Часть про исследование крови. кровявя. Каплю осторожно покрывают покровным стеклом так, чтобы оно плотно прилегало к камере, а сама капля распределилась по всей поверхности сетки и не поднимала стекло
 Скачать 16.88 Kb.
|
|
Каплю осторожно покрывают покровным стеклом так, чтобы оно плотно прилегало к камере, а сама капля распределилась по всей поверхности сетки и не поднимала стекло. После этого камеру помещают под микроскоп и, выждав несколько минут, когда эритроциты осядут на дно, начинают их подсчёт. Обычно производят подсчёт, начиная с маленького квадратика, расположенного в верхнем левом углу большого квадрата. Записав количество находящихся в нём эритроцитов, переходят ко второму, третьему четвертому квадратикам того же ряда, т. е. слева направо. Затем в обратном порядке, то есть справа налево, идут по второму ряду квадратиков и т. д. Чтобы избежать повторной записи одной и той же кровяной клетки, кроме клеток, расположенных в середине квадратика, при подсчете прибавляют к полученной сумме эритроциты, касающиеся только левой и верхней ограничивающих его линий. Клетки, касающиеся правой его линии, относят к следующему, правому, квадратику, а прилегающие к нижней линии - к нижнему квадратику. Для получения точных данных следует пересчитать не менее 3-5 больших квадратов. Полученные цифры эритроцитов складывают и затем делят на количество квадратиков, в которых они находятся. Таким образом, получают среднее количество эритроцитов в 1/4000 мкл разведенной крови. Умножив полученное среднее на 4000 и степень имевшегося разведения крови (100 или 200), получают цифру, указывающую количество эритроцитов в 1 мкл крови. Кроме того, те же результаты можно получить, умножив количество эритроцитов большого квадрата при разведении крови 1 : 200 на 50 000. При разведении же крови 1 : 100 количество эритроцитов в 1 мкл крови определяется умножением количества эритроцитов большого квадрата на 25 000 (Таблица 1) Подсчет лейкоцитов. Чтобы посчитать количество лейкоцитов, необходимо убрать эритроциты. Это достигается их гемолизом в растворе уксусной кислоты, которая не действует губительно на лейкоциты. Наиболее оптимальным считается использование 20-квадратного количества раствора уксусной кислоты. Разведение крови и заполнение счетной камеры: в мерную пипетку на 1 мл набирают точно 0,4 мл раствора Тюрка и переносят ее на дно центрифужной пробирки; в тот же капилляр от гемометра Сали, которым набирали кровь для подсчета эритроцитов, из часового стекла набирают кровь до метки. Если в капилляре имеются остатки 3%-ного раствора натрия хлорида, то их предварительно удаляют, выдувая на комочек ваты; Таблица 1 – Содержание эритроцитов, лейкоцитов и гемоглобина в крови здоровых животных и птиц
остальные манипуляции проводят аналогично таковым при разведении эритроцитов. Содержимое пробирки смешивают, вращая ее между ладонями. Получается 20-кратное разведение крови. Выпускаемые в настоящее время счетные камеры, как правило, имеют на средней грани две сетки, разделенные между собой глубокой канавкой. Это позволяет подсчитывать лейкоциты на второй сетке, не снимая покровного стекла и не притирая его вновь. В случае, если счетная камера имеет только одну сетку, ее и покровное стекло промывают водопроводной водой, протирают насухо чистой ветошью и готовят к работе вновь, как указано при подсчете эритроцитов. Считают все лейкоциты, находящиеся в 25 больших квадратах, разделенных на 16 маленьких, т.е. в 400 малых квадратиках не отрывая глаза от окуляра микроскопа. В поле зрения микроскопа сетку передвигают движение камеры правой рукой. Левая рука должна постоянно регулировать четкость изображения микровинтом микроскопа. Необходимо отличать лейкоциты от комочков оболочек гемолизированных эритроцитов, которые не имеют в центре ядра и при работе микровинтом микроскопа несколько преломляют свет, образуя слабое радужное сияние. Расчет ведут по формуле  Где Х – общее количество лейкоцитов в 1 мм³; М – количество лейкоцитов, подсчитанных в 25 больших квадратах; 4000 – постоянный коэффициент; 20 – степень разведения крови; 400 – количество маленьких квадратиков в 25 больших. При сокращении постоянных величин, входящих в формулу, получаем упрощенную формулу Х = М  200. |