зоонозы. 1. Зоонозы. 1. Актуальность темы
 Скачать 36.19 Kb.
|
|
Лабораторная диагностика чумы и туляремии. Возбудитель чумы 1.Актуальность темы: Зоонозные инфекции представляют собой одну из многочисленных групп инфекционных заболеваний разнообразных по клиническому течению и морфологии, обладают высокой контагиозностью и способны вызвать эпидемии и пандемии. Знание темы необходимо для изучения вирусных болезней на клинических кафедрах. В практической работе врача оно необходимо для клинико-морфологической дифференциальной диагностики с другими инфекционными заболеваниями. 2.Учебные цели занятия: Знать: Морфологию возбудителя чумы. Морфологию возбудителя сибирской язвы. Морфологию возбудителя туляремии. Морфологию возбудителя бруцеллеза Лабораторную диагностику чумы, сибирской язвы, бруцеллеза и туляремии. Уметь: - дать определение «чумы», «сибирская язва»; - освоить методы микроскопии возбудителей сибирской язвы и бруцеллеза; - освоить методику постановки реакции Асколи; - сделать заключение по методике реакции Райта; 5. Цели развития личности (деонтологические, экологические, правовые, профессиональные, психологические, и др. аспекты) 6. Оснащение: дидактический материал и технические средства обучения ( таблицы, микроскопы, тренинговые и контролирующие компьютерные программмы, мультимедийные атласы, альбомы, ситуационные задачи, деловые игры, и др.) 7. Материалы для самоподготовки: 7.1. Вспомогательный учебный материал. Чума (от лат. pestis) - высококонтагиозная инфекционная болезнь, вызываемая Yersinia pestis, характеризующаяся тяжелой интоксикацией, высокой лихорадкой, поражением лимфатической системы, септицемией. Возбудитель чумы открыт в 1894г. А. Йерсеном и С. Китасато. Таксономия. Y. pestis относится к отделу Gracilicutes, семейству Enterobacteriaceae, роду Yersinia. Морфология и тинкториальные свойства. Y. pestis . полиморфная мелкая овоидная палочка, жгутиков не имеет, спор не образует, может образовывать капсулу, грамотрицательна, с биполярной окрашиваемостью в мазках, взятых из патологического материала. Культивирование. Возбудитель чумы - факультативный анаэроб, психрофил: оптимум роста при 280С. На плотных средах может вырастать в виде колоний R- и S-формы; R-формы обладают высокой вирулентностью, S-формы менее вирулентны. Ферментативная активность. Возбудитель обладает биохимической активностью, ферментирует углеводы до углекислого газа, синтезирует фибринолизин и коагулазу. В зависимости от ферментации глицерина выделяют «+» и «-»варианты. Антигенная структура и факторы патогенности. Y. pestis имеет термолабильный капсульный и термостабильный соматический антигены; основные из них F1-, V- и W-антигены. Имеет общие антигены с другими иерсиниями, эшерихиями, сальмонеллами, шигеллами. Бактерии чумы отличаются высокой вирулентностью, проникают даже через неповрежденную кожу, образуют особый токсин, высокоядовитый для мышей, бактериоцины - пестицины. Большинство факторов вирулентности (V-, W-антигены, мышиный токсин, F1 коагулаза и др.) контролируется генами плазмид. Резистентность. Солнечный и ультрафиолетовый свет, высушивание, высокая температура и дезинфицирующие средства (фенол, хлорамин и др.) вызывают быструю гибель Y. pestis. Хорошо переносят низкие температуры, замораживание и оттаивание; в патологическом материале переживают до 10 сут, при 0°С сохраняются до 6 мес. Восприимчивость животных. К возбудителю чумы чувствительны грызуны (сурки, песчанки, суслики, крысы, домовые мыши). Восприимчивы верблюды, кошки, лисицы, ежи и др. Среди лабораторных животных наиболее восприимчивы белые мыши, морские свинки, кролики, обезьяны. Эпидемиология. Чума - природно-очаговое заболевание, относится к особо опасным инфекциям. Эпидемии чумы в средние века уносили десятки миллионов жизней. Существуют очаги чумы и в настоящее время, особенно в странах Юго-Восточной Азии. Встречаются единичные случаи заболевания в Средней Азии. Основной источник Y. pestis . различные виды грызунов. Основной механизм передачи инфекции - трансмиссивный. Человек заражается в результате укуса инфицированной блохи, а также контактным (при убое больного животного, снятии шкуры, разделке туши) и пищевым (употребление недостаточно термически обработанного мяса больного животного) путями. После заражения источником чумы является больной человек. Особо высокой контагиозностью отличается больной с легочной формой чумы. При любой форме заболевания больных изолируют, проводят строгие карантинные мероприятия. Патогенез. Возбудитель, проникая через кожу и слизистые оболочки, распространяется по лимфатическим сосудам, быстро размножается, вызывает интоксикацию, поражение лимфатических узлов, легких и других органов. Различают бубонную, легочную и первично-септическую формы. При бубонной форме поражаются лимфатические узлы (бубон - увеличенный лимфатический узел), откуда возбудители могут распространяться по всему организму, в том числе попадать в легкие, вызывая вторичную пневмонию. При воздушно-капельном пути передачи развивается первичная легочная форма чумы. При массивном заражении может быть первично-септическая форма. Независимо от формы чумы поражаются все системы и органы: сердечно-сосудистая, почки, печень, селезенка, костный мозг, железы внутренней секреции и др. Клиническая картина. Инкубационный период обычно продолжается 2.3 дня. Заболевание проявляется общими симптомами (головная боль, повышение температуры тела, озноб и др.), а также симптомами, характерными для бубонной или легочной формы. Иммунитет. Иммунитет различной длительности и напряженности. Описаны случаи повторных заболеваний. Микробиологическая диагностика. Все исследования проводятся в специальных лабораториях, в защитных костюмах. Материалом для исследования могут служить содержимое бубона, мокрота, кровь, кал, кусочки органов умерших, трупов животных и др. При бактериоскопии мазков обнаруживаются грамотрицательные овоидные биполярно окрашенные палочки, позволяющие поставить предварительный диагноз. Окончательный диагноз ставится на основании выделения и идентификации культуры и гибели зараженных морских свинок и белых мышей после введения исследуемого материала. Используют также ускоренный метод для определения антигена в исследуемом материале (РИФ) и серологический метод (ИФА). Лечение. Из антимикробных препаратов применяют тетрациклин, левомицетин, рифампицин и др. Профилактика. Основными являются предупредительные мероприятия, предотвращающие занос инфекции из-за рубежа, и возникновение заболеваний в эндемических по чуме очагах. Специфическую профилактику проводят по эпидемическим показаниям: в случае появления больных чумой или в отношении лиц, проживающих в природных очагах чумы. Применяют живую вакцину из аттенуированного штамма EV, которую можно вводить накожно, подкожно (безыгольная инъекция), перорально и аэрозольно. Возбудитель туляремии Туляремия - зоонозная инфекционная болезнь с природной очаговостью, вызываемая Francisella tularensis, характеризующаяся лихорадкой и поражением лимфатических узлов. Таксономия. F. tularensis относится к отделу Gracilicutes, роду Francisella. Морфология и культивирование. Мелкие грамотрицательные бактерии грациликуты, жгутиков не имеют, спор не образуют, вокруг бактерий выявляется капсулоподобный слизистый покров. F. tularensis - факультативный анаэроб, не растет на простых питательных средах; культивируется на средах с добавлением желтка или цистина. При культивировании происходят аттенуация бактерий и превращение их из вирулентной S-формы в авирулентную R-форму. Антигенные свойства и факторы патогенности. F. tularensis содержит оболочечный Vi- и соматический О-антигены, обнаруживает антигенную близость к бруцеллам. Болезнетворные и иммуногенные свойства связаны с Vi-антигеном, с токсическими веществами типа эндотоксина. Резистентность. F. tularensis длительно сохраняется в окружающей среде, особенно при низкой температуре (8-10 мес); нестойка к высоким температурам: кипячение убивает немедленно, нагревание до 60ºС вызывает гибель через 20 мин; под действием прямых солнечных лучей погибает через 20-30 мин. Бактерии F. tularensis не стойки к обычным дезинфектантам и ионизирующему излучению. Восприимчивость животных. Возбудитель туляремии патогенен для млекопитающих многих видов, особенно грызунов и зайцев. Эпидемиология. Туляремия распространена на многих континентах. Источником инфекции являются все виды грызунов, чаще водяная полевка, ондатра, домовая мышь, заяц и др. Передача возбудителя среди животных происходит чаще через кровососущих членистоногих: клещей, комаров, реже блох. Пути заражения человека - трансмиссивный (при укусах инфицированными клещами, комарами, слепнями), контактно-бытовой (через поврежденную кожу или слизистую оболочку глаз), пищевой (при употреблении зараженной воды или пищевых продуктов), воздушный (при вдыхании с воздухом пыли или капелек, загрязненных выделениями грызунов). От человека человеку возбудитель не передается. Патогенез. В месте внедрения возбудителя развивается первичный очаг. Ведущее значение в патогенезе имеет распространение возбудителей по лимфатическим сосудам. Возбудитель, его токсины, проникая в кровь, вызывают поражение лимфатических узлов (образование бубонов). Клиническая картина. Инкубационный период составляет 3-7 дней. Болезнь начинается внезапно, температура тела повышается до 38-40ºС, симптомы зависят в значительной степени от пути передачи инфекции и формы болезни. Различают бубонную, глазобубонную, ангинозно-бубонную и септическую формы. Летальность до 5 %. Иммунитет. После перенесенной инфекции иммунитет сохраняется долго, иногда пожизненно; развивается аллергизация к антигенам возбудителя. Микробиологическая диагностика. Основана на серологическом, биологическом и бактериологическом исследованиях материалов, взятых от больного (смывы, кровь, пунктат бубонов). Применяют РА с туляремийным диагностикумом, РИГА с эритроцитарным диагностикумом, а также РСК, РИФ, ИФА. Бактериологические исследования материала, взятого от больного, обычно безуспешны. Выделяют и идентифицируют возбудителя после заражения исследуемым материалом морских свинок или белых мышей. Проводят кожные аллергические диагностические пробы с тулярином . туляремийным антигеном. При положительной реакции на месте инъекции через 12-24 ч появляются краснота и отечность. Лечение. Применяют аминогликозиды (стрептомицин, канамицин и др.), тетрациклин, левомицетин, эритромицин. Профилактика. Профилактические меры сводятся к борьбе с грызунами, защите водоисточников, санитарно-просветительской работе. Для создания активного иммунитета по эпидемическим показаниям применяют эффективную живую туляремийную вакцину, полученную из штамма № 15. Тема: «Лабораторная диагностика бруцеллеза и сибирской язвы». Сибирская язва Классификация и морфо-биологические свойства бацилл сибирской язвы. Сем. Bacillaceae, род Bacillus, вид B. anthracis. Крупные грамположительные палочки длиной 5-10 мкм с обрубленными концами, парные и короткими цепочками (в патологическом материале), длинными цепями (в бульонной культуре); споры образуют на питательном субстрате, при доступе кислорода и температуре от + 15 до + 30 градусов; в организме образуют капсулу; неподвижные. Факультативные анаэробы, к питательным средам не требовательны. На поверхности агара бациллы сибирской язвы образуют крупные шероховатые матовые колонии с волокнистой структурой, что придает краю колонии при малом увеличении (х8) вид локонов волос или «львиной гривы» (R-форма). На КА бациллы сибирской язвы, в отличие от сходных микроорганизмов-антракоидов, не гемолизируют эритроциты. Характерным для бацилл сибирской язвы является рост на МПБ в виде комочка ваты, бульон при этом остается прозрачным. Желатин разжижает и растет елочкой, гемолиз не дает. Бациллы сибирской язвы лизируются сибиреязвенным бактериофагом, чувствительны к пенициллину и высоко вирулентны для белых мышей. Для определения чувствительности исследуемой культуры к пенициллину ее сеют на среду с пенициллином, инкубируют в течение 3-х ч при 37 и делают мазки-отпечатки. Для бацилл сибирской язвы характерно образование «жемчужного ожерелья» – шарообразных протопластов, расположенных в виде цепочек. Для определения вирулентности исследуемую культуру эмульгируют в физ. растворе и вводят подкожно мышам у корня хвоста. Животные погибают в течение 24-36 ч. При вскрытии животных не отмечается трупного окоченения; кровь густая, в месте введения материала – инфильтрат, селезенка резко увеличена, печень – плотная, красная. В мазках из органов и крови обнаруживают характерные капсульные палочки. Имеет антигены: полисахаридный (соматический) и полипептидный (капсульный) гаптены и протективный антиген. Патогенен для теплокровных, кроме птиц. Факторы патогенности бацилл сибирской язвы. Вирулентные штаммы B. anthracis образуют капсулу (антифагоцитарная активность) и продуцируют сложный токсин, состоящий из трёх термолабильных белков: протективного антигена, летального и отечного факторов. Фракции токсина вызывают коагуляцию белков, отек тканей, апоптоз, блокируют фагоцитоз, приводят к развитию токсико-инфекционного шока. Особенности экологии, эпидемиологии и патогенеза сибирской язвы. Источники инфекции - домашние травоядные животные: овцы, коровы, свиньи, лошади, северные олени. Длительно многие десятилетия сохраняются в почве, загрязненной выделениями от животных и их трупами. Заражение происходит через поврежденную кожу и слизистые дыхательных путей и ЖКТ. В зависимости от путей заражения выделяют формы: кожная (сибиреязвенный карбункул), легочная (сибиреязвенная пневмония) и кишечная, редкая у людей и типичная для животных. Около 95% всех спорадических случаев заболевания сибирской язвой приходится на кожную форму, 5% - на легочную и, крайне редко, в настоящее время регистрируется кишечная форма (около 1% случаев). Типичным проявлением кожной формы сибирской язвы является сибиреязвенный карбункул, развивающийся на месте внедрения возбудителя. Вначале появляется красное пятно, внешне похожее на укус насекомого, которое быстро превращается в папулу, затем – в везикулу и пустулу. При некрозе пустулы образуется язва, покрытая черным струпом (сибиреязвенный карбункул; лат. – carbo – уголь). Ткани вокруг язвы отечны и гиперемированы. Период кожного развития карбункула длится 1-2 дня. Лимфогенным путем возбудитель достигает регионарных лимфатических узлов. По мере размножения бацилл сибирской язвы настает токсемия; в ряде случаев развивается бактериемия, что сопровождается их гематогенным распространением в различные органы и системы. При алиментарном пути заражения (употребление инфицированного мяса, содержащего большое количество спор), развивается гастроинтестинальная форма сибирской язвы. При ингаляционном поступлении спор возбудителя сибирской язвы развивается легочная форма, при которой формируется инфекционно-токсический шок. В последнем случае летальность составляет 100% при отсутствии лечения, а если лечение начато позднее 48 ч с момента появления первых клинических симптомов бактериемии – 95%. После перенесенного заболевания образуется стойкий иммунитет. Особенности забора и транспортировки материала при микробиологической диагностике сибирской язвы. Исследуемый материал помещают в герметические сосуды с притертыми пробками, обертывают пергаментной бумагой, ватой, помещают в металлический ящик, опечатывают и с нарочным направляют в лабораторию ООИ. Методы микробиологической диагностики сибирской язвы. Микроскопический метод. Подвергается микроскопическому исследованию содержимое карбункула, мокрота, испражнения, кровь для предварительного диагноза. Из исследуемого материала готовят мазки и окрашивают по Граму, по Ольту (обнаружения капсул), по Ожешко (обнаружения спор). Бактериологический метод. Окончательный диагноз ставится на основании идентификации выделенной чистой культуры по следующим признакам: 1 - вид колоний на агаре в виде «головы медузы», 2 - рост в бульоне на дне в виде комочка ваты, 3 - рост при уколе в желатиновый столбик в виде «опрокинутой елочки», 4 - отсутствие гемолитической способности, 5 - феномен «жемчужного ожерелья» на среде с пенициллином, 6 - положительной пробой с сибиреязвенным бактериофагом, 7 - способность вызывать у белых мышей и морских свинок септицемию. Биологический метод. Заражение лабораторных животных (белые мыши, морские свинки) проводят одновременно с посевом на питательные среды, при этом, учитывая условия спорообразования недопустимо прогревать свежий материал от больных людей и животных и необходимость прогрева загрязненного материала - шерсть, кожа, сырье, почва, меховые изделия - для освобождения от неспоровых микробов. У павших животных исследуют печень, селезенку, лимфатические узлы, почки, кровь из сердца. Аллергологический метод диагностики (проба с антраксином) применяют для ретроспективной диагностики при эпидемиологических исследованиях. Кожную пробу ставят на внутренней стороне предплечья. Антраксин (гаптен, извлеченный из оболочек сибиреязвенных бацилл) вводят строго в/к в объеме 0,1 мл. Реакцию учитывают через 24-48 часов при наличии гиперемии, инфильтрата на коже диаметром не менее 8 мм, явление гиперемии должно сохраняться до 48 часов. Следует иметь в виду, что положительная реакция на антраксин может быть результатом перенесенного заболевания сибирской язвы или вакцинации против этой инфекции в прошлом (на протяжении ряда лет). Результаты кожной пробы с антраксином диагностически должны оцениваться только в комплексе со всеми клинико-эпидемическими данными. Серологическая диагностика. Диагностические титры специфических антител более чем у 90% пациентов с кожной формой сибирской язвы начинают появляться с 3-й недели и определяются на протяжении 6 мес от начала болезни. При ингаляционной форме определяют IgG-антитела к протективному антигену (ИФА), однократное определение титра антител (диагностический титр 1:32), 4-кратное нарастание титра специфических антител к летальному токсину. Возможно использование метода и при гастроинтестинальной форме. Серологическое исследование, постановка р. Асколи. Для предотвращения профессионального заражения сибирской язвой важен санитарный надзор за предприятиями, занимающимися переработкой животного сырья (кожа, шерсть, щетина). Все поступающее сырье проверяют в реакции термопреципитации Асколи и только в случае отрицательного результата его используют в производстве. Маркером бацилл сибирской язвы в коже животных и изделиях из нее, шкурках, мехе, шерсти является сибиреязвенный полисахаридный, соматический термостабильный антиген, выявляемый в реакции Асколи. Подлежащий исследованию материал измельчают, кипятят с физиологическим раствором для извлечения антигена. Полученный экстракт (антиген) фильтруется и наслаивается на сибиреязвенную преципитирующую сыворотку. При правильной постановке реакции не позднее чем через 5 минут должно появиться отчетливое белое кольцо между преципитирующей сывороткой и антигеном. Экспресс-диагностика. Для экспресс-диагностики применяются РИФ, РПГА. С целью экспресс-диагностики заболевания с помощью РИФ из исследуемого материала готовят мазки. Обнаружение крупных светящихся палочек с обрубленными концами, расположенных попарно, короткими цепочками является основанием для предварительного диагноза «сибирская язва». Для окончательного подтверждения диагноза проводится бактериологическое исследование материала. Специфическая профилактика и терапия сибирской язвы. Вакцина СТИ (медицинская и ветеринарная). Химическая вакцина из протективного антигена. Сибиреязвенный иммуноглобулин (гетерологичный). Бруцеллез Основные виды, вызывающие у человека бруцеллез – B. melitensis, B. abortus, B. suis – относятся к роду Brucella. Бруцеллы – мелкие, неподвижные микроорганизмы, имеющие форму коккобактерий и коротких палочек, располагаются отдельными группами. Не имеют спор, некоторые штаммы образуют капсулу. Грамотрицательны. Облигатные аэробы. Высоко требовательны к питательным средам. Элективной средой для их культивирования являются печеночный агар, печеночный бульон. Культивируются в аэробных условиях, но при повышенном содержании СО2 растёт B. abortus. При выделении из патологического материала в первых генерациях растут медленно, в течение 1-3 недель. Лабораторные культуры формируют колонии через 24-48 часов. Колонии разной величины, бесцветные, с перламутровым оттенком. В жидких средах наблюдается помутнение. Биохимически бруцеллы малоактивны. Дифференциация бруцелл на виды (6), а последниx на биовары основана на комплексе биологических признаков. Основные из них – потребность в СО2, способность расти на средах в присутствии некоторых красителей (основной фуксин, тионин), образование H2S. Антигенное строение бруцелл сложное; у них имеются общие родоспецифические и видоспецифические (M, A, R, G) антигены. К основным факторам патогенности бруцелл относится продукция эндотоксина, ферментов агрессии и защиты (гиалуронидаза, факторподавляющий фагоцитоз и др.). Антигены бруцелл обладают выраженным сенсибилизирующим (аллергенным) действием. Развитие инфекционной аллергии во многом определяет своеобразие патогенеза, клиники бруцеллеза и иммунитета. Источником инфекции являются больные животные. Люди, болеющие бруцеллезом, как источник инфекции практически не опасны. Основные пути заражения – алиментарный или контактный. Бруцеллы проникают в организм через поврежденные кожу и слизистые оболочки. С места внедрения они попадают в лимфатические узлы, вызывая их пролиферацию и воспаление. Бруцеллы легко прорывают лимфатический барьер, проникают в кровь и разносятся по всему организму, образуя очаги размножения в костном мозге, печени, почках и других органах. Микробы и продукты их жизнедеятельности вызывают сенсибилизацию организма, что приводит к формированию инфекционной аллергии. В течение болезни формируется нестерильный инфекционный иммунитет. Постинфекционный иммунитет перекрестный и недостаточно напряженный. Разнообразие клинических проявлений бруцеллеза существенно повышает значимость микробиологической диагностики этого заболевания. Методы диагностики, предусматривающие работу с микроорганизмами, осуществляются в лаборатории ООИ специально подготовленными специалистами. Материал для исследования – кровь. Бактериологический и биологический методы исследование проводятся только в лабораториях строгого режима. Для экспресс-диагностики используется РИФ; разработаны тест-системы для реализации методов иммуноиндикации и молекулярно-генетических методов. Основной метод диагностики – серологическое исследование (комплекс серологических реакций), а также постановка аллергической диагностической пробы с бруцеллином (р. Бюрне). Для этиотропной терапии применяют антибиотики (аминогликозиды, левомицетин). При лечении хронических форм бруцеллеза используют лечебную бруцеллезную вакцину. |