Новый документ. 9. Методы микробиологической диагностики грибковых инфекционных заболеваний
 Скачать 294.27 Kb.
|
|
9. Методы микробиологической диагностики грибковых инфекционных заболеваний. Микроскопия — один из основных методов выявления возбудителей микозов. Позволяет проводить экспресс-диагностику микозов и получать результат в течение 1—2 ч. Для экспресс-диагностики препараты часто необходимо окрашивать специальными красителями, так как простая окраска гематоксилином и эозином часто не позволяет выявить клетки грибов. Неокрашенные препараты грибов Микроскопия методом висячей или раздавленной капли. Этот метод позволяет выявить структуры грибов в клинических образцах без предварительного окрашивания. Обработка 10% едким калием (КОН). Метод используют в первую очередь для визуализации структур возбудителей в фрагментах кожи и её придатках (ногти, волосы), отделяемом очагов поражения и влагалища. В указанных образцах содержится большое количество клеток, в которых КОН разрушает кератин, оставляя неизменёнными клетки грибов. 3) Окрашенные препараты грибов. Окраска мазка грибов. • Окраска мазка грибов по Граму. В мазках из клинического материала грибы представлены грамположительными клетками. Клетки Cryptococcus neoformans плохо воспринимают красители, что можно использовать как дифференциально-диагностический признак при микроскопии окрашенных мазков СМЖ. • Окраска мазка грибов нигрозином или тушью по Бурри мазков СМЖ позволяет выявить капсулированные клетки Cryptococcus neoformans. Для идентификации этого микроорганизма можно использовать муцикармин или конго красный. • Окраска мазка грибов по Романовскому-Гимзе или Райту мазков крови и костного мозга позволяет выявить дрожжевую форму Histoplasma capsulatum в цитоплазме фагоцитов. • Окраска мазка грибов метенаминовым серебряным по Гомори. Метод включает предварительную обработку гистологических препаратов хромовой кислотой с последующим нанесением красителя (клетки грибов тёмно-серые или чёрные). • Окраска мазка грибов по Гридли. Метод включает предварительную обработку препаратов хроматом лейко-фуксина с последующим нанесением фуксинового альдегида и метанилового жёлтого (клетки грибов розово-пурпурные на жёлтом фоне). • Окрашивание перйодной кислотой и реактивом Шиффа (по Мак-Манусу). 1,2-Гликольные группировки полисахаридов клеточных стенок грибов сначала окисляются перйодной кислотой до альдегидов, реагирующих с сульфитом лейкофуксина реактива Шйффа; клетки окрашиваются в насыщенно розовый или красный цвет. Иммунофлюоресцентная микроскопия грибов Наибольшее распространение нашла РИФ. Применяют AT, меченные флюоресцеинами; для выявления грибковых Аг реагент наносят на гистологический препарат, инкубируют и проводят люминесцентную микроскопию. 10. Грибы рода Candida. Таксономия. Свойства. Патогенез кандидозов. Микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение. Кандидо́з (моло́чница) — одна из разновидностей грибковой инфекции, вызывается микроскопическими дрожжеподобными грибами рода Candida (Candida albicans). Всех представителей данного рода относят к условно-патогенным. У детей кандида вызывает заболевание слизистой оболочки ротовой полости-молочницу Таксономия: С.albicans, C.tropicalis, c.pseudotropicalis, C.stellatoidea, C.krusei Свойства: патогенные свойства при неблагоприятных факторах (прием антибиотиков, переохлаждение, стресс, иммуносупрессия), когда количество нормальной флоры кожи и слизистых уменьшается, а грибы размножаются. Таким образом они являются условно-патогенной флорой (т.е. требуется определенное условие для их клинических проявлений) Патогенез Кандидоз может развиваться при инфицировании как извне, так и за счет собственных сапрофитов Экзогенные: механические и химические травмы, повышенная влажность Эндогенные: иммунная недостаточность, детский и пожилой возраст, нарушение обмена веществ, сахарный диабет, гиповитаминозы беременность, длительное применение антибиотиков и кортикостероидов. Микробиологическая диагностика: поверхностный и кожно-слизистый кандидоз выявляют при микроскопии соскобов кожи и слизистой оболочки и выделением культуры возбудителя. Диагностику диссеминированных форм часто затрудняет недоступность поражённых органов для биопсии. В случаях, позволяющих получить образцы ткани, обнаруживают дрожжеподобные клетки и гифы. При летальных исходах посмертный диагноз устанавливают при микроскопии Профилактика: Профилактика кандидоза – это комплекс мероприятий, направленных на недопущение развития соответствующего заболевания. Она может быть общей или целенаправленной. Общая профилактика не имеет ограничений по длительности и включает коррекцию образа жизни. Целенаправленная профилактика проводится с помощью медицинских препаратов. Она назначается при иммунодефиците, приеме антибиотиков или после полового контакта с партнером, страдающим кандидозом. Лечение кандидоза Выбор препаратов для лечения кандидоза зависит от клинической формы и тяжести заболевания. Для лечения кожно-слизистых форм используют нистатин, леиорин, амфоглюкамин, миконазол. При тяжёлых поражениях с высоким риском диссеминированин назначают курс амфотерицина В или флуконазола. 11. Возбудители дерматомикозов. Таксономия. Свойства. Патогенез вызываемых ими заболеваний. Микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение. Дерматомикоз — это инфекционное заболевание кожи и ее придатков, которое вызвано различными патогенными, условно-патогенными грибками. Такосонмия: Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton Свойства: вызывают заболевание кожи и ее придатков. По клинике дерматомикозы разделяются на микозы гладкой кожи, кожных складок, волосистой части головы, кистей и стоп. Также к этой категории принадлежат онихомикозы (грибковые инфекции ногтей). Патогенез: Дерматофиты передаются при тесном контакте с зараженным человеком, совместном использовании предметов быта, посещении общественных мест. Инфицированию способствуют мелкие раны, трещины, опрелости, через которые возбудитель быстро внедряется в толщу эпидермиса. Вероятность развития инфекционного процесса зависит от вирулентности и патогенности грибка, а также от активности специфических факторов иммунитета. Представители дерматофитов имеют факторы агрессии — несколько видов протеаз, которые способны разрушать белковые молекулы в коже. Благодаря этому они повреждают кератиновые субстанции, беспрепятственно размножаются в первичном очаге инфицирования. В ответ на заражение возбудителем активизируются местные и общие иммунные реакции, что приводит к локальным воспалению, аллергизации, интоксикации организма. Микробиологическая диагностика: Обследование больного начинается с тщательного осмотра кожных покровов, в том числе с применением люминесцентной лампы Вуда, дерматоскопа. Для выяснения возможной причины болезни, ее предрасполагающих факторов необходим тщательный сбор анамнеза. Анализ соскобов. Для исследования используется материал с пораженных ногтей, участков гладкой кожи или волосистой части головы. Для быстрого обнаружения мицелия или спор грибов показан микроскопический метод. Чтобы точно определить вид возбудителя и правильно подобрать препарат для лечения, выполняется бактериологическое исследование, по результатам которого оценивается рост колоний патогенных грибов. Другие анализы. общий анализ крови, общий анализ мочи. При необходимости производится биохимическое исследование крови, при хронических или часто рецидивирующих микозах целесообразно посмотреть результаты иммунограммы. Профилактика: оставляет соблюдение личной гигиены, коррекция повышенной потливости, опрелостей, чрезмерной сухости кожи. Недопустимо надевание чужой обуви, использование чужих расчесок, хождение босиком в общественных бассейнах и на пляжах. При появлении трещин или других кожных поражений не стоит заниматься самолечением, необходимо как можно раньше обращаться к врачу. Лечение Лечение дерматомикоза проводится путем проведения местной терапии противогрибковыми кремами, употреблением антибиотиков и средств для повышения иммунитета. 12. Методы микробиологической диагностики протозойных инфекционных заболеваний. Микроскопический метод направлен на выявление паразитов в нативных и окрашенных препаратах Культуральный метод заключается в посеве исследуемого материала на среды, содержащие кровь или нативную сыворотку, яичный белок, углеводы, аминокислоты и другие вещества(рН сред 7,0-7,6) Серологический метод(РА, РП, РСК, РИФ, РНГА, ИФА) Аллергический метод – кожные аллергические пробы применяются редко, обычно для подтверждения диагноза кожного лейшманиоза (проба с лейшманином, реакция Монтенегро) и токсоплазмоза (проба с токсоплазмином). 13. Энтамебы. Таксономия. Свойства. Патогенез заболеваний в полости рта. Микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение. Амёбиаз (Amoebic Dysentery) — это острое и хроническое заболевание, которое вызывают патогенные штаммы дизентерийной амёбы. Проникая в организм, они приводят к язвенному поражению кишечника, которое сопровождается умеренно выраженной интоксикацией, нарушениями стула, снижением веса и иногда появлением абсцессов в печени, кишечнике, лёгких и головном мозге. Болезнь может протекать долго, иногда приводит к смерти, особенно у ослабленных пациентов и при отсутствии медицинской помощи. Таксономия: домен — эукариоты ветвь — амёбоподобные; тип — Evosea; класс — Archamoebae; семейство — Entamoebidae; род — Entamoeba (энтамёба); вид — дизентерийная амёба (Entamoeba histolytica). Свойства: Проникая в организм, они приводят к язвенному поражению кишечника, которое сопровождается умеренно выраженной интоксикацией, нарушениями стула, снижением веса и иногда появлением абсцессов в печени, кишечнике, лёгких и головном мозге. Болезнь может протекать долго, иногда приводит к смерти, особенно у ослабленных пациентов и при отсутствии медицинской помощи. Патогенез: Входные ворота — ротовая полость. Через неё цисты дизентерийной амёбы попадают в организм. В неизменном виде они проникают через желудок в тонкий кишечник. Там цисты теряют защитную оболочку, в результате чего образуется сначала 4-х ядерный трофозоит — паразит в активной питающейся стадии, а после простого деления — 8 одноядерных амёб, которые продолжают опускаться ниже, достигая верхних отделов толстого кишечника — слепую и ободочную кишку. Микробиологическая диагностика: В основе диагностики лежит анамнез — пребывание на опасной в отношении амёб территории, и данные лабораторного обследования, в том числе специфические тесты для выявления возбудителя. Клинический анализ крови. При кишечном амёбиазе наблюдается умеренное повышение уровня эозинофилов и базофилов. Биохимический анализ крови. При внекишечном амёбиазе может отмечаться повышение щелочной фосфатазы, общего билирубина, АСТ и ГГТ. Копрограмма. В кале обнаруживаются лейкоциты, эритроциты, слизь и различные формы амёб. Серологические специфические исследования: реакция иммунофлюоресценции (РИФ) или иммуноферментный анализ крови (ИФА). ПЦР кала — полимеразная цепная реакция. Копроовоскопия — микроскопическое исследование кала. Микроскопия материала, полученного при пункции абсцесса. Ректо- и колоноскопия — визуализация повреждений толстого кишечника. Позволяет обнаружить язвы в кишечнике, амёбому и самих амёб — тех, которые переваривают эритроциты. УЗИ или КТ органов брюшной полости и грудной клетки. Показаны при подозрении на внекишечный амёбиаз. Выявляют локализацию, размеры и количество абсцессов, позволяют следить за результатом лечения Профилактика: Следить за состоянием системы водоснабжения, не допускать попадания в неё сточных вод и фекалий человека, обеззараживать воду. Пить только ту воду и употреблять только ту пищу, в качестве которой уверены. Нельзя пить необеззараженную воду из рек, озёр, фонтанов, из-под крана, употреблять лёд из сырой воды, есть немытые овощи и фрукты, непастеризованные молочные продукты и еду с улицы, особенно в странах с неблагополучной санитарной ситуацией. Воду лучше кипятить. Своевременно выявлять и лечить больных и носителей амёб, дезинфицировать место их проживания: кал и грязное бельё обезвреживать с помощью 3 % раствора лизола. Совершать акт дефекации только в специально отведенных для этого местах, мыть руки после уборной, перед едой и приготовлением пищи Лечение амебиаза Лечение больных амебиазом возможно как в стационаре, так и в амбулаторных условиях. Выбор места лечения зависит от тяжести состояния и локализации процесса. Госпитализации подлежат больные со среднетяжёлым и тяжёлым течением, вне кишечной формой болезни, осложнениями, а также по эпидемиологическим показаниям. Диета показана всем пациентам. Этиотропная терапия, направленная на уничтожение возбудителя, применяется при любых формах болезни и носительстве. При больших абсцессах печени (более 6 см) проводятся хирургические манипуляции, направленные на уменьшение и ликвидацию очага — дренирование абсцесса чрескожно или при помощи вакуумного отсоса. |