2 модуль микробиология. 1. Методы стерилизации. Методы контроля стерилизации
 Скачать 55.25 Kb.
|
|
1.Методы стерилизации. Методы контроля стерилизации. стерилизация- обеспложивание, т.е. полное уничтожение вегетативных форм микроорганизмов и их спор в различных материалах. Физические методы стерилизации: Прокаливание в пламени спиртовки или газовой горелки( применяется для стерилизации бактериологических петель, пинцетов, препаровальных игл) Стерилизация кипячением(шприцы, мелкие хирургические инструменты, предметы и покровные стекла) Стерилизация сухим жаром или суховоздушная стерилизация в сушильном шкафу (печи Пастера). (стерилизуют стеклянную посуду: чашки Петри, пробирки, пипетки и др.) Стерилизация паром под давлением в автоклаве. Стерилизация текучим паром в аппарате хоха или автоклаве. (применяется в тех случаях, когда стерилизуемый материал не выдерживает высокой температуры, например питательные среды с витаминами, углеводами. Тиндализация (применяется для стерилизации легко разрушающихся при высокой температуре в-в (сыворотка крови, витамины и др.) Пастерилизация (пастеризуют напитки и пищевые продукты (вино, пиво, соки, молоко и др.) Стерилизация УФ-лучами Механическая стерилизация фильтрование): Данный метод основан на механической задержке микроорганизмов и их спор мелкопористыми фильтрами с определенным d пор. Фильтрование используют для стерилизации жидких материалов, не выдерживают нагревания (сыворотка крови, антибиотики, для получения бактериальных токсинов, фасов разных продуктов жизнедеятельности бактерий. Химические методы стерилизации: используют различные химические вещества, обладающие бактерицидным свойством, но в лабораторной практике применяют ограниченно. 2.Дезинфекция. Вещества, применяемые при дезинфекции. Механизм их действия. Дезинфекция – обеззараживание объектов окружающей среды: уничтожение патогенных для человека и животных микроорганизмов , с помощью химических веществ, обладающих антимикробным свойством. Относятся хлорная известь (0,1-10%), хлорамин (0,5-5% р-р), фенол или карболовая кислота (3-5%р-р), мезол(3-5%р-р), двутреть основная соль гипохлората кальция (0,1-10%р-р). Выбор дезинфицирующего вещества и его концентрации зависит от материала, подлежащего дезинфекции. Дезинфицирующие средства- это физические агенты и химические вещества, используемы для уничтожения возбудителей инфекционных заболеваний в окружающей среде. К физическим относят: пастеризация, тиндализация, кипячение, автоклавирование, горячий воздух, солнечные лучи, ультразвук, обжигание. К химическим: галоиды, фенолы и их производные, кислоты, щелочи, спирты и тд. Эти вещества должны непосредственно воздействовать на возбудителей. Дез. средства можно разделить на 2 группы. 1. Дезинфектанты (для обработки неодушевленных преметов) и 2. Гермизиды ( для обработки как живых, так и неодушевленных предметов) По механизму действия: Окислители. Включает хлор, бром йодсодержащие соединения +КМнО4, Н2О2, O3. Ех: хлорсодержащие соединения обусловлены воздействием на микробную клетку кислорода и хлора. Активаторы увеличивают скорость химических процессов, что позволяет уменьшить концентрацию. Йодофоры – однохлористый йод, трихлоридиод, йодоформ. Основан на способности йода проникать в клеточную стенку М.о, нарушать структуру и синтез протеинов и нуклеиновых кислот, применяют для дезинфекции флаконов, предметов медицинского назначения. Бромантил – бром содержащий препарат, используется для обеззараживания воды в бассейнах Перекисные соединения, перекись водорода. Образование безгидроксильных радикалов, которые разрушают липиды мембраны, ДНК. Группа дезинфицирующих средств, свертывающих белок. Фенолы - тимол, салол. Действуют как общий протоплазматический яд, разрушая стенку клетки, проникая внутрь клетки, вызывают осаждение клеточных белков. Крезолы – лизол. Используют для дезинфекции предметов обстановки, белья, туалетов Соли тяжелых металлов – ртути, серебра, меди, свинца, цинка Соляная кислота – для дезинфекции вымытой фарфоровой посуды, питьевой воды. Спирты - проникают в микробную клетку, обезвоживают ее, свертывают белок. Для обработки рук, некоторых поверхностей. Дезинфицирующие средства, вызывающие набухание и растворение белка. Едкие щелочи- едкий натр- бактерицидное, противовирусное действие. Карбонат натрия – слабое бактерицидное действие. Для посуды, белья. Гидроксид аммония – слабое бактерицидное действие Негашеная известь – для обеззараживания поверхностей, выделений почвы Формалин. Используют как в жидком, так и в газообразном состоянии. Обладает бактерицидными, противогрибковыми и противовирусными действиями. Механизм действия: инактивация микроорганизмов путем алкилирования амино- и сульфгидрильных групп протеинов и колец атомов азота в гетероцикле пуриновых оснований. Поверхностно – активные вещества ПАВ.- жирные кислоты, мыла, детергенты. Механизм их действия: высокая поверхностная активность, способность к растворению белков, липоидов, каротиноидов, диссоциация белковых комплексов. ПАВ используют для дезинфекции тканей, посуды, хирургических инструментов, кожи при хирургических манипуляциях. 3.Дезинсекция Это комплекс мероприятий по уничтожению насекомых под влиянием химических веществ 4. Дератизация это комплекс мероприятий по уничтожению грызунов.- механический: ловушки -биологический: когда заражают мышей заболеванием, не передающихся людям. Эта мышь заражает своих -химический: когда они умирают под влиянием химических веществ 5. Асептика – система мероприятий, предупреждающих попадание микроорганизмов из окружающей среды в ткани или полости человеческого организма при лечебных и диагностических манипуляциях, а также в материал для исследования, в питательные среды и культуры микроорганизмов при лабораторных исследованиях. Асептика предусматривает стерилизацию инструментов и материалов, специальную обработку рук мед. работников, соблюдение особых санитарно-гигиенических правил приемов работы. 6. Антисептика – комплекс лечебно - профилактических мероприятий, направленных на уничтожение микроорганизмов, способных вызвать индукционный процесс на поврежденных или интактных участках кожи и слизистых оболочек. Используются различные химические соединения, 5% - спиртовой раствор йода, 0,5-2% р-р хлорамина, 0,1 р-р KMmO4 , 0,5-1% формалина 1-2% СП. Р-ры метиленового синего или бриллиантового зеленого, детергенты. 7.Питание бактерий. Классификация их по характеру питания В качестве питательных веществ бактерии используют различные органические и минеральные вещества. Свою потребность в воде и водороде бактерии удовлетворяют через воду. По способу углеводного питания все организмы делятся на 3 основные группы: 1)Фотолитотрофы - организмы, источником энергии для которых служит солнечный свет, донорами электронов - неорганические соединения. 2)Хемолитотрофы - организмы, получающие энергию за счет окислительно-восстановительных реакций, донорами электронов которых служат неорганические соединения. К данной группе относятся сапрофитные бактерии(источники питания для них мертвые органический субстраты). 3)Хемоорганотрофы - организмы получающие энергию за счет окислительно-восстановительных реакций, донорами электронов которых служат органические соединения .К данной группе относятся большинство патогенных бактерий. По способу азотного питания бактерии подразделяют на 2 группы: 1)Аминоавтотрофы - организмы, способные удовлетворить свою потребность в азоте с помощью атмосферного или минерального азота. К ним относятся азотофиксирующие бактерии, свободноживущие в почве и нитрифицирующие бактерии, которые в качестве источника азота используют соли аммиака, азотной и азотистой кислот. 2)Аминогетеротрофы - организмы, которые используют азот из различных органических азотосодержащих соединений. 8.Классификация питательных сред. Питательная среда - среда, содержащая различные соединения сложного или простого состава, применяемые для размножения микробов в бактериологических лабораториях. Классификация питательных сред: по консистенции, происхождению, назначению. 1)По консистенции различают: жидкие, полужидкие и твердые питательные среды. Жидкие, как правило, готовят на основе мясной воды. Для получения полужидких сред добавляют 0,3-0,7 % агар-агара, представляющий собой полисахарид, добываемый из морских водорослей. Твердые среды состоят из мясной воды и 1,5-3,0 % агар-агара. 2)По происхождению бывают естественные и искусственные питательные среды. Естественные готовят из молока, картофеля, сыворотки крови человека или животных. Искусственные питательные среды - это сбалансированные смеси питательных веществ, содержащие пептоны или различные гидролизаты. 3)По назначению питательные среды делятся: основные и специальные. Основные - среды, на которых растут многие виды бактерий. К ним относятся МПБ и МПА.МПБ готовят на основе мясной воды,1% пептона и 0,5 % хлорида натрия. МПА состоит из МПБ и 2-3 % агар-агара. Специальные среды используют для роста тех бактерий, которые плохо растут на универсальных средах. Бывают кровяные, сывороточные, асцитические, сахарные специальные питательные среды. Приготавливают их путем добавления к МПБ или МПА: крови(5-10%),сыворотки(10-20%),асцитической жидкости(25-30%),углеводов(0,5-1%),глицерина(2-5%). Кровяной агар используют для выделения стрептококков, сывороточный - для менингококков и гонококков, на казеиново-угольном - бордетеллы, а на среде Левенштейна - Йенсена микобактерии. 9.Метаболизм бактерий Метаболизм-это обмен веществ и энергии в клетке. Это совокупность двух противоположных, но взаимосвязанных процессов - катаболизма и анаболизма. Анаболизм-совокупность биохимических реакций, осуществляющих синтез компонентов клетки. Катаболизм - совокупность реакций ,обеспечивающих клетку энергией, необходимой также для пластического обмена. Питательные вещества, необходимые для бактериальной клетки, поступают в нее тремя способами: пассивной диффузией, облегченной диффузией и активным транспортом. Пассивная диффузия осуществляется за счет различного содержания питательных веществ в среде и в клетке и происходит в направлении от большей концентрации к меньшей (по градиенту концентрации).Она не требует затрат энергии. Таким путем в клетку проникает вода и растворенные в ней молекулы. Облегченная диффузия обладает субстратной специфичностью и протекает с участием белков - пермиаз, локализованных в мембране. Они распознают молекулы на внешней стороне мембраны и переносят ее во внутреннюю. На внутренней стороннее комплекс субстрат - пермиаз дисассоциируется, включась в общий метаболизм клетки. Она происходит по градиенту концентрации без затрат энергии. Активный транспорт осуществляется специфичными пермиазами против градиента концентрации и требует затрат энергии. В процессе переноса может происходить модификация вещества - например, фосфорилирование углеводов. 10.Дифферинциально - диагностические среды Дифференциально - диагностические- среды, позволяющие отличать одни виды бактерий от других по их ферментативной активности или культуральным проявлениям. В их состав входит: МПБ или МПА, определенный химический субстрат, различное отношение к которому является диагностическим признаком для данного микроба и индикатор, который свидетельствует о биохимической реакции. К таким средам относят: Среды Эндо, Плоскирева, Гисса. Среда Эндо состоит из МПА,1% лактозы и индикатора (основного фуксина, обесцвеченного сульфитом натрия). Свежеприготовленная среда имеет бледно-розовую окраску, при росте лактозоположительных бактерий(эшерехий) их колонии окрашиваются в темно-красный цвет с металлическим блеском. Лактозоотрицательные бактерии образуют бесцветные колонии. Среда Плоскирева содержит МПА, лактозу и индикатор - нейтральный красный. Является также селективной средой. Среда Гисса состоит из 1% пептонной воды,1% углевода и индикатора Андреде(кислый фуксин в 1н. растворе гидроксида натрия).В пробирку со средой опускают поплавок(стеклянная трубка, один конец которой запаян) для улавливания газообразных продуктов ,образующихся при разложении углеводов. Свежеприготовленная среда имеет слегка желтый оттенок, при разложении углеводов она приобретает красный цвет. 11.Тканевые питательные среды К специальным тканевым питательным средам относят среды Китта-Тароцци и среду Аристовского - Гельтцера. Среда Китта - Тароцци содержит МПБ, 0,5% глюкозы, кусочки печени или мясного фарша. Среда Аристовского - Гельтцера состоит из кроличьей сыворотки и кусочки мозга кролика. Эти среды применяются для культивирования анаэробных бактерий. Перед посевом среды прогревают в водяной бане 10-15 мин. для удаления воздуха. После посева заливают слоем вазелиного масла или парафина с целью изоляции от атмосферного воздуха. 12. Элективные питательные среды Элективные среды предназначены для избирательного выделения и накопления микробов определенного вида из материалов, содержащих разнообразную микрофлору. Принцип действия элективных сред основывается на: 1)опережении роста определенного вида микроба по сравнению с сопутствующей флорой. Например на среде Ру(свернутая лошадиная сыворотка) и среде Леффлера (1 часть лошадиной сыворотки и 3 части сахарного бульона) возбудитель дифтерии образует видимый рост через 4-6 часов, а остальные бактерии через 18-24 часа. 2) Добавлении веществ, ингибирующих рост сопутствующей микрофлоры. Например, на среде ЖСА, содержащей до 9 % хлорида натрия культивируют стафилококки, рост других бактерий соль будет подавлять. Пептонная вода рН=8.4 используется для выращивания холерного вибриона, сдвиг рН в щелочную среду не влияет на рост данной бактерии. 13.Специальные питательные среды Синтетические питательные среды представляют собой гигроскопические порошки, растворяющиеся в воде. Они обеспечивают азотистое, углеродное и минеральное питание микроорганизмов. Например: среда Сотона используется для культивирования туберкулезных микобактерий, среда 199,среда Игл для культур клеток. 14.Дыхание бактерий. Классификация бактерий по характеру дыхания В зависимости от того, что является конечным акцептором в результате переноса электронов для синтеза АТФ, различают аэробное и анаэробное дыхание. При аэробном дыхании конечным акцептором служит молекулярный кислород, а при анаэробном неорганические соединения. Следовательно, микроорганизмы подразделяются на 4 группы:1)Облигатные аэробы - размножаются только в присутствии кислорода(вибрионы, микобактерии), 2)микроаэрофилы-растут при сниженной концентрации кислорода, в отличие от облигатных аэробов, но не растут без кислорода(некоторые виды бруцелл), 3)факультативные анаэробы- могут потреблять глюкозу и размножаться как в аэробных ,так и в анаэробных условиях(большинство патогенных и условно-патогенных микроорганизмов), 4) Облигатные анаэробы - размножаются только в бескислородных условиях (клостридии, бактериоиды). 15.Культуральные свойства бактерий. Характер роста бактерий на жидких и плотных питательных средах. Культуральные свойства бактерий характеризуют их питательные потребности, условия и характер роста на твердых и жидких питательных средах. На жидких питательных средах бактерии могут образовывать следующие формы роста:1) равномерное помутнение и осадок на дне (большинство патогенных бактерий), 2) пленку на поверхности среды (холерный вибрион, коринобактерии дифтерии, микобактерии туберкулеза, 3)пленку с отходящими в глубь среды нитями-сталактитами( возбудитель чумы), 4)придонно-пристеночный рост(стрептококки), 5)в виде комочка ваты( сибиреязвенная палочка). На плотных питательных средах бактерии образуют колонии различного размера, окраса, консистенции, формы. Различают колонии S и R типа. S -типа колонии круглые, гладкие, блестящие, выпуклые, с ровными краями, влажные. R - типа колонии более крупные, плоские, шероховатые, матовые, неправильной формы, с исчерченными краями. Большинство бактерий S типа. Колонии R типа образуют: 1) Возбудитель сибирской язвы, чумы, туберкулеза, дифтерии, а также микоплазмы. 16. Механизм размножения бактерий. Скорость роста и размножения бактерий и других микроорганизмов зависит от условий окружающей среды. Температура, свет, наличие кислорода, влажность и рН - фактор (уровень кислотности или щелочности) наряду с наличием питания влияют на скорость развития бактерий. Бактерии размножаются простым делением (вегетативное размножение) и способны к половому процессу. Бесполое размножение сводится к образованию двух одинаковых дочерних клеток (бинарное деление). Скорость роста и размножения клеток различна для разных видов бактерий и зависит от температуры, питательной среды (доступности питательных веществ), концентрации ионов водорода и других ионов. Важным фактором является концентрация кислорода и углекислого газа. 17. Методы выделения чистых культур аэробных бактерий. Этапы выделения 17.Выделение чистой культуры аэробных бактерий используется в лабораторной практике для микробиологической диагностики инфекционных заболеваний. Чистой культурой называется популяция бактерий одного вида, выращенная на питательной среде. Выделение чистой культуры аэробных бактерий достигается механическим разобщением исследуемого материала при посеве на питательные среды в присутствии кислорода. Для выделения чистых культур аэробов используется метод Дригальского, Шукевича и биологический метод. Метод Дригальского включает три этапа. Первый этап: из исследуемого материала готовят мазок, окрашивают его по Граму и др. методом и микроскопируют. Материал наносят петлей на всю поверхность питательной среды. После посева петлю стерилизуют, чашку подписывают на донышке и ставят вверх дном в термостат при температуре 37 на 18-24 часа. Второй этап: на следующий день посевы изучают на изолированные колонии и описывают характер роста. Изучают морфологию бактерий путем приготовления мазка, окрашенного по Граму. Далее для выделения чистой культуры производят пересев колонии в пробирку со скошенным МПА. Пробирки помещают термостат при температуре 37 на 18-24 часа. Третий этап: отмечают рост выделенной чистой культуры. При микроскопическом исследовании мазка из чистой культуры в нем обнаруживаются морфологически и тинкториально однородные клетки. Метод Шукевича осуществляется путем засевания исследуемого материала в конденсационную воду со скошенным МПА. Бактерии ,обладающие ползучим ростом из конденсационной воды выползают на поверхность агара. На следующий день проверяют на чистоту выделенной культуры. Из верхнего налета делают мазок, окрашивают его по Граму и микроскопируют. Для выделения чистой культуры микробов с трудом культивируемых на питательных средах используют биологический метод-заражение наиболее восприимчивых к данному виду возбудителя животных. После гибели или появления признаков заболевания животных забивают и производят посев крови и органов на питательные среды. Далее исследование проводят по методу Дригальского. 18. Методы выделения чистых культур анаэробных бактерий. Этапы выделения Выделение чистых культур анаэробны бактерий В практических лабораториях обычно для. выделения чистых культур анаэробов используются методы Цейселера или Вейнберга. Процесс выделения чистой культуры можно разделить на несколько этапов. Метод Цейселера. Первый этап: из исследуемого материала готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. При обнаружении подозрительных на анаэробы микробов исследуемый материал засевают на среду Китта-Тароцци. Пробирки заливают вазелиновым маслом или парафином и ставят в термостат на 18-24 часа при температуре 37 гр. Далее разводят в пробирках с расплавленным и остуженным сахарным МПА. Засеянные пробирки охлаждают, агар застывает и фиксирует микробы в глубине столбика. Пробирки помещают в термостат на 18-24 часа при температуре 37 гр.Второй этап: при обнаружении подозрительных колоний в столбике ,делают распил пробирки, колонию отбирают и делают пересев на среду Китта-Тароцци. после чего пробирки помещают в термостат на 18-24 часа при температуре 37 гр. Третий этап: через сутки проверяют на чистоту выделенной культуры. Метод Вейнберга Первый этап проводят так же, как и при методе Цейселера. Затем исследуемый материал, подращенный на среде Китга-Гаронци, последовательно разводят в пробирках с расплавленным и остуженным сахарным МПА. После чего его переносят в 3-5 пастеровских пипетки (трубки Виньяла). Засеянные пробирки быстро охлаждают холодной водой, при этом агар застывает и фиксирует разобщенное положение отдельных микробных клеток в глубине столбика агара Пробирки термостатируют при температуре 37 "С 18-24 ч. Второй этап. Выросшие в узких пробирках колонии изучают с помощью лупы. На месте отобранной подозрительной колонии делают распил оробирки. колонию отбирают и пересевают на среду Китта-Тароцци. 5 (робиркн культивируют в термостате 18-24 ч при температуре 37 "С Третий этап. Через сутки проверяют чистоту выделенной культуры. 19. методы культивирования анаэробов Культивирование всех видов бактерий производят в анаэробных условиях. Анаэробные условия можно создать при культивировании в анаэростате (на дно устанавливается свеча или наливается щелочной раствор пирагола, поглощающий кислород) и биологическим методом по Фортнеру или Малкиной. М-д по Фортнеру. Чашку Петри с толстым слоем питательного агара делят пополам, вырезанной полоской. На одну половину сеют культуру аэроба, на другую анаэроба. Чашку заливают парафином и помещают в термостат. Сначала растут аэробы. Когда они исчерпают весь кислород, начинается рост анаэробов. При посеве по Малкиной используют 2 пробирки со скошенным МПА соединенных трубкой. В одну сеют культуру аэробов, в другую – анаэробов. Сначала растут аэробы. Когда они исчерпают весь кислород, начинается рост анаэробов. Посевы анаэробов производят на среде Китта- Тароцци, которая состоит из МПБ. 0,5% глюкозы и кусочков печени или мясного фарша. Перед посевом среду прогревают на водяной бане 10-15 минут. Для удаления воздуха остужают. После посева среду заливают слоем вазелинового масла или парафином, с целью изоляции от атмосферного воздуха 20. Биохимические свойства бактерий. Они определяются способностью синтезировать разнообразные ферменты (сахаролитические и протеолитические), образовывать пигменты, токсины. Пигменты образуют на все бактерии. Ех: белый, золотистый, лимонно-жёлтый стафиллококки, желтый кремовый микобактерии туберкулеза. Пигменты защищают микробную клетку от ультрафиолетовой радиации. У бактерий выделяют эндо и экзо ферменты. Эндо ферменты располагаются в цитоплазме и ЦПМ. Экзо ферменты выделяются в окружающую среду. У бактерий различают 3 основные группы ферментов: 1.конститутивные - постоянно синтезируются в микробных клетках 2.индуцибельные - синтез которых индуцируется определенным субстратом. 3. репрессибельные – синтез их подавляется в результате избыточного накопления продукта реакции катализируемой данным ферментом. Ферментативность бактерий определяется сахаролитическими и протеолитическими свойствами. Определение сахаролитических ферментов проводят на средах Гисса (состоит из 1% пептонной воды, 0.5 % определенного углевода.Индикатор Андрнде). В пробирку со средой опускают поплавок для улавливания газообразных продуктов. Свежеприготовленная среда имеет соломенно-желтый цвет. При разложении углеводов, приобретает красный цвет, в результате сдвига рН в кислую сторону. Для определения протеолитических ферментов производят посев уколов исследуемой культуры в столбик МПЖ. Продолжительность культивирования 7-10 суток при комнатной t. При положительном результате наблюдается разжижение желатины. О протеолитической активности бактерий чаще судят по способности расщеплять белок до продуктов распада (индол и сероводород). Для этого исследуемую культура засеивают на МПБ между горлышком пробирки и пробкой устанавливают индикаторные бумажки. На сероводород инд. Бумажка пропитана уксуснокислым свинцом. (при выделении сероводорода она чернеет). А на индол индикаторная бумажка пропитана раствором щавелевой кислоты (при его выделении - краснеет) Так же для изучения биохимических свойств используется система индикаторная бумажная (СИБ) или мультимикротесты (ММТ). СИБ- набор бумажных дисков, пропитанных различными субстратами и индикаторами. ММТ - такие пластиковые планшеты, в лунках которых находятся различные субстраты с индикаторами, на которые наносят взвесь изучаемой культуры.после суточного инкубирования в термостате судят по биохимических свойствах культуры. 21.Ферменты бактерий. Методы изучения сахаролитических и протеолитических ферментов. У бактерий выделяют эндо и экзо ферменты. Эндо ферменты располагаются в цитоплазме и ЦПМ. Экзо ферменты выделяются в окружающую среду. У бактерий различают 3 основныегр ферментов: 1.конститутивные - постоянно синтезируются в микробных клетках 2.индуцибельные - синтез которых индуцируется определенным субстратом. 3. репрессибельные – синтез их подавляется в результате избыточного накопления продукта реакции катализируемой данным ферментом. Ферментативность бактерий определяется сахаролитическими и протеолитическими свойствами. Определение сахаролитических ферментов проводят на средах Гисса (состоит из 1% пептонной воды, 0.5 % определенного углевода.Индикатор Андрнде). В пробирку со средой опускают поплавок для улавливания газообразных продуктов. Свежеприготовленная среда имеет соломенно-желтый цвет. При разложении углеводов, приобретает красный цвет, в результате сдвига рН в кислую сторону. Для определения протеолитических ферментов производят посев уколов исследуемой культуры в столбик МПЖ. Продолжительность культивирования 7-10 суток при комнатной t. При положительном результате наблюдается разжижение желатины. О протеолитической активности бактерий чаще судят по способности расщеплять белок до продуктов распада (индол и сероводород). Для этого исследуемую культура засеивают на МПБ между горлышком пробирки и пробкой устанавливают индикаторные бумажки. На сероводород инд. Бумажка пропитана уксуснокислым свинцом. (при выделении сероводорода она чернеет). А на индол индикаторная бумажка пропитана раствором щавелевой кислоты (при его выделении- краснеет) 22. Микрофлора тела человека в различные возрастные периоды Новорожденные стерильные. Первые бактерии заселяются при прохождении по естественным родовым путям. Постепенное заселение ЖКТ при естественном ( лактобацилюс бифидус) вскармливании и искусственном ( лактобацилюс ацидофилюс).Верхние дыхательные пути и кожа заселяются микрофлорой матери и персонала. С течением времени бактерий становится все больше. 23.микрофлора кожи Преимущественно staphylococcus epidermidis, микрококки, сарцины, аэроб и анаэроб дифтероиди. Другие виды: staphylococcus aureus, стрептококки-транзиторные основная зона локализации - эпидермис, кожные железы, верхние отделы волосяных фолликулов. Первичная колонизация при родах подвержены бактерицидному действию и сального секрета уменьшение рН на исследования берут волосы, ногти, смывы с кожи, кусок кожи при травме 24.микрофлора мочеполовой системы Верхние отделы – стерильны. В нижних - staphylococcus epidermidis, негемолитические стрептококки, дифтероиды, candida. В наружных- mycobacterium smegmatis. У 15-20 % беременных strepcoccus agalactiae. На исследования берут мочу, мазки из наружных половых органов. 25. Микрофлора полости рта тут на микроорганизмы действует слюна, которая содержит лизоцим, смывающая их. Но в десневых кармах, щелях между зубами бактерии всегда присутствуют. В ротовой полости микроорганизмы делятся на автохтонные и аллохтонные. Первые это микрофлора характерная для данной области. Вторые- микробы присущие другим областям. Например, кишечник или носоглотка. Доминируют стрептококки.streptococcus mitior – локализируется на щеках. st.salivarius-сосочки языка. St. sangius et st. mutans – поверхность зубов. В более безкислородных участках заселены анаэробы- актиномицеты, бактероиды, фузобактерии и вейлонеллы. Так же есть спирохеты, микоплазмы, кандида и разнообразные простейшие(entamoeba buccalis et dentalis) Впервые бактерии в рот полость попадают при прохождении плода по родовым путям (лактобациллы, энтеробактерии, каринобактерии, стафилококки и микрококки).через 2-7 суток эта микрофлора замещается микрофлорой матери и персонала. На исследование материалы с поверхности щек, зубов, слюна. 26. микрофлора ЖКТ В желудке практически нет, т.к. есть желудочный сок. Есть тока helicobacter pylori. Общее кол-во не больше 103 мл. Верхние отделы тонкой кишки- candida, стрептококки и лактобациллы.так же 103 мл.т.к. щелочная рН и есть ферменты. Нижние отделы и толстая к-ка. Кол-во 1012 в 1 гр фекалии.их очень много:энтеробактерии, энтерококки, стафилококки, кишечные палочки. На исследование- из желудка-желудочный сок, к-к- с помощью ректомоноскопии 27. микрофлора дыхательных путей. Верхние отделы приспособлены для осаждения бактерий из вдыхаемого воздуха. Микроорганизмы- негемолитические и зеленящие стрептококки, не патогенные нейсерии, стафилококки и энтеробактерии, пневмококки и возбудитель коклюша. С возрастом увеличиваются свойства защитных механизмов и вероятность носительства понижается. Исследование-берут мокроту, бронхиоскопия(слизь) 28.дисбактериоз, факторы, влияющие на его формирование. Препараты для профилактики и лечения дисбактериоза. Дисбактериоз - это стойкие нарушения микробных цианозов в результате изменений физических свойств эпителия и приема антибиотиков. В результате выживают только стафилококки, кандиды и грамм – палочки. Так же причинами могут быть неправильное питание, курение и алкоголь. Для коррекции дисбактеризов – ЭУбИОТИКИ- взвеси бактерий в виде высушенных живых культур: лактобактерины, бифидобактерины, колибактерины,бактисубтил(соотве-но Lactobacillus, Bifidobacterium, eschrichia coli, Bacillus subtilus) Бификол, бифинорм,колтбактрин, бифидобактерии. 29. Гнотобиология и ее значение в медицинской микробиологии Гнотобиология – это наука изучающая организмы, которые не содержат микробактерии (стерильны). У них недоразвитые иммунокомпетентные органы (тимус, лимфоидная ткань кишечника), Т.к. нормальная микрофлора вызывает образование АТ в низких титрах (Ig A). Он составляет основу невосприимчивости к проникающим возбудителям. Их используют для изучения инфекций, иммунитета, т.к они высоковосприимчивы к инфекционным агентам. 30. Роль микробов – постоянных обитателей тела человека в физиологических процессах 1.Составляют конкуренцию для патогенных микробов. а) нормальная микрофлора взаимодействует с поверхностными рецепторами клетки. б) выделяют кислоты, спирты, лизоцим, которые ингибируют метаболизм и выделение токсинов патогенными видами. 2 стимуляция иммунной системы см.29. 3.Обеспечивают всасывание в кишечнике, выделяя глюкуронидазы и сульфатазы.4) обеспечивает организм Fe2+, Ca2+, vit K,D,B,PP 5)Инактивируют токсические продукты различного происхождения. 6) Выделение кислоты и газы оказывает благоприятное влияние на перистальтику и опорожнение. 18. Основные свойства бактериофагов. 1.Общий признак всех бактериофагов- внутриклеточный паразитизм; 2. не растет на искусственных питательных средах, размножаясь только внутри клеток микробов; 3. Вирусы обладают определенной наследственностью, воспроизводя себе подобных. 4. Генетический материал фагов- двунитевые ДНК или однонитевые ДНК. 5. обладает высокой специфичностью в отношении поражаемой клетки; 6. имеет антигенную обособленность от клетки хозяина; 7. имеет элементарные частицы величиною в пределах от 20 до 200 нм; 19. Взаимодействие вирулентного бактериофага с микробной клеткой. Размножение и выход дочерних популяций бактериофагов из бактериальной клетки сопровождается разрушением бак. клетки. (литические бактериофаги). Взаимодействие специфино, инфицируют только бактерий определенного вида. 20. Взаимодействие умеренного бактериофага с микробной клеткой. В случае если у бактериофага не хватает вирулентности, то лизируются не все бактерии в популяции, что приводит к встраиванию ДНК в нуклеотид батериальной клетки. В дальнейшем в такой культуре часть клеток лизируются в следствие реактивации бактериофага. Лизогенные культуры невосприимчивы к повторному заражению родственного бактериофага. 21. Практическое применение бактериофагов (фагодифференцировка и фаготипирование) Фагодифференцировка – метод идентификации выделенных культур бактерий, основанный на способности диагностических фагов лизировать определенные виды чувствительных бактерий. В основе лежит принцип совместного культивирования выделенных бактерий с соответствующими видовыми фагами. Положительным результатом считается наличие хорошо выраженного лизиса исследуемой культуры с видовым фагом. Фаготипирование проводят для определения отдельных вариантов (фаговаров) выделенных бактерий, что помогает установить источник инфекции, изучить эпидемиологические связи, отличить спорадические случаи заболеваний от эпидемических. 22.Практическое применение бактериофагов (фагодиагностика) Фагодиагностику проводят для определения неизвестного фага с помощью известной тест – культуры бактерий. Например, если исследуемый бактериофаг лизирует культуру возбудителя холеры, то это холерный бактериофаг. 23. Практическое применение бактериофагов (фагопрофилактика и фаготерапия) фагопрофилактика – применение бактериофагов для предупреждения инфекционных болезней в эпидемических очагах путем применения бактериофагов среди лиц с высоким риском заражения. Фаготерапия – метод лечения инфекционных заболеваний посредством применения коммерческих препаратов бактериофагов, к которым чувствительны возбудители. 25.Классификация модификаций. Бывают: морфологические – форма и величина культуральные – s и r формы биохимические – адаптивные ферменты 26. Классификация мутаций. прямые - потеря или изменение признака обратные (реверсии) - восстановление признака истинные - восстанавливается и фенотип и генотип супрессорные - восстанавливается только фенотип 27. Характеристика L-форм бактерий. L-формы – форма бактериальных клеток, при которой последние частично или полностью лишены клеточной стенки, но сохраняют способность к развитию Способность патогенных бактерий под действием пенициллина или лизоцима образовывать L-формы, у которых отсутствует клеточная стенка, являющаяся мишенью для пенициллина 28. Плазмиды бактерий, их виды и функциональное значение. Плазмиды содержат структурные гены, наделяющие бактериальную клетку разными, весьма важными для нее свойствами: • R-плазмиды — лекарственной устойчивостью (резистентностью). Передача R-плазмид от одних бактерий к другим приводит к быстрому распространению лекарственно-устойчивых бактерий; Col-плазмиды — способностью синтезировать бактериоцины - колицины - антибактериальные вещества, вызывающие гибель других бактерий того же или родственных видов. F-плазмиды, фактор фертильности, или половой фактор — определяет способность бактерий к образованию половых ворсинок и к конъюгации, способна передавать генетическую информацию; HLy -плазмиды — синтезировать гемолизин; Тох-плазмиды — синтезировать токсин; Ent – плазмиды – кодирующие плазмиды биодеградации — разрушать тот или иной субстрат и т. д. 29. Трансформация Трансформация - это непосредственная передача генетического материала (предварительно выделенной и очищенной ДНК) от одной бактерии (донор) другой (реципиент) / изменение свойств одной бактериальной клетки под влиянием ДНК, выделенной из другой бактериальной клетки. 30. Трансдукция Трансдукция – это передача генетического материала от одной бактерии другой с помощью дефектных бактериофагов (умеренный бактериофаг, у которого в процессе репродукции в момент сборки фаговых частиц в головку вместе с фаговой ДНК проникает какой-либо фрагмент донорской ДНК и при этом утративший часть своего генома) 31. Конъюгация Конъюгация – это непосредственная передача генетического материала от донора к реципиенту через конъюгативные мостики Клетке-донору необходимо наличие F-плазмиды (полового фактора). 32. Молекулярно-биологический метод. Полимеразная цепная реакция (ПЦР). ПЦР нужна если хотим определить наличие конкретного гена Сущность этой реакции, заключается в амплификации молекул ДНК, т.е. многократном её копировании с образованием большого числа идентичных фрагментов. Ход реакции: Денатурация (плавление) – молекулу ДНК нагревают, при этом цепи ДНК расходятся Отжиг, когда температуру понижают, чтобы праймеры моглисоединиться с соответствующими концами двух цепей ДНК. Элонгация, когда происходит наращивание дочерних цепей ДНК. Далее цикл обычно повторяют 25-40 раз Затем проводят Секвенирование генома по Сегнеру |