Сроп. СРОП10. Этапы клонирования
 Скачать 14.85 Kb.
|
|
Этапы клонирования. Клонирование ДНК (клонирование генов) — процесс выделения заданной последовательности ДНК и получения многих её копий in vitro. Клонирование ДНК часто применяют для амплификации фрагментов, содержащих гены, а также любые другие последовательности — например, промоторы, некодирующие последовательности, химически синтезированные олигонуклеотиды и случайные участки ДНК. Получение копии заданного гена. Это самая трудная часть процесса. Например, в геноме человека (геном — это вся ДНК в клетке) насчитывается около 3 млрд, нуклеотидов и = 100 000 генов (по последним данным ≈ 30 000). Типичный ген имеет несколько тысяч пар нуклеотидов в длину, так что даже найти конкретный ген не так просто. Для получения копии гена используют три метода: С помощью обратной транскриптазы получают копию гена на матрице его мРНК; Синтезируют искусственный ген; Используют метод «дробовика» («shotgun»), включающий разрезание ДНК рестрикционными ферментами (рестриктазами) и поиск фрагмента, содержащего нужный ген. Векторы клонирования. Имеются два типа векторов обычные и специализированные. Обычные векторы клонирования дают возможность из огромного количества генов выбрать искомый и создать библиотеку генов, а специализированные связаны с экспрессией генов. Обычные векторы применяют в основном для вьщеления и изучения генов, входящих в состав генома различных клеток. Что касается специализированных векторов, то они представляют особый интерес для биотехнологии, так как экспрессия соответствующих генов дает основание для сверх синтеза целевых продуктов. Для этого ген, кодирующий необходимый белок, вводится в хромосому компетентных клеток и ассоциируется с промотором. |