Белки. ()БЕЛКИ-1. Белки Переваривание и всасывание. Анализ желудочного сока
 Скачать 414.5 Kb.
|
1 2 Лабораторная работа №1. Количественное определение общей кислотности, общей, свободной и связанной соляной кислоты в одной пробе желудочного сока.ПРИНЦИП МЕТОДА: основан на титровании желудочного содержимого раствором 0.1н NaOH в присутствии индикаторов с различными зонами перехода. Кислотность желудочного сока выражают количеством ммоль едкого натра, нейтрализующего 1 л желудочного сока. Основные фракции кислот желудочного сока. “общая кислотность” желудочного сока это сумма всех кислот желудочного содержимого, “свободная соляная кислота” - свободная минеральная HCl, “связанная соляная кислота” - кисло реагирующие соли (хлориды) белков и других слабых оснований, “общая соляная кислота” - сумма свободной и связанной HCl. Количественное определение свободной соляной кислоты. Свободная соляная кислота оттитровывается раствором 0.1н NaOH в присутствии индикатора диметиламиноазобензола, имеющего зону перехода окраски от красной до оранжевой при pH 3.0. Слабые же кислоты (молочная, уксусная кислота, кислые фосфаты и связанная соляная кислота) при pH 2.9 - 4.0 находятся в растворе в недиссоциированном состоянии и в реакцию со щелочью не вступают. ХОД РАБОТЫ: К 10 мл желудочного сока добавить 1-2 капли спиртового раствора диметиламиноазобензола и титровать раствором 0.1н NaOH до появления оранжевой окраски. Произвести расчет на 1000 мл желудочного сока. Так как затраченное на титрование количество едкого натра эквивалентно количеству соляной кислоты в пробе желудочного сока, то количество соляной кислоты в 1 л желудочного сока будет равно: a 0.1 1000 X = ммоль/л, (1) b где: а - количество (мл) 0.1н раствора NaOH, затраченное на титрование, 0.1 - количество (ммоль) NaOH в 1 мл 0.1 N раствора, b - количество (мл) желудочного сока, взятого для титрования, 1000 - объем (мл) желудочного сока. Количественное определение общей кислотности желудочного сока. Титрование общей кислотности желудочного сока проводится раствором 0.1н NaOH в присутствии индикатора фенолфталеина с зоной перехода окраски в пределах pH 8.2 - 10.0, при pH ниже 8.2 он бесцветный, а при pH выше 10.0 - красный. ХОД РАБОТЫ: К 10 мл профильтрованного желудочного сока добавить 1-2 капли раствора фенолфталеина и титровать 0.1н раствора NaOH до появления слабо розового окрашивания, не исчезающего в течение 1 мин. Произвести расчет на 1000 мл желудочного сока. Количественное определение общей кислотности, общей, свободной и связанной соляной кислоты в одной порции желудочного сока. ХОД РАБОТЫ: Отмерить в колбочки по 10 мл желудочного сока и добавить по 1-2 капли диметиламиноазобензола и фенолфталеина. Титровать 0.1н раствором NaOH до появления оранжевого окрашивания (первая отметка количества израсходованного 0.1н раствора NaOH). Затем продолжить титрования до лимонно-желтого цвета (вторая отметка) и, наконец, до розового окрашивания, не исчезающего в течение 1 мин (третья отметка). В процессе титрования отсчет ведется от начальной точки! Первая отметка соответствует количеству свободной соляной кислоты, третья - общей кислотности. Вторая отметка используется для расчета количества общей соляной кислоты. Среднее арифметическое между вторым и третьим пунктом соответствует общей соляной кислоте. Количество связанной соляной кислоты вычисляется как разница между общей и свободной соляной кислотой. Например, при титровании 0,1н раствором едкого натра затрачено титрованного раствора (с начала титрования): до первой отметки (оранжевый цвет) 3,3 мл, до второй (лимонно-желтый цвет) - 4,6, до третьей (розовый цвет) - 5,6 мл. Среднее между второй и третьей отметкой: 4.6 + 5.6 = 5.1 мл 2 Произвести расчет содержания свободной соляной кислоты, общей соляной кислоты, общей кислотности на 1000 мл желудочного сока по формуле (1). Этот способ расчета неприменим при наличии молочной кислоты в желудке. Поэтому в пробах желудочного сока, содержащего молочную кислоту ограничиться вычислением свободной соляной кислоты и общей кислотности. Полученные данные вносятся в таблицу:
НОРМА: Показатели кислотности профильтрованного желудочного содержимого взрослого человека после стандартного пробного завтрака составляют: общая кислотность 40 - 60 ммоль/л (новорожденные 2.8 ммоль/л; дети до года 4-20 ммоль/л) свободная HCl 20 - 40 ммоль/л (новорожденные 0.5 ммоль/л) связанная HCl 10 - 20 ммоль/л общая HCl 30 - 60 ммоль/л КЛИНИКО - ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ: При различных заболеваниях желудка кислотность может быть повышенной, пониженной и нулевой. При язвенной болезни желудка или гиперацидном гастрите наблюдается гиперхлоргидрия - увеличение содержания свободной соляной кислоты и общей кислотности. При гипоацидном гастрите или раке желудка отмечается гипохлоргидрия - уменьшение количества свободной соляной кислоты и общей кислотности. При раке желудка, хроническом атрофическом гастрите отмечается полное отсутствие соляной кислоты и значительное снижение общей кислотности - ахлоргидрия. При злокачественном малокровии, при раке желудка наблюдается полное отсутствие соляной кислоты и пепсина - ахилия. Лабораторная работа № 2. Обнаружение патологических компонентов желудочного сока.а) обнаружение молочной кислоты по реакции Уффельмана. ПРИНЦИП МЕТОДА: При взаимодействии фенолята железа имеющего фиолетовый цвет с лактатом образуется лактат железа желто-зеленого цвета. ХОД РАБОТЫ: К 20 каплям раствора фенола добавить 1-2 капли раствора хлорного железа. Получается раствор фенолята железа, фиолетового цвета. В пробирку с фенолятом железа прилить по каплям желудочный сок (нормальный и сок, содержащий молочную кислоту). В присутствии молочной кислоты фиолетовая окраска переходит в желто-зеленую, вследствие образования лактата железа. При одновременном присутствии соляной кислоты жидкость обесцвечивается. Это объясняется тем, что сильная соляная кислота полностью разрушает комплекс железа с фенолом, а также вытесняет более слабую молочную кислоту из ее соли; вследствие этого реакция на присутствие молочной кислоты отрицательная. КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ: Органические кислоты (молочная, уксусная, масляная и др.) имеют обычно микробное происхождение и появляются в желудочном содержимом в результате ахлоргидрии и последующего сбраживания компонентов пищи. Наличие органических кислот в желудочном содержимом натощак часто встречается при атрофических гастритах и раке желудка. б) бензидиновая проба на кровь ПРИНЦИП МЕТОДА: Гемоглобин обладает каталазной активностью и разлагает пероксид водорода с образованием молекулярного кислорода, который окисляет бензидин или другой краситель. При этом происходит изменение окраски с бесцветной на темно-синюю. ХОД РАБОТЫ: В пробирку с 1 мл желудочного сока, добавляют 4-5 капель 0.2 % спиртового раствора бензидина и 5 капель 1 % раствора пероксида водорода. При наличии в желудочном соке крови в результате окисления бензидина развивается синее окрашивание. Полученные данные вносятся в таблицу: Примечание: Если результаты какой-либо работы являются отрицательными, то в соответствующей графе ставится прочерк.
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ: Кровь появляется в желудочном содержимом при изъязвлении стенок желудка при язвенной болезни, эрозивном, язвенном гастрите, ожогах слизистой желудка и раке желудка. 6. ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ ЗНАНИЙ Какие соединения являются незаменимыми факторами питания: а) тре; б) гомоцистеин; в) фолиевая кислота; г) цис; д) креатин; е) холин? Какие аминокислоты являются заменимыми в питании человека: а) лиз; б) фен; в) тир; г) тре; д) про; е) вал? Глутатион не содержит: а) тре; б) сер; в) глу; г) гли; д) мет; е) цис? Животные белки являются более полноценными по сравнению с растительными, потому что: а) в животных гликопротеидах содержатся редкие углеводы; б) в них больше содержится сер и гли; в) животные белки больше адсорбируют микроэлементов; г) среднее содержание три и лиз в животных белках выше; д) отличаются более высокой усвояемостью; е) животные белки больше адсорбируют витаминов группы B? Какие аминокислоты способны поддерживать у здорового человека азотистый баланс: а) тре; б) тир; в) фен; г) ала; д) сер; е) глу; ж) лиз; з) цис; и) вал? Какие ферменты являются более важными для переваривания белков: а) энтерокиназа; б) карбоксипептидаза; в) гистидин аммиак-лиаза; г) пепсин; д) химотрипсин; е) трипсин; ж) эластаза ; з) амилаза; к) карбангидраза? Какие соединения будут инициировать выделение кишечником гастрина: а) этанол; б) пищевые жиры; в) глюкоза; г) белок; д) секретин; е) NaCl? В чем причина снижения продукции HCl при гиповитаминозе B1: а) повышенное образование ацетилхолина; б) пониженное образование и ускоренный гидролиз ацетилхолина; в) торможение декарбоксилазных реакций; г) снижение активности ферментов -окисления; д) нарушение транспорта O2; е) усиленная секреция электролитов? Механизм активации протеаз ЖКТ включает: а) фосфорилирование проферментов; б) ограниченный протеолиз; в) гидроксилирование; г) оптимум pH; д) формирование оптимальной среды электролитов; е) активацию кофакторами? Каков азотистый баланс у человека, если с пищей поступило 80 г белка за час, а с мочой за это время выделилось 16 г азота? 7. ЛИТЕРАТУРА Основная Материал лекций. Биологическая химия: учебник/ В.К Кухта., Т.С.Морозкина, и др ; под ред. А.Д.Тагановича.- Минск: Асар, М.: Издательство БИНОМ, 2008. С. 261-276 Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1990. С. 319–336; 1998. С. 409–429. Николаев А. Я. Биологическая химия. М.: Высшая школа, 1989. С. 303–308. Дополнительная Марри Р. и др. Биохимия человека. М.: Мир, 1993. Т. 2. С. 267–298. Филиппович Ю. Б. Основы биохимии. М.: Высшая школа, 1993. С. 255–258. Элементы патологической физиологии и биохимии / Под ред. Ашмарина И. П. М.: Изд-во МГУ, 1992. С. 57–69. Методическая разработка составлена асс. каф. Биохимии Громыко М.В. 1 2 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||