экзамен микра. 1. Микроорганизмы как основные объекты исследования молекулярной генетики. Генетический анализ и принципы картирования генов. Понятие о генной инженерии
 Скачать 115.09 Kb.
|
5.Морфология патогенных спирохет. Классификация, методы их выявления.КЛАССИФИКАЦИЯ СПИРОХЕТ  Царство Procariotae Отдел Gracilicutes Класс Scotobacteriae Порядок Spirochetales  Семейство Spirochetaceae  Род Spirocheta Cristispira Treponema Borrelia Leptospira Вид T. pallidum B. recurrentis L.interrogans Патогенные виды относятся к трем родам: Treponema, Borrelia, Leptospira, отличающимся друг от друга структурным особенностями, количеством завитков, типом движения и другими признаками. Морфология: Treponema. Таксономия Порядок – Spirochaetales Семейство – Spirochaetaceae Род – Тreponema (от греч. trepo – вращаться, nemo – нить) включает 10 видов Вид – Тreponema pallidum Грамотрицательные извитые микроорганизмы, имеют 8-14 мелких, равномерных завитков размер 0,9-0,5х5-20 мкм спор не образуют; капсул не образуют; при неблагоприятных условиях могут превращаться в цисты(чехол из слизи) и L-формы. Подвижны, движение осуществляется за счёт фибрилл. Плохо воспринимают анилиновые красители(из-за малого количества нуклеопротеинов в клетке), по Романовскому-Гимзе окрашиваются в слабо-розовый цвет, осуществляют метод серебрения по Морозову(окрашиваются в коричневый или почти чёрный цвет) и негативное контрастировние по Бурри, наиболее эффективное изучение в тёмнопольном или фазовом или фазово-контрастном микроскопе Borrelia Таксономия Порядок – Spirochaetales Семейство – Spirochaetaceae Род – Borrelia Вид – Borrelia recurrentis Тонкие спиралевидные бактерии с 3-10 крупными неравномерными завитками с заострённым концом. Грамотрицательные. Очень подвижны за счет 7-30 периплазматических жгутиков на каждом конце клетки, которые обвиваются вокруг тела. Размеры 0,3-0,6х3-18 мкм. Спор и капсул не образуют Окрашиваются по Романовскому-Гимзе в сине-фиолетовый цвет. Leptospira Таксономия Порядок – Spirochaetales Семейство – Leptospiraceae Род – Leptospira (от греч. leptos – тонкий, spira – спираль) Виды – L. interrogans (патогенные для человека и животных) L. biflexa (сапрофитные) Тонкие извитые нити с 12-18 мелкими первичными завитками, на концах – вторичные завитки, придающие s- или с-образную форму. Имеют КС Гр(-) строения, однако их ЛПС является типичным и не обладает свойствами эндотоксина. Размеры 6-20х0,1 мкм. Капсул не имеют. Цист не образуют. С обоих концов отходят по два периплазматических жгутика, очень подвижны, движение вращательное. Плохо видны в микроскоп и плохо окрашиваются по Гарму. Чаще всего используют темнопольную микроскопию, а так же окраску по Романовскому-Гимзе – окрашиваются в розовый цвет, и импрегнацию серебром по Морозову – коричневые или черные. Методы выявления спирохет 1. Окраска по Романовскому-Гимзе: краска состоит из смеси азура, эозина и метиленовой сини, перед ис-пользованием краску растворяют в воде (к 10 мл дистиллированной воды прибавляют 10 капель продажной краски Романовского-Гимзы). На фиксированный мазок наливают раствор краски на 1 час или погружают ма-зок в стакан с краской, промывают водой, высушивают на воздухе. Микроскопируют с иммерсией. Бледная спирохета окрашивается по Романовскому-Гимзе в бледно-розовый цвет, представляет собой тонкие спиралевидные клетки с 8-12 равномерными завитками, длина их 6-20 мкм, ширина 0,09-0,18 мкм. Боррелия рекуррентис по Романовскому-Гимзе окрашивается в сине-фиолетовый цвет, имеют форму тонкой спирали с 3-8 крупными неравномерными завитками, с одним или обоими заостренными концами, длиной 8-18 мкм и шириной 0,3-0,6 мкм. Лептоспира окрашивается по Романовскому-Гимзе в бледно-розовый цвет, в препарате видны спиралевидные микроорганизмы с 12-18 плотно прилегающими друг к другу первичными завиткими, напоминают плотную пружину или «четки» с загнутыми или утолщенными концами. Имеют вторичные завитки, придающие телу S- или С-образную форму. Длина лептоспиры 7-14 мкм, толщина 0,06-0,15 мкм. 2. Микроскопия в темном поле: ее производят при боковом освещении. Чтобы получить яркое боковое освещение, обычный конденсор заменяют специальным параболоид-конденсором, в котором центральная часть нижней линзы затемнена, а боковая поверхность зеркальная. Конденсор задерживает центральную часть парал-лельного пучка лучей, образуя темное поле зрения. Краевые лучи проходят через кольцевую щель, отражаются от боковой зеркальной поверхности конденсора, собираются в фокусе, и, выходя из конденсора, встречают микробные клетки в препарате «раздавленная» капля, свет от них отражается, меняет направление и попадает в объектив. Микробные клетки при этом ярко светятся. В темном поле наблюдают живые объекты величиной 0,06-0,2 мкм, используя сухую систему (объектив х40). Иммерсионное масло наносят на верхнюю линзу кон-денсора, оно заполняет пространство между конденсором и предметным стеклом, на котором готовится препа-рат «раздавленная» капля. При этом у спирохет выявляют особенности морфологии, характер движения, коли-чество и особенности первичных завитков, наличие вторичных завитков |