекты и диагностировать заболевание. Интерференционная микроскопия, метод исследования структуры различных, главным образом биологических, объектов и измерения их сухой массы, толщины и показателя преломления. Интерференционная микроскопия основана на интерференции света и осуществляется с помощью интерференционного микроскопа. Интерференционная микроскопия объединяет принципы фазово-контрастной и поляризационной микроскопии. Метод применяют для получения контрастного трёхмерного изображения неокрашенных объектов. Принцип метода основан на раздвоении светового потока в микроскопе; один луч проходит через объект, другой — мимо него. Оба луча соединяются в окуляре и интерферируют между собой. Фазово-контрастная микроскопия в настоящее время позволяет изучать живые организмы, объекты, которые попросту неразличимы для визуализации с применением обычного оптического (светового) микроскопа. 4) Прижизненное изучение клеток проводят с помощью светового микроскопа. Объектами такого изучения могут служить свободноживущие простейшие, которых в лаборатории содержат в специальных средах; 5) Для изучения клеток органов и тканей животных используют метод клеточных культур. Более простой вариант этого метода заключается в том, что в камеру, наполненную питательной средой (смесь плазмы крови с эмбриональным экстрактом или смесь синтетической среды с добавлением плазмы крови), помещают небольшой кусочек живой ткани. Через некоторое время на периферии такого кусочка начинается деление и рост клеток. В другом случае вырезанный кусочек ткани слегка обрабатывают раствором фермента трипсина или хелатона-версена, что приводит к его диссоциации, к полному разобщению клеток друг от друга. Затем такую взвесь отмытых клеток помещают в сосуд с питательной средой, где они опускаются на дно, прикрепляются к стеклу и начинают размножаться, образуя сначала колонии, а затем сплошной клеточный пласт. Так растут однослойные клеточные культуры, очень удобные для прижизненных наблюдений. При культивировании клеток вне организма кроме смены среды важно поддерживать и необходимую температуру (около 20° для хладнокровных и около 37° для теплокровных). |