Эндо среда. Эндо среда (S. Endo)
 Скачать 24.62 Kb.
|
|
Эндо среда Эндо среда (S. Endo) — это дифференциально-диагностическая среда для выделения и идентификации кишечных бактерий при бактериологических исследованиях пищевых продуктов, сточных вод и пр. Состав среды Эндо: пептона — 1%, лактозы — 1 %, двузамещенного фосфорнокислого калия (К2НРO4) — 0,35%, агар-агара — 1,5%. Все ингредиенты, за исключением лактозы, растворяют в воде при кипячении или в автоклаве. Во избежание карамелизации сахара лактозу добавляют после растворения всех остальных компонентов среды. Кроме лактозы, среда не должна содержать никаких других углеводов, поэтому при ее изготовлении не рекомендуется использование мясной воды; можно применять любой пептон или гидролизат белков. Индикатор готовят ex tempore и добавляют к расплавленной питательной основе. Среда может быть использована сразу после приготовления без предварительной стерилизации; при необходимости ее стерилизуют в течение 30 мин. при t° 110°; рН готовой среды 7,4—7,6. Индикатором служит соединение основного фуксина с сернистокислым натрием. Приготовление индикатора: 0,25 г безводного сернистокислого натрия или 0,5 г кристаллического (из расчета на 100 мл среды) растворяют в 5 мл дистиллированной воды и добавляют спиртовой (1—2%) раствор основного фуксина до тех пор, пока раствор из красного не превратится в бледно-розовый. Приготовленный индикатор добавляют к расплавленной питательной основе и после тщательного перемешивания среду разливают в стерильные чашки Петри, которые подсушивают в термостате при 37° в течение 30 мин. в открытом состоянии. Готовая к употреблению среда Эндо имеет бледно-розовый цвет либо бесцветна; она должна быть использована в течение суток, так как при длительном хранении происходит покраснение среды и она становится непригодной. Колонии бактерий, сбраживающих лактозу, на среде Эндо приобретают интенсивно красный цвет с зеленым металлическим блеском. Бактерии, не сбраживающие лактозу, формируют бесцветные либо цвета окружающей среды колонии. В среде Эндо основной фуксин, в химическом отношении являющийся производным солянокислого розанилина, при соединении с сернистокислым натрием вследствие редуцирования обесцвечивается. При росте бактерий, разлагающих лактозу, промежуточный продукт (ацетальдегид), возникающий в результате окисления сахара, реагирует с сернистокислым натрием и фуксин вновь приобретает красный цвет. Широкое распространение получил сухой агар Эндо, приготовляемый по специальной прописи и выпускаемый в виде порошка. При изготовлении среды Эндо берут 5 г порошка на 100 мл дистиллированной воды, нагревают до его растворения и, прокипятив 5 мин., разливают в стерильные чашки Петри. Тифо-паратифозные и дизентерийные бактерии на среде Эндо образуют бесцветные колонии, кишечная палочка и другие разлагающие лактозу микроорганизмы — красные. Необходимо помнить, что фуксин обладает бактериостатическим действием, которое более выражено при температуре 37°. Поэтому учет результатов следует производить дважды: через 24 часа после инкубации в термостате и 24—48 часов выдерживания посевов при комнатной температуре. Левина среда Левина среда (М. Levine; синоним эозин-метиленблау агар) — это цветная элективная питательная среда, применяемая для дифференцирования микроорганизмов кишечной группы при микробиологической диагностике кишечных инфекций — брюшного тифа, сальмонеллезов, дизентерии, колиэнтеритов. Стабильна при хранении в течение нескольких дней. Наличие в среде лактозы позволяет выделять патогенную микрофлору, не способную разлагать этот углевод. Входящие в состав среды Левина органические красители задерживают рост сапрофитов, что позволяет использовать среду для непосредственного засева исследуемого материала. Для получения стабильных результатов рекомендуется при изготовлении среды Левина применять ингредиенты одной и той же марки. Наиболее удобно раздельно готовить основную среду, растворы лактозы и красителей. Указанные ингредиенты заготовляют впрок и перед употреблением смешивают. Основная среда: 1) пептон бактериологический — 10 г; 2) агар-агар — 15 г; 3) калий фосфорнокислый двузамещенный (К2НРO4) — 2 в; 4) вода дистиллированная — 1 л. Разливают по 100 мл и стерилизуют при 120° в течение 15—30 мин. Дифференциальная среда: на каждые 100 мл расплавленной основной среды добавляют при помешивании следующие растворы, приготовленные на дистиллированной воде и простерилизованные дробно текучим паром три дня подряд. Ингредиенты: 1) 20% раствор лактозы— 5 мл; 2) 2% раствор эозина бактериологического — 2 мл; 3) 0,5% раствор метиленового синего — 1,5 мл. Среду разливают в чашки Петри, подсушивает. Готовая среда имеет сине-фиолетовый цвет. При отсутствии пептона среду можно готовить на основе перевара Хоттингера (рН=7,2—7,3). Широкое применение нашла сухая среда Левина, выпускаемая промышленностью. Патогенные бактерии — возбудители брюшного тифа, сальмонеллезов, дизентерии,— не разлагая лактозы, растут на среде Левина в виде мелких, круглых, прозрачных, чаще бесцветных колоний, иногда с розоватым или голубоватым оттенком. Кишечная палочка образует на среде Левина небольшие гладкие колонии темно-синего цвета. У молодых колоний окраска может наблюдаться только в центре. Протей растет в виде небольших оранжево-желтых колоний, цвет среды вокруг колоний изменяется. Колонии других бактерий подобной картины не дают. Гисса среды Гисса среды («пестрый ряд») — это дифференциально - диагностические среды, используемые для выявления сахаролитической активности бактерий. В дистиллированной воде растворяют 1% пептона и 0,5% поваренной соли. Затем прибавляют 1% индикатора Андреде или 0,1% спиртового раствора бромтимолового синего и нагревают до t° 80°; затем доводят рН до 7,2 (при комнатной температуре). После этого смесь кипятят 5 мин., фильтруют и доливают водой до первоначального объема. Добавив 0,5—1% одного из углеводов, среду разливают по пробиркам с поплавками. При изготовлении полужидких сред Гисса следует добавлять 1% углеводов и 0,4% агара. Среды стерилизуют в течение 3 дней текучим паром по 30 мин. или 15 мин. при 0,5 атм. Среду Гисса выпускают полужидкой с индикатором BP (смесь водного голубого и розоловой кислоты). Среды Гисса используют, в частности, для идентификации энтеробактерий. См. также Дифференциально-диагностические среды. OЛЬКЕНИЦКОГО СРЕДА (И. С. Олькеницкий, советский микробиолог) — дифференциально-диагностическая среда для бактерий кишечной группы, содержащая три сахара и мочевину. О. с. состоит из следующих компонентов: 100 мл питательного агара, 1 г лактозы, 1 г сахарозы, 0,1 г глюкозы, 1 г мочевины, 0,02 г соли Мора (двойной соли сульфата железа и аммония), 0,03 г тиосульфата натрия, 0,4 жл 0,4% р-ра фенолового красного. Для приготовления О. с. в одной пробирке растворяют соль Мора с тиосульфатом натрия и небольшим количеством дистиллированной воды, в другой пробирке — мочевину с углеводами. Затем все ингредиенты смешивают со стерильным расплавленным агаром, устанавливают pH 7,2 — 7,4; среду разливают по пробиркам, стерилизуют текучим паром 3 дня подряд по 20 мин. После стерилизации среду скашивают, она должна иметь бледно-розовый цвет. Посев исследуемой чистой культуры бактерий на О. с. проводят вначале по скошенной поверхности, а затем уколом вглубь столбика. Инкубацию проводят в течение 18— 48 час. при t° 37°. Пожелтение скошенной части агара указывает на расщепление лактозы, сахарозы или обоих сахаров; пожелтение столбика агара — на расщепление глюкозы. В столбике агара отмечают наличие газа в виде пузырьков или разрывов среды. О. с. позволяет определять расщепление мочевины с образованием аммиака и углекислого газа. Аммиак, нейтрализуя к-ту, образующуюся при расщеплении глюкозы, изменяет цвет столбика агара на красный (до малинового). Добавление к среде соли Мора и тиосульфата натрия позволяет выявлять у исследуемой культуры образование сероводорода по почернению среды в результате превращения сульфата железа в сульфид, имеющий черный цвет. ПЛОСКИРЕВА СРЕДА (Н. В. Плоскирев, совр, советский микробиолог; син. сухой бактоагар Плоскирева) — элективная (избирательная) и дифференциально-диагностическая среда для выделения патогенных энтеробактерий (шигелл и сальмонелл). Состав среды: питательного агара с желчными солями 53,6%, лимоннокислого натрия 14,4%, гипосульфита натрия 11%, лактозы 12%, двузамещенного фосфата натрия 3,7%, хлорида натрия 3,7%, кальцинированной соды 1,148%, нейтрального красного 0,03—0,06%, бриллиантового зеленого 0,002% и йода 0,04%. П. с. выпускают в сухом виде. Для приготовления среды 6 г порошка растворяют при подогревании в 100 мл дистиллированной воды и разливают в чашки Петри. Чашки оставляют открытыми до застывания среды. П. с. применяют для посева любого материала (испражнений, мочи, желчи, трупного материала), а также для высева со сред обогащения при исследовании на обнаружение шигелл или сальмонелл, к-рые на П. с. растут в виде бесцветных круглых колоний с ровными краями диаметром ок. 1 мм. Шигеллы Зонне могут образовывать крупные мутноватые колонии с изрезанными краями (плоские формы). Шигеллы Григорьева — Шиги на П. с. не вырастают. Кишечная палочка в отличие от шигелл и сальмонелл растет в виде отдельных колоний брусничного цвета Среда Раппопорта является средой обогащения и дифференциально-диагностической средой. В ее состав входит: желчный бульон 10%, 2% глюкоза, индикатор (кислый фуксин, обесцвеченный щелочью; в щелочной среде бесцветный, в кислой – красный). Назначение: для накопления тифо-паратифозных бактерий при посеве крови больного, а также для ориентировочной дифференциации тифо-паратифозных бактерий. Принцип д-я: при росте тифо-паратифозных бактерий из-за ферментации глюкозы происходит диффузное помутнение и покраснение среды. Для паратифозных бактерий, в отличие от брюшно-тифозных, наличие в поплавке газа. Рапопорт среда среда обогащения, применяемая для выделения сальмонелл из крови. Для ее изготовления к 10% желчному бульону с рН 7,2 добавляют 2% глюкозы (предварительно разведенной в 5 мл дистил. воды) и 1% индикатора Андраде (или 0,1% бром-крезолового пурпурового). Смесь разливают по 50 мл во флаконы с поплавками размерами 60x8 мм. Стерилизуют 3 дня по 30 мин текучим паром. Засевают 5 -10 мл свежевзятой крови. Инкубируют при 37°С несколько дней. При росте сальмонелл среда мутнеет, окрашивается в красный или желтый цвет, в поплавке может появиться газ. Пересевают на среды Эндо, Расселла, Олькеницкого. Среда Рессела – комбинированная, дифференциально-диагностическая. Состав: МПА, лактоза 1%, глюкоза 0,1%, индикатор (водный голубой и розоловая к-та; в щелочной среде розовая, в кислой – синяя). Назначение: для отсева «подозрительных» колоний с целью выделения чистых культур и определения их ферментативной активности по отношению к глюкозе и лактозе. Расселла среда (F. Russell) — плотная цветная дифференциально-диагностическая среда, используемая для идентификации микробов кишечной группы. Среду Расселла можно готовить на любой основе: мясном или казеиновом переваре по Хоттингеру (соответственно разведенных в 5—6 или 4—5 раз), дрожжевом аутолизате (профильтрованном и разведенном в 2 раза), мартеновском пептоне и др. К расплавленному и охлажденному до 50—60° 1% агару, приготовленному на любой питательной основе, добавляют 4% индикатора Андраде, устанавливают рН=7,3—7,4 и после этого прибавляют 1% лактозы и 0,1% глюкозы. Готовая среда Расселла прозрачна и имеет слабо-желтую окраску. Среду разливают в пробирки по 10—15 мл и стерилизуют автоклавированием при t° 112° в течение 20 мин. либо текучим паром 2—3 дня по 30 мин., после чего дают застыть таким образом, чтобы нижняя часть оставалась столбиком, а верхняя была скошена. Посев на среде Расселла производят глубоким уколом в столбик и рассевом штрихом на поверхности скошенной части. Посевы помещают в термостат при t° 37° и на следующие сутки учитывают результаты. При росте бактерий, сбраживающих глюкозу (возбудители дизентерии и тифо-паратифозных инфекций), происходит покраснение среды только в глубине столбика по уколу. Образование газа регистрируется по пузырькам, накапливающимся в толще среды, что в случае интенсивного газообразования приводит к разрыву столбика. При росте бактерий, сбраживающих лактозу (кишечная палочка), происходит резкое покраснение среды как по уколу, так и по штриху на скошенной поверхности. Существуют различные модификации среды Расселла, в которых глюкозу и лактозу заменяют соответственно маннитом и сахарозой или готовят лактозо-сахарозо-маннитную среду; в определенных случаях к среде добавляют еще хлористый свинец для регистрации образования сероводорода. В качестве индикатора можно использовать также бромтимоловый синий, розоловую кислоту, феноловый красный, а также 0,1% спиртового раствора (1,6%) бромкрезолового пурпурного. Иногда применяют сухую среду типа среды Расселла, а также среду Расселла, составленную из сухих сред Гисса. |