Тема 1 грампол кокки 2022. Грамположительные кокки
 Скачать 4.17 Mb.
|
ГРАМПОЛОЖИТЕЛЬНЫЕ КОККИГРАМПОЛОЖИТЕЛЬНЫЕ КОККИ Стафилококки: семейство Micrococcaceae, род Staphylococcus Staphylococcus spp. - Гнойно-воспалительные заболевания Стрептококки Streptococcus spp. - Гнойно-воспалительные заболевания, скарлатина, рожистое воспаление Streptococcus pneumoniae - острые пневмонии и бронхит Энтерококки - Enterococcus spp. Микрококки - Micrococcus spp. Пептококки - Peptococcus spp. Пептострептококки - Peptostreptococcus spp. spp. - это сокращение от латинского «speciales» (виды). Пишется после названия семейства или рода организма (любого, не обязательно микроорганизма), употребляется для обозначения видов данного семейства или данного рода. Обычно подразумеваются либо различные виды указанного семейства/рода, либо когда точный вид не установлен, но родовая принадлежность несомненна. Возможны варианты употребления: sp. (с одной «p») - сокр. от «species» (вид), единственное число. spp. (с двумя «p») - сокр. от «speciales», множественное число. Например, Streptococcus sp. - имеется в виду некий (один) вид рода Streptococcus. Streptococcus spp. - имеются в виду несколько разных видов рода Streptococcus. Для обозначения подвидов (subspecies) используется сокращение ssp. (или subsp.); var. (varietas) - разновидность данного вида. Стафилококки (род Staphylococcus) (греч. staphyle - виноградная гроздь) - грамположительные круглые кокки диаметром 1мкм, располагающиеся в чистой культуре в виде скоплений, напоминающих виноградные гроздья, а в патологическом материале - небольшими скоплениями кокков. Неподвижны. Красятся всеми анилиновыми красителями. Факультативные анаэробы. Разделяются на виды Staphylococcus aureus (наиболее патогенный для человека), S. epidermidis, S. saprophyticus и др. Колонии S.aureus, растущие на кровяном агаре. Видны зоны гемолиза вокруг Мазок чистой культуры S.aureus колоний Окраска по Граму Биохимические свойства стафилококков1. Ферментируют углеводы до кислоты: лактозу, мальтозу, глюкозу, левулезу, сахарозу. 2. Ферментация азотсодержащих соединений: - ферментируют белок (разжижение желатина); - ферментация свободных аминокислот: индол не выделяют (не расщепляют триптофан), аммиак выделяют.
Культуральные свойства стафилококковРавномерное помутнение Возможно, но не обязательно (факультативные анаэробы) РН – 7,2-7,5 Длительность культивирования 24 ч. Характер роста Условия оптимального роста Наличие О2 Колонии мелкие, (1,0 – 3,0 мкм) гладкие, кремового, Желтого или оранжевого цвета Питательная среда - ЖСА 370С Питательная Солевой бульон Желточно-солевой агар (ЖСА) - элективная для стафилококков среда. Состав: МПА, 10% натрия хлорида, взвесь желтка куриного яйца. Высокое содержание натрия хлорида подавляет большинство бактерий, а присутствие яичного желтка выявляет свойственный этому роду фермент лецитиназу. При росте на желточно-солевом агаре вокруг колоний S.aureus образуются радужные венчики. Роль в патологии человекаСтафилококк золотистый (Staphylococcus aureus) - наиболее патогенный для человека. Назван по способности образовывать золотистый пигмент. Может вызывать у человека гнойные воспалительные процессы почти во всех органах и тканях. Стафилококк эпидермальный (Staphylococcus epidermidis) — часто встречается на коже и слизистых оболочках человека, может вызывать сепсис, эндокардит, конъюнктивит, гнойную инфекцию ран и гнойные инфекции мочевыводящих путей. Стафилококк сапрофитный (Staphylococcus saprophyticus) — может вызывать острый цистит и уретрит. Симптомы и течение. Инкубационный период продолжается несколько дней.Клинические проявления стафилококковых болезней многообразны. Их можно разделить на следующие группы: Заболевания кожи и подкожной клетчатки (фурункулы, пиодермии, сикоз, абсцессы, флегмоны). Ожогоподобный кожный синдром. Поражение костей и суставов (остеомиелиты, артриты). Синдром токсического шока. Стафилококковая ангина. Стафилококковый эндокардит. Пневмонии и плевриты. Острые стафилококковые энтериты и энтероколиты. Отравление стафилококковым энтеротоксином. Стафилококковый менингит и абсцесс мозга. Стафилококковые заболевания мочевых путей. Стафилококковый сепсис. Факторы вирулентности Staphylococcus aureus
Факторы вирулентности Staphylococcus aureus ТоксиныАльфа-, бета-, гамма-, дельта-токсины, лейкоцидин-токсичны для многих клеток, включая лейкоциты, эритроциты, макрофаги и фибробласты Альфа-токсин - порообразующий токсин. Эксфолиативный токсин - вызывает синдром "ошпаренной кожи", разрушая межклеточные контакты - десмосомы в гранулярном слое эпидермиса. Суперантиген (поликлональная активация Т-лимфоцитов, стимуляция продукции цитокинов) Токсин синдрома токсического шока - нейротропные, вазотропные эффекты. Суперантиген. Энтеротоксины (А - Е) - нейротропные эффекты, действие на энтероциты (стафилококковая пищевая интоксикация). Суперантиген. Факторы вирулентности Staphylococcus aureus ФЕРМЕНТЫПлазмокоагулаза (коагулаза) - конверсия фибриногена в фибрин, препятствующего контакту с фагоцитами ("псевдокапсула") Гиалуронидаза - разрушение соединительной ткани Липазы - гидролиз липидов Стафилокиназа (фибринолизин) - разрушение фибриновых сгустков Дезоксирибонуклеаза - расщепление ДНК, разжижение гноя ДРУГИЕ КОМПОНЕНТЫ: Каротиноидные пигменты - инактивация бактерицидных форм кислорода. Устойчивость к NaCl, жирным кислотам. Размножение в потовых и сальных железах СТРЕПТОКОККИСТРЕПТОКОККИ Таксономия. Семейство – Streptococcaceae. Содержит 7 родов. Род Streptococcus включает 21 вид, в том числе - Виды– S. pyogenes, S. pneumoniae, S. faecalis, S. agalactiae и др. Биохимические свойства. Ферментативная активность неодинакова: наименьшей биохимической активностью обладают наиболее патогенные стрептококки. Они ферментируют ряд углеводов (глюкозу, лактозу, манит, мальтозу) с образованием кислоты без газа . Однако ферментация углеводов не является стабильным и четким признаком, поэтому не используется для дифференциации и идентификации стрептококков. Стрептококки обладают слабой протеолитической активностью, в частности, не разжижают желток. Стрептококки - кокки неправильной круглой формы, располагающиеся в виде цепочек или попарно, размеры 0,5-2,0 мкм. Неподвижны, спор не имеют, некоторые образуют капсулы. Грамположительные, факультативные анаэробы Стрептококк в гное. Окраска по Граму Strepococcus pyogenes. Чистая культура. Окраска метиленовым синим. Рост стрептококков на кровяном агаре.Виды гемолизабета-гемолиз альфа-гемолиз гамма-гемолиз α-гемолиз (альфа-гемолиз) — происходит частичное разрушение эритроцитов с сохранением клеточной стромы, в ходе этого типа гемолиза гемоглобин превращается в метгемоглобин, за счёт чего питательная среда в зоне роста бактерий приобретает зеленоватый оттенок. Наиболее часто α-гемолиз вызывают зеленящие стрептококки. β-гемолиз (бета-гемолиз) — полный лизис эритроцитов, при котором в зоне роста микроорганизма питательная среда обесцвечивается. Такой тип гемолиза характерен для стафилококков, бета-гемолизирующих стрептококков, листерий, клостридий и некоторых других микроорганизмов. γ-гемолиз (гамма-гемолиз) — отсутствие гемолиза, цвет кровяного агара в зоне роста микроорганизма остаётся неизменным Факторы вирулентности стрептококков.Капсула - антифагоцитарная активность M-белок - антифагоцитарная активность, разрушает C3b-компонент комплемента. F-протеин опосредует прикрепление стрептококка к эпителиальным клеткам Пирогенные экзотоксины (эритрогенины) -обладают пирогенным эффектом, усиливают гиперчувствительность замедленного типа и чувствительность к эндотоксину, иммуносупрессивный эффект на функции B-лимфоцитов, появление сыпи. стрептолизин S - разрушает лейкоциты, тромбоциты и эритроциты; стимулирует освобождение лизосомальных ферментов; не иммуногенен. Стрептолизин О - разрушает лейкоциты, тромбоциты и эритроциты; стимулирует освобождение лизосомальных ферментов; иммуногенен Стрептокиназа - разрушает кровяные сгустки (тромбы), облегчает распространение бактерий в тканях ДНК-аза- деполимеризует внеклеточную ДНК в гное Двухфазная среда (МПБ+глюкоза+МПА)Анализаторы BACTEСПринцип работы Для посева используются специальные флаконы BACTECTM Fluorescent Series. Рост и размножение микроорганизмов сопровождается увеличением концентрации CO2. Каждый флакон имеет флуоресцентный химический сенсор, реагирующий на такое увеличение. Сенсор опрашивается прибором каждые 10 минут и при достоверном нарастании сигнала выдается ответ о наличии в пробе жизнеспособных микроорганизмов. Большинство положительных результатов выдается в первые 72 часа исследования. Питательные среды BACTEC™ Plus Aerobic/F Medium - неселективная среда для выделения аэробных (факультативно анаэробных) микроорганизмов (бактерий и грибов) из крови. Среда содержит сорбенты, связывающие бактерицидные компоненты крови. BACTEC™ Plus Anaerobic/F Medium - неселективная среда для выделения анаэробных бактерий из крови. Среда содержит сорбенты, связывающие бактерицидные компоненты крови. BACTEC™ PEDS PLUS™/F Medium - среда для выделения аэробных бактерий из крови у детей, а также малых объемов (до 3 мл) другой крови. BACTEC™ Lytic/10 Anaerobic/F Medium - неселективная среда для выделения анаэробных бактерий из крови. В среду входит сапонин, лизирующий клетки крови и облегчающий выделение внутриклеточно паразитирующих микроорганизмов BACTEC™ Myco/F Lytic Medium - среда используется в качестве дополнительной для выделения из крови микобактерий и грибов. В среду входит сапонин, лизирующий клетки крови и облегчающий выделение внутриклеточно паразитирующих микроорганизмов BACTEC™ Mycosis-IC/F Culture Vials - селективная среда (хлорамфеникол + тобрамицин) для выделения дрожжевых и плесневых грибов из крови. Назначение питательных сред (в схеме исследования отделяемого раны)Кровяной агар предназначен для выделения всех встречающихся в клинической практике прихотливых микроорганизмов, в частности, грамположительных бактерий. Содержит кровь, что позволяет определить тип гемолиза – один из основных ориентировочных тестов при идентификации бактерий, напр., стрептококков. Сахарный бульон - применяют для культивирования широкого круга микроорганизмов, в т.ч., стрептококков и др. бактерий. ЖЕЛТОЧНО-СОЛЕВОЙ АГАР (СРЕДА ЧИСТОВИЧА) - селективная среда, предназначенная для культивирования стафилококков. Солевой бульон. Предназначен для селективного обогащения при посеве материала на наличие стафилококков. Реакция плазмокоагуляции Принцип. Под действием плазмокоагулазы (фермента St. aureus) активируется естественная система свертывания крови (плазминогенпротромбин). Для постановки реакции применяется готовый реагент: сухая кроличья плазма. В пробирке с 1 мл плазмы, куда добавлена суточная агаровая культура исследуемого штамма с помощью бактериологической петли, образуется сгусток. Тест на определение каталазной активности Каталаза— фермент, который катализирует разложение образующегося в процессе биологического окисления токсичного пероксида водорода на воду и молекулярный кислород. В пробирку вносят 4-5 капель 3% раствора перекиси водорода. Деревянной палочкой снимают с агара колонию и опускают в реактив. При положительном результате появятся пузырьки газа. Определение ферментации маннита (1% - ный раствор) в анаэробных условиях Стафилококки являются факультативными анаэробами, микрококки - облигатными аэробами. В связи с этим стафилококки способны расти и ферментировать маннит в анаэробных условиях, микрококки лишены этой способности. Принцип. При ферментации маннита в анаэробных условиях образуется молочная кислота, в связи с чем среда закисляется и рН ее снижается. Закисление среды выявляется по изменению окраски индикатора, добавленного в среду. Ингредиенты. Полужидкие среды (0,3% агар), содержащие 1% маннита - это среда Хью-Лейфсона с индикатором бромтимоловым синим. Ход исследования. Суточную агаровую культуру исследуемого штамма с помощью бактериологической петли сеют в столбик среды уколом до дна пробирки, а затем на поверхность агара наливают 1,5 мл стерильного вазелинового масла для создания анаэробных условий. Посев инкубируют при 37 град. С в течение 5 суток, ежедневно регистрируя результаты. Реакция считается положительной, если происходит желтое окрашивание столбика среды, занимающее не менее 2/3 его высоты. Тесты для идентификации золотистого стафилококка Внутривидовое типирование (фаготипирование штаммов S. аureus)Для внутривидового дифференцирования S. aureus применяется метод фаготипирования, позволяющий получить фаговую метку большинства штаммов и с большей долей вероятности решить вопрос об идентичности или различии сопоставляемых культур, что очень важно для выявления источников и путей распространения стафилококковой инфекции. Сухие фаги Международного набора (22 фага) выпускаются предприятием по производству бактерийных препаратов НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи. В каждую коробку вложена инструкция по применению фагов и учету результатов. Принцип. Штаммы S. aureus обладают избирательной чувствительностью к литическому действию ряда стафилококковых бактериофагов, составляющих Международный набор типовых фагов (22 фага). Чувствительность исследуемого штамма к одному или нескольким типовым фагам определяет фаготип штамма, т.е. его фаговую метку. Диагностика пневмококковой пневмонииИсследуемый материал – мокрота. Бактериоскопический метод (окраска по Граму): грамположительные диплококки ланцетовидной формы. 2. Бактериологический метод: - посев на кровяной агар с диском мономицина (мономицин угнетает развитие посторонней флоры - стафилококков, грамположительных энтеробактерий, гемофильной палочки, и не подавляет рост пневмококков, т.е., оказывает селективное действие). Рост пневмококков на кровяном агаре: колонии мелкие, напоминающие росинки, прозрачные в проходящем свете. Окружены зоной альфа-гемолиза (неполного гемолиза). Идентификация выделенной культуры по чувствительности к желчи, оптохину и антигенным свойствам. Идентификация пневмококков (S. Pneumoniae)Оптохиновый тест: чистую культуру засевают на агар, содержащий 1:50.000-1:100.000 оптохина (производное хинина). На следующие сутки учитывают результат. Пневмококки не растут в присутствии оптохина. Тест с желчью: основан на способности 10% желчи лизировать пневмококк. В две пробирки с 2-3 мл сывороточного бульона с 10% желчи крупного рогатого скота и без нее добавляют 0,5-1 мл испытуемой бульонной культуры и выдерживают 1 час при 37 град. С. При лизисе пневмококка отмечается просветление бульона по сравнению с контролем. Серологические тесты: основаны на реакции полисахаридных антигенов капсулы с соответствующими антисыворотками. Используют реакцию агглютинации на стекле. Клинические рекомендации по диагностике, лечению и профилактике тяжелой внебольничной пневмонии (ТВП) у взрослых. Российское респираторное общество (РРО©) Межрегиональная ассоциация по клинической микробиологии и антимикробной химиотерапии (МАКМАХ©) 2014 г. Для экспресс-диагностики ТВП, вызванной S. pneumoniae, используется иммунохроматографический тест на выявление пневмококкового клеточного полисахарида (С-полисахарида) в моче. Тест демонстрирует приемлемую чувствительность (50–80%) и достаточно высокую специфичность (более 90%) при ТВП у взрослых по сравнению с культуральными методами. Его использование рекомендуется всем пациентам с ТВП, особенно при невозможности получения качественного респираторного образца и обследовании пациентов, получавших системную антибиотикотерапию. Ключевыми преимуществами теста являются быстрота получения результата (15 мин), доступность клинического материала для исследования, возможность выполнения после начала антибиотикотерапии без существенного снижения информативности (в отличие от культурального исследования). |