диагностика. Молекулярно-диагностические методы. Молекулярнодиагностические методы
 Скачать 17.92 Kb.
|
|
МОЛЕКУЛЯРНО-ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ Для микробиологической диагностики бактериальных инфекций используют различные методы. Часто один из этих методов является основным, а другие — вспомогательными. Материалом для проведения микробиологической диагностики могут быть мокрота, кровь, кал, рвотные массы, моча, желчь, кусочки поражённых тканей, пробы абиотической природы (вода, почва, воздух), пищевые продукты, фармацевтические препараты и др. Бактериоскопический (микроскопический) метод Основан на изучении морфологических признаков возбудителя (определяют вид возбудителя по его форме, взаиморасположению клеток и способности окрашиваться определёнными красителями); различные микроскопические приёмы направлены на обнаружение микроорганизмов в нативных или окрашенных препаратах. Бактериологический метод Основан на выделении чистой культуры возбудителя и его идентификации. Проводится изучение культуральных и других физиологических свойств возбудителя, на основании чего проводят идентификацию и типирование возбудителей, а также изучают чувствительность к антибиотикам (антибиотикограмму). Биологический (экспериментальный) метод Основан на изучении особенностей взаимодействия микроба с организмом экспериментальных животных в модельных опытах. Данную группу методов используют с целью: - изучения патогенности и вирулентности микроорганизмов; - выделения чистой культуры возбудителя из различных материалов (метод биопробы); - воспроизведение экспериментальной инфекции с целью выявления особенностей инфекционного процесса (создание модельных систем); - для испытания лечебных эффектов антибиотиков и других лекарственных препаратов. Серологический метод Основан на определении в крови (сыворотке- serum) больных или переболевших специфических антител к соответствующим возбудителям с помощью различных реакций. Основной принцип серологических реакций заключается в строго комплементарном взаимодействии АГ (антигена) с АТ (антителом). Серологические реакции могут быть использованы и для непосредственного обнаружения АГ возбудителя в исследуемом материале и изучения реакций макроорганизма на эти АГ (серологическая и аллергологическая диагностика инфекционного заболевания; антигенная идентификация микроорганизмов или их компонентов). В серологических реакциях один из компонентов всегда выступает в роли диагностикума (либо диагностическая сыворотка с АТ, либо диагностический АГ). Кожно-аллергический метод Используют для выявления повышенной чувствительности (сенсибилизации) макроорганизма к определённым возбудителям или продуктам их жизнедеятельности (например, проба Манту с туберкулином на туберкулёз; проба с бруцеллином на бруцеллёз и т.д.) Положительные пробы не свидетельствуют о наличии самого возбудителя и собственно заболевания. Они лишь являются свидетельством недавнего контакта с больным человеком, возможной инфицированности (носительстве) или о болезни в прошлом. Молекулярно-генетический метод Основан на обнаружении фрагментов генома возбудителя в биологическом материале при помощи молекулярной гибридизации ДНК или РНК, а также ПЦР. Этот метод позволяет обнаружить возбудителя по нескольким молекулам ДНК, содержащихся в крови или поражённых клетках хозяина. Их проводят в случаях, если: - трудно выделить чистую культуру возбудителя из-за сложности его культивирования; - возбудитель характеризуется высокой антигенной изменчивостью; - в исследуемом материале имеется крайне низкая концентрация возбудителя или наблюдается длительная его персистенция в организме человека. Диагностика туберкулеза Использование туберкулиновых проб с целью диагностики и дифференциальной диагностики туберкулеза, определения инфицированности и первичного инфицирования туберкулезом, а также отбора лиц для ревакцинации БЦЖ нашло широкое применение в практике, особенно среди детей и подростков. Туберкулинодиагностика основана на определении туберкулиновой аллергии — повышенной чувствительности человека (животного) к туберкулину, наступившей вследствие заражения вирулентными микобактериями туберкулеза или вакцинации вакциной БЦЖ. Туберкулезный или вакцинный (после введения вакцины БЦЖ) процесс сопровождается повышенной чувствительностью к туберкулину, которая особенно ярко проявляется на коже в месте его введения в виде положительных туберкулиновых реакций. Туберкулиновая аллергия относится к феномену повышенной чувствительности замедленного типа (ПЧЗТ), так как начинает проявляться не ранее чем через 6 ч после введения туберкулина. Этот феномен является иммунологически специфичным. Разрешающим фактором аллергической реакции могут быть микробные тела (тест БЦЖ) и туберкулин. БЦЖ Препарат от туберкулеза БЦЖ был создан французскими учеными А. Кальметт и Ш. Герен в 1921 году. Они выявили несколько подтипов микроорганизмов, вызывающих инфекционную опасную болезнь. С тех пор состав вакцины остался неизменным. Перечень компонентов, нужных для приготовления прививки, хранится в ВОЗ. Главными активными компонентами выступают несколько видов палочки Коха. Их количество зависит от особенностей технологии создания препарата, но, как правило, составляет 0,05 мг. Около 90% БЦЖ содержит один из перечисленных ниже штаммов бактерий: -Французский «Пастеровский» 1173 Р2. -Датский 1331. -Штамм «Глаксо» 1077. Каждая вакцина, не зависимо от типа присутствующего в ней штамма, отличается высокой эффективностью. Существует также прививка БЦЖ-М. В ней концентрация действующих веществ снижена вдвое. Ее используют при наличии противопоказаний к стандартному препарату БЦЖ. Помимо патогенных микроорганизмов, есть в составе вакцины и дополнительные компоненты: формалин; твин-80; гидроксид алюминия; мертиолят.Токийский 172. Общая характеристика механизма действия: микробиология Вводится БЦЖ подкожно. Когда микобактерии попадают в кровь, иммунная система начинает реагировать и выделять антитела для подавления инфекции. В результате формируется специфический иммунитет. Защищенным, человек становится спустя 6 недель после введения сыворотки. Иммунитет сохраняется на протяжении 6-7 лет. Далее требуется проводить вакцинацию повторно. Описанный выше механизм действия БЦЖ является приблизительным. Достоверно не известно, как формируется иммунитет после прививки от туберкулеза и как долго он сохраняется. Эффективность вакцины также находится под вопросом. Ежегодно регистрируются осложнения после введения этого препарата. Назначение прививки вакцинация новорожденныхВводят БЦЖ первый раз в роддоме на 3-5 день жизни. Ранняя вакцинация объясняется тем, что иммунная система младенца находится в стадии формирования и риск заражения туберкулезом очень высокий. Передается инфекция воздушно-капельным путем. Чтобы заболеть, достаточно одного краткосрочного контакта с носителем палочки Коха. Дети чаще всего умирают от туберкулеза. Ревакцинация Проводится спустя 6-7 лет. Перед повторной иммунизацией обязательно делается проба Манту для того, чтобы убедиться в отсутствии палочки Коха в организме. После каждой прививки лучше некоторое время избегать посещения людных мест из-за ослабевания иммунитета и повышения вероятности заражения инфекционно-вирусными патологиями. Также рекомендуется наблюдать за состоянием ребенка, чтобы не пропустить развитие побочных явлений. ПРОБА МАНТУ Проба Манту — это внутрикожная туберкулиновая диагностика. Туберкулином называют смесь антигенов, которые получают от микобактерий человечьего и бычьего типа. Штаммы микобактерий убивают и готовят из них вытяжку, содержащую основные белковые фракции. Получившуюся смесь обрабатывают специальными растворами. Таким образом из возбудителя туберкулеза извлекают антигенные структуры. Антигены — это чужеродные белки, в ответ на поступление которых организм человека вырабатывает специфические иммунные факторы — антитела. Сложные иммунные реакции лежат в основе возможности человека излечиться от инфекционного заболевания и предупредить последующее его развитие. Они же лежат в основе скрининговых тестов при выявлении наличия инфекционного процесса у человека. Дело в том, что, если организм человека уже встречался с микобактреией туберкулеза, он должен отреагировать на введение туберкулина аллергической реакций. В крови человека, перенесшего первичный туберкулез, циркулируют специфические Т-клетки, которые, подобно антителам, распознают туберкулезные антигены. При встрече этих клеток с антигенами возникает реакция, похожая на аллергическую. Этот механизм лежит в основе пробы Манту. |