1-ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА. Занятие 1 Тема
 Скачать 50.43 Kb.
|
ЛАБОРАТОРНОЕ ЗАНЯТИЕ № 1Тема: Методы изолирования ядовитых веществ из биологического объекта с помощью полярных растворителей. Изолирования подкисленной водой. Цель обучения: Ознакомить студентов теоретическими основами методики и принципами выделения ядовитых веществ из биологического объекта подкисленной водой. При выполнении лабораторной работы студенты должны: Изолировать ядовитых веществ из биологического объекта методами подкисленной воды в кислой и щелочной средах. 2. Собрать вытяжки из кислой и щелочной среды. Сравнение методик. 3. Выполнить очистку изолированного ядовитого вещества. Нужные приборы для лабораторной работы: - Колбы ёмкостью 100, 200 мл - Воронка - Делительная воронка - Мензурка - Пипетки - Пробирки - Универсальный индикатор - Реактивы: вода очищенная, щавелевая кислота, хлороформ, 25% раствор аммиака, 10% раствор серной кислоты, раствор натрия нитрита, соль аммония сульфата. Методические указания по выполнению лабораторной работы. 1. Наружный осмотр объекта (цвет, запах, органические примеси, наличие консервантов, масса) и изложить в рабочем тетраде. 2. Определение рН среды объекта универсальным индикатором. 3. Изолирование ядовитых веществ из биологического объекта методом Васильева и Крамаренко. Техника выполнения методики 100 г мелко измельченного трупного материала вносят в колбу вместимостью 500 мл. биологический объект заливают 200 мл воды, подкисленной насыщенным водным раствором щавелевой кислоты до рН= 2,0-2,5. Смесь биологического материала и подкисленной воды оставляют на 2 ч при периодическом перемешивании содержимого колбы. После указанного времени кислую водную вытяжку сливают с объекта, который еще раз в течение часа настаивают с водой, подкисленной щавелевой кислотой до рН= 2,5, а затем кислую водную вытяжку сливают с биологического объекта. Кислые водные вытяжки соединяют и процеживают через двойной слой марли. Процеженную вытяжку подвергают центрифугированию. Надосадочную жидкость из центрифужного стакана переносят в делительную воронку. Эту жидкость 3-4 раза взбалтывают с новыми порциями хлороформа (по 15-20 мл). Хлороформные вытяжки из кислой среды соединяют и исследуют на наличие токсических веществ, которые экстрагируются хлороформом из кислой среды. Оставшуюся в делительной воронке кислую водную вытяжку подщелачивают 25 %-м раствором аммиака до рН = 9-10 и 3-4 раза взбалтывают с хлороформом (порциями по 15-20 мл). Хлороформные вытяжки из щелочной среды соединяют и исследуют на наличие алкалоидов, их синтетических аналогов и других органических веществ основного характера (метод А.А.Васильевой). 100 г измельченных органов трупов вносят в стакан вместимостью 250-500 мл и заливают 0,02 М раствором серной кислоты с таким расчетом, чтобы твердые частицы биологического материала были покрыты этой жидкостью. Содержимое стакана перемешивают стеклянной палочкой и с помощью универсального индикатора проверяют рН среды. Если рН среды превышает 2,5, то к смеси биологического материала и подкисленной воды по каплям прибавляют 20 %-й раствор серной кислоты до pH-2,5. Содержимое стакана оставляют на 2 ч при периодическом перемешивании, а затем процеживают через марлю. Твердые частицы биологического материала еще дважды настаивают с новыми порциями 0,02 М раствора серной кислоты, доводя рН до 2,5 и настаивая в течение часа. Кислые водные вытяжки из биологического материала соединяют, переносят в стакан для центрифугирования вместимостью 200 мл и центрифугируют. Надосадочную жидкость сливают, а остаток в центрифужном стакане перемешивают стеклянной палочкой и заливают 20-30 мл 0,2 М раствора серной кислоты. Содержимое центрифужного стакана настаивают в течение 2 ч. и центрифугируют. Надосадочную жидкость присоединяют к ранее полученной надосадочной жидкости. Объединенные надосадочные жидкости (центрифугат А) подвергают дальнейшему исследованию. Кислую водную фазу подщелачивают 20 %-м раствором гидроксида натрия до рН= 8,5-9,0 и 3 раза взбалтывают с хлороформом (объем хлороформа, взятый для каждой экстракции, должен быть в три раза меньше объема водной фазы). Хлороформные вытяжки соединяют, профильтровывают и на водяной бане отгоняют хлороформ до небольшого объема (10-15 мл). Оставшийся хлороформ выпаривают на воздухе досуха. Сухой остаток растворяют в 10 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты. В полученном растворе определяют наличие алкалоидов (метод В.Ф.Крамаренко). В конце каждой методики водный раствор проверяют на наличие ионов йода пахикарпина. Для этого к 5 мл водной части добавляют раствор серной кислоты до образования кислой среды. После этого добавляют 1-2 капли раствора нитрита натрия и 1 мл хлороформа. Может образоваться красно-фиолетовое окрашивание хлороформного слоя. Объясните причину и изложите химизм реакции. РАБОТА В МАЛЫХ ГРУППАХ “SWOT-анализ” Студенты делятся на 3 группы и заполняют таблицу ответами на вопросы:  1-группа - значение метода Стаса-Отто, преимущество и недостатки 2-группа - значение метода А.А.Васильевой, преимущество и недостатки 3-группа - значение метода В.Ф.Крамаренко, преимущество и недостатки |