КДЗ общего белка опред.. Тема практического занятия
 Скачать 47.44 Kb.
|
|
17.11. Тема практического занятия Клинико- диагностическое значение и определения общего белка. Вопросы входящего контроля. Под термином «общий белок сыворотки крови» или «общий белок крови» понимается…………… Все белки сыворотки крови делят на ______, ______. В плазме крови помимо _______ и _________ содержится также _________, поэтому, содержание общего белка в плазме крови несколько выше, чем в сыворотке. Общий белок сыворотки крови является лабораторным показателем, отражающим состояние ___________. (дополнить предложения и выучить определение) Нормальные значения общего белка сыворотки крови В норме содержание общего белка в сыворотке крови составляет у новорожденного до 1 мес — 46,0 — 68,0 г/л, уровень белка в сыворотке у недоношенных может быть намного ниже, чем у доношенных, - в пределах от 36 до 60 г/л, уровень общего белка сыворотки у детей в возрасте 1 — 12 мес — 48,0 — 76,0 г/л, у детей 1 — 16 лет — 60,0 — 80,0 г/л, у взрослых — 65,0 — 85,0 г/л. После 60 лет уровень общего белка в сыворотке крови ниже приблизительно на 2 г/л. Функции. Белки сыворотки крови играют очень важную и многообразную роль поддерживается вязкость и текучесть крови формируется ее объем в сосудистом русле концентрация белка обеспечивает плотность плазмы крови, что позволяет форменным элементам удерживаться во взвешенном состоянии. транспортные (связывание гормонов, минеральных компонентов, липидов, пигментов и т. п.) защитные (иммуноглобулины, опсонины, белки острой фазы и др.) функции, участвуют в регуляции кислотно-щелочного состояния организма являются регуляторами свертываемости крови и антителами. Поэтому содержание общего белка является очень важным диагностическим параметром при целом ряде заболеваний, особенно связанных с выраженными нарушениями метаболизма. В клинической практике довольно часто встречаются состояния, характеризующиеся изменением концентрации общего белка сыворотки крови. Увеличение концентрации общего белка в сыворотке крови носит название гиперпротеинемии, а снижение — гипопротеинемии. Гиперпротеинемия - Увеличение общего белка в сыворотке крови может быть относительным и абсолютным. Относительнаягиперпротеинемия связана с уменьшением содержания воды в сосудистом русле, к чему могут приводить следующие состояния: · тяжелые ожоги; · генерализованный перитонит; · непроходимость кишечника; · неукротимая рвота; · профузный понос; · несахарный диабет; · хронический нефрит; · усиленное потоотделение; · диабетический кетоацидоз. Абсолютная гиперпротеинемия встречается редко. При этом увеличение общего белка в сыворотке крови может быть связано с синтезом патологических белков (парапротеинов), повышением синтеза иммуноглобулинов или усиленном синтезе белков острой фазы воспаления. Абсолютная гиперпротеинемия наблюдается при следующих заболеваниях: · парапротеинемических гемобластозах (миеломная болезнь, болезнь Вальденстрема, болезнь тяжелых цепей) — отмечается значительное — до 120 — 160 г/л - возрастание концентрации общего белка; · болезни Ходжкина; · хроническом полиартрите; · активном хроническом гепатите; · острых и хронических инфекциях; · аутоиммунных заболеваниях; · саркоидозе; · циррозе печени без выраженной печеночно-клеточной недостаточности. Снижение концентрации общего белка в сыворотке крови также может быть относительным и абсолютным. Относительная гипопротеинемия, как правило, связана с увеличением объема воды в кровеносном русле и наблюдается при следующих состояниях: · водной нагрузке («водном отравлении»); · прекращении отделения мочи (анурии); · уменьшении диуреза (олигурии); · внутривенном введении больших количеств раствора глюкозы больным с нарушенной выделительной функцией почек; · сердечной декомпенсации; · повышенной секреции в кровь антидиуретического гормона гипоталамуса - гормона, способствующего задержке воды в организме. Абсолютная гипопротеинемия, как правило, связана с гипоальбуминемией. При этом уменьшение концентрации общего белка в сыворотке крови возникает при: · недостаточном поступлении белка в организм (голодание, недоедание, сужение пищевода, нарушение функции желудочно-кишечного тракта, например, воспалительного характера — энтериты, энтероколиты и др.); · подавлении биосинтеза белка, сопровождающем хронические воспалительные процессы в печени (гепатиты, циррозы печени, интоксикации, атрофия печени); · врожденных нарушениях синтеза отдельных белков крови (анальбуминемия, болезнь Вильсона-Коновалова, другие дефектопротеинемии — значительно более редко); · повышенном распаде белка в организме (злокачественные новообразования, обширные ожоги, гиперфункция щитовидной железы (тиреотоксикоз), состояния после операции, длительная лихорадка, травмы, длительное лечение кортикостероидами); · повышенной потере белка (нефротический синдром, гломерулонефрит, сахарный диабет, длительный (хронический) понос, кровотечения); · перемещении белка в «третьи» пространства (асцит, плеврит). Уменьшение концентрации общего белка в сыворотке крови отмечается и при некоторых физиологических состояниях, например, при длительной физической нагрузке, у женщин в последние месяцы беременности и в период лактации. На уровень общего белка в сыворотке крови может оказывать влияние прием некоторых лекарственных препаратов. Так, например, кортикотропин, кортикостероиды, мисклерон, бромсульфалеин и клофибрат способствуют повышению концентрации общего белка в сыворотке, а пиразинамид, эстрогены — его снижению. На степень концентрации общего белка может оказывать влияние и положение тела: при изменении горизонтального положения тела на вертикальное концентрация общего белка повышается приблизительно на 10% в течение 30 минут. Пережатие сосудов во время взятия крови и «работа рукой» также могут привести к возрастанию концентрации общего белка в сыворотке крови. При интерпретации результатов определения общего белка сыворотки крови необходимо учитывать значение гематокрита (объем красных телец)— в ряде случаев это помогает отличить относительное изменение общего белка от абсолютного, а следовательно, правильно поставить диагноз и определиться с тактикой лечения. ПРИ ГОЛОДАНИИ: После 48 часов голодания может увеличиваться концентрация билирубина в крови. Голодание в течение 72 часов снижает концентрацию глюкозы в крови у здоровых людей до 2,5 ммоль/л, увеличивает концентрацию триглицеридов, свободных жирных кислот без значительных изменений концентрации холестерина. Длительное голодание (2 – 4 недели) также способно влиять на ряд лабораторных показателей. Концентрация общего белка, холестерина, триглицеридов, мочевины, липопротеинов в крови снижается; выведение креатинина и мочевой кислоты почками с мочой повышается. Длительное голодание тесно связано со снижением расхода энергии. Вследствие этого в крови снижается концентрация гормонов щитовидной железы – общего тироксина и еще в большей степени трийодтиронина. Голодание также приводит к увеличению содержания в пробах сыворотки крови кортизола и сульфата дегидроэпиандростерона. Задание. Перечислите нарушения ( с определением термина) содержания белка в сыворотке крови: 1. 2. 3. 4. Определение общего белка в сыворотке крови по биуретовой реакции Определение общего белка по биуретовой реакции является на сегодняшний день самым распространенным методом определения общего белка в сыворотке крови. Метод относительно дешев, прост, обладает хорошей воспроизводимостью и специфичностью, использование его позволяет выполнять исследование как на анализаторах (автоматических и полуавтоматических), так и на обычном фотометре. Принцип метода: Белки реагируют в щелочной среде с сульфатом меди с образованием комплексных соединений, окрашенных в фиолетовый цвет. По интенсивности окрашивания, которое пропорционально количеству белка, определяют содержание его в сыворотке крови. Подготовка пациента Для определения общего белка крови по биуретовой реакции кровь желательно брать утром натощак. Для анализа могут использоваться как сыворотка, так и плазма. При этом обычно получают сравнимые результаты, хотя, из-за присутствия фибриногена, уровень общего белка в плазме на 2–4 г/л выше, чем в сыворотке. Определение содержания белка в сыворотке, полученной в вакуумных системах с разделяющим гелем и без него, дает сопоставимые результаты. Не было получено существенных различий в содержании белка в образцах крови, собранных в стеклянных или пластмассовых вакуумных системах. Для исследования не следует использовать гемолизированную сыворотку, так как гемоглобин также является белком и будет вступать в биуретовую реакцию, что приведет к ложному завышению результатов анализа: присутствие гемоглобина приводит к завышению результатов на 3 % на каждый 1 г/л свободного гемоглобина в сыворотке. Нежелательно использовать хилезную сыворотку, так как она из-за мутности будет оптически интерферировать с результатами определения, а следовательно приведет к ложному завышению результатов. Для устранения интерференции, вызванной значительной липемией применяют экстракцию диэтиловым эфиром. При незначительном присутствии липидов можно провести исследование, установив "бланк" по пробе больного, либо развести пробу изотоническим раствором хлорида натрия, а затем умножить результат на степень разведения. Интерферирующее действие оказывает и билирубин при концентрации более 85 мкмоль/л. Поэтому в случае гипербилирубинемии также используют либо разведение сыворотки, либо установку «бланка» по пробе больного. В ряде случаев в реакцию могут вмешиваться препараты, применяющиеся для лечения, особенно у тяжелых больных. Так, например, декстраны, используемые в качестве плазмозамещающих растворов, образуют комплекс с медью и тартратом в реакционной смеси и приводят к образованию рыхлого синего осадка. Степень вмешательства зависит от концентрации декстрана и состава биуретового реактива. При вводимых обычно количествах декстрана величина ошибки может составлять от 3 до 50 %. Полагают, что добавление глицерина в реактив или использование низкой концентрации NaOH способны предотвратить вмешательства декстрана в ход реакции. Присутствие в образце ионов аммония может способствовать образованию комплексов аммония с ионами меди, приводить к снижению концентрации ионов меди в реакционной среде, и, соответственно, к снижению скорости реакции и ложноотрицательным результатам. В редких случаях вмешательство лекарственных препаратов, находящихся в сыворотке таково, что при взаимодействии биуретового реактива с сывороткой наблюдается либо развитие окраски, отличной от фиолетовой, либо появление мутности. Оценить количество белка в такой сыворотке невозможно. Содержание общего белка устойчиво в сыворотке и плазме в течение 1 недели при комнатной температуре и, по крайней мере, 2 месяца при -20 °C. Алгоритм Опытная проба: к 0,1 мл сыворотки прибавляют 5 мл рабочего раствора биуретового реактива и смешивают, избегая образования пены. Через 30 минут (и не позднее чем через час) измеряют на фотометре в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 500 — 560 нм (зеленый светофильтр) против холостой пробы. Холостая проба: к 5 мл рабочего биуретового реактива прибавляют 0,1 мл 154 ммоль/л раствора хлорида натрия, далее обрабатывают как опытную пробу. Расчет ведут по калибровочному графику. Из каждого разведения берут по 0,1 мл рабочего раствора и прибавляют по 5 мл рабочего биуретового реактива; через 30 — 60 минут измеряют на фотометре, как в опыте, против холостой пробы, начиная с наименьшей концентрации. По полученным данным строят калибровочный график. Калибровочная кривая линейна до 100 г/л альбумина.  Задание: 1. Найдите по калибровочному графику показатель концентрации общего белка для пробы с оптической плотностью : 1) 0.41-______ (обратите внимание на линейность калибровочной кривой), 2) 0.24-______ и 3) 0,05-_______. 2. Дайте характеристику нарушения содержания общего белка в образцах. 3. Что необходимо сделать, если показатели выходят за границу линейности?* (вопрос повышенной сложности) 4. Почему нельзя использовать гемолизированную сыворотку? 5. Дайте определение хилезной сыворотки? 6. Почему нельзя использовать хилезную сыворотку? Литература: Пустовалова Л.М. Практика лабораторных биохимических исследований.стр.165-171. Срок сдачи материала 18.11 |