Метод прижизненного (витального) окрашивания. Прижизненное окрашивание (витальное окрашивание)
 Скачать 17.83 Kb.
|
|
Метод прижизненного (витального) окрашивания. Прижизненное окрашивание (витальное окрашивание) — метод окрашивания организмов или живых препаратов их тканей для повышения контраста при наблюдении под микроскопом. Иногда витальным окрашиванием называют также введение красителя в живой организм, с дальнейшим его умерщвлением и приготовлением микропрепарата. Красители, пригодные для прижизненного окрашивания, называются витальными. По оптическим свойствам различают витальные красители для видимого света и флуоресцентные красители (называемые также флуорохромами). По химическим свойствам различают основные, кислотные (кислые) и электронейтральные витальные красители. Основные красители: акридиновый оранжевый, метиленовый синий — используется для витального окрашивания простейших, изолированных клеток, культур тканей, тонких плёнок живых тканей. Используется раствор 1:1000 — 1:10 000. В ботанике используется для окраски вакуолей, накапливаясь в клетках, содержащих дубильные вещества. Может использоваться для окраски митохондри Целями витального окрашивания являются: определения количества красителя, связанного отдельной клеткой и её разными участками, быстрое дифференцирование наличия мертвых клеток в природном фитопланктоне, что позволяет непосредственно в воде оценить присутствие токсичных веществ, например, определить подток токсичных сточных вод. Преимущества: Использование витальных красителей даёт возможность судить как о строении исследуемых клеток, так и об их функциональном состоянии. Данный вид окрашивания позволяет выявить столь тонкие начальные изменения, которые не обнаруживаются другими методами. В отличие от многих других красителей, используемых в микроскопировании, они обладают двумя дополнительными свойствами: имеют низкую токсичность и обладают способностью легко проникать в живые клетки и их структуры через клеточные оболочки и цитоплазматические мембраны Анализ окрашенных флюорохромами клеток может проводиться в ручном (микроскопия) и автоматическом (проточная флюориметрия) режимах. Автоматический метод позволяет оценить большую выборку клеток (до 500 тыс. за одно наблюдение) и удобен для количественного анализа структуры клеточной популяции, а также для выделения клеток определенного типа. Одним из главных требований к витальным красителям является их высокая избирательность при окрашивании. Во флюоресцентной микроскопии для витальной окраски клеток чаще используют так называемые митотрекеры – специфические зонды, связанные с флюорохромами. Благодаря своей структуре эти зонды могут взаимодействовать с внутренними компонентами клеточных органелл без нарушения их внутренней структуры, что позволяет наблюдать их в нефиксированных клетках в течение длительного времени Недостатки: Внутриклеточные структуры при таком исследовании сложно отличить друг от друга, поскольку они имеют сходные коэффициенты преломления света. Один из приёмов для преодоления этого недостатка состоит в окрашивании клеток и тканей (другой приём — использование специальных оптических устройств). |