лабораторная работа 3 биохимия. Лабораторное занятие 3 (2). Занятие 3 Специфические свойства ферментов Цель работы
 Скачать 16.41 Kb.
|
|
ЛАБОРАТОРНАЯ ЗАНЯТИЕ № 3 Специфические свойства ферментов Цель работы: - изучить химическое строение, механизм действия, свойства и биологическую роль ферментов; - подтвердить с помощью экспериментов специфические свойства ферментов. Экспериментальная часть Опыт 1. Специфичность ферментов. Одно из наиболее характерных свойств ферментов – их высокая специфичность, заключающаяся в том, что каждый фермент может катализировать только одну или группу сходных реакций, действуя на одно вещество или на ряд близкородственных веществ. Так, амилаза слюны ускоряет гидролиз только полисахаридов и не оказывает действие на дисахариды. Порядок выполнения работы. В две пробирки приливают по 1 мл разведенной слюны. В первую пробирку добавляют 10 капель 1% раствора крахмала, во вторую –10 капель 1% раствора сахарозы. Обе пробирки помещают на 10 минут в водяную баню при температуре 38°С, после чего с содержимым пробирки проделывают реакцию Троммера на углеводы. Реакция Троммера на углеводы заключается в образовании красного осадка оксида меди (I) при взаимодействии углеводов с раствором карбоната меди (I) и щелочи. В первой пробирке с образованием красного осадка оксида меди (I) будет сильная положительная реакция на углеводы, так как крахмал – это полисахарид, состоящий из многих молекул глюкозы. Во второй пробирке красный осадок не образуется, так как сахароза – это дисахарид, состоящий из молекул глюкозы и фруктозы, но не этилированный альдегид или кетон, которые могут вступать в реакцию Троммера. Вывод: Эксперимент показал, что крахмал содержится в слюне, а сахарозы – нет. Опыт 2.Реакция Троммера. К 5 каплям исследуемой жидкости прибавляют 5 капель 10% раствора NaOH и 5 капель раствора CuSO4 и нагревают. В присутствии глюкозы и мальтозы выпадает желтый осадок гидрата закиси меди или красный осадок закиси меди. Выводы: данная реакция может быть использована для определения наличия глюкозы и мальтозы в рассматриваемой жидкости. Опыт 2. Влияние температуры на активность ферментов. Порядок выполнения работы. В две пробирки вносят по 1 мл разведенной слюны. Содержимое одной из пробирок кипятят на спиртовке в течение 1-2 мин и затем охлаждают в стакане с водой. В обе пробирки добавляют по 10 капель 1% раствора крахмала, встряхивают и оставляют на 10 мин при комнатной температуре. После этого проделывают качественную реакцию на крахмал, добавляя в каждую пробирку по 2 капли настойки йода. Йод с крахмалом дает синее окрашивание. Выводы: ферменты очень чувствительны к температуре и при нагревании до 60-80оС они теряют активность. В термолабильности ферментов можно убедиться на примере действия фермента слюны – амилазы, которая при кипячении теряет свои ферментативные свойства. Опыт 3. Влияние активаторов и парализаторов на активность амилазы слюны. Порядок выполнения работы. В три пробирки наливают по 1 мл разведенной слюны и по 0,5 мл 1% раствора крахмала. Содержимое пробирок перемешивают. В первую пробирку добавляют 0,5 мл 1% раствора NaCl, во вторую 0,5 мл 1% раствора CuSO4 и в третью – 0,5 мл дистиллированной воды. Содержимое пробирок перемешивают и оставляют на 5 минут при комнатной температуре. По истечении указанного времени во все пробирки добавляют по 2 капли настойки йода. Выводы: если добавить в пробирки, содержащие смесь слюны и крахмала, в одну – хлористый натрий, в другую – сернокислую медь и в третью – воду ( контрольная проба ), то за один и тот же промежуток времени в первой пробирке произойдет полное расщепление крахмала, во второй – обнаружится нерасщепленный крахмал, в третьей – произойдет частичное расщепление крахмала с образованием декстринов. Опыт 4.Определение активности амилазы слюны. Порядок выполнения работы. Перед началом работы готовят раствор амилазы. Для этого смешивают 1 мл 1%-го раствора крахмала и 0,5 мл слюны, разбавленной в 10 раз. Через каждые 2 минуты отбирают на предметное стекло по 1 капле этой смеси и добавляют к ней 1 каплю раствора Люголя. Крахмал должен полностью расщепиться за 10 минут (желтая окраска пробы с йодом). Если расщепление крахмала происходит быстрее, слюну надо развести еще в 2-4 раза; если медленнее – уменьшить начальное разведение. Выводы: Реакция будет происходить между крахмалом и амилазой, которая является ферментом, катализирующим гидролиз крахмала до мальтозы. Раствор Люголя используется для определения наличия крахмала и его расщепления. Если крахмал полностью расщеплен за 10 минут, то это говорит о нормальном уровне активности амилазы в слюне. Если процесс происходит быстрее, то это может указывать на высокую активность амилазы или наличие других ферментов в слюне. Если же процесс занимает больше времени, то это может говорить о низкой активности амилазы или наличии нарушений в ее функционировании. Выводы данного эксперимента могут использоваться для диагностики заболеваний, связанных с нарушениями пищеварения или функционирования слюнных желез. |