зачет по практике. Центрифуга (нем. Zentrifuge центри лат fuga бег, быстрое движение) аппарат для механического разделения неоднородной смеси (суспензии, эмульсии и др.

• Название: Центрифуга (нем. Zentrifuge центри лат fuga бег, быстрое движение) аппарат для механического разделения неоднородной смеси (суспензии, эмульсии и др.
• Дата: 16.05.2018
• Размер: 114 Kb.
• Имя файла: зачет по практике.doc
• Тип: Документы; #43933

1.центрифуга (нем. Zentrifuge; центри- + лат. fuga бег, быстрое движение) - аппарат для механического разделения неоднородной смеси (суспензии, эмульсии и др.) на составные части различной плотности, основанный на воздействии большой центробежной силы; широко применяется в науке и промышленности, в т. ч. при лабораторных, медицинских и медико-биологических исследованиях, изготовлении лекарственных средств.

Получение плазмы крови методом центрифугирования.

Принцип метода: Принцип центрифугирования основан на том, что клетки крови осаждаются в центробежном поле. Скорость сендиментации (осаждения) зависит от плотности раствора, молекулярной массы, формы, размеров осаждаемых частиц (органелл или клеток и др.).
2. Хроматография – это физ-хим-й метод разд-ния смесей, кот-й основан на разл-ном распред-нии компон-тов смеси м.д сорбентом и р-лем. Классифик-ция: 1) колоночная – помещ-ют в бюретку. Кажд-й компонент занимает собст-ю зону. 2) Бумажная – сорб-т – хроматографич-кая бумага. 3) тонкослойная – на твёрд-й пластину наносят слой сорбента, толщ-ной 1 мм.

Жидкостная хроматография.

Роль подвижной фазы выпол-ет жидкость, соед-щая смесь компон-ов, кот-е надо разделить.

Адс-ционная – сорбент участв-ет в проц-се раздел-ния. Его выбир-ют по коэф-ту распред либо по готовым сорбц-ным рядам. Сорбенты: С, парафин,

Ионообм-ная – раздел-е смесей осн-но на различной спос-ти компон-тов к обмену с ионами сорбента. в кач-ве сорбента применяют иониты. в кач-ве р-ля смесь H2O с малополярным орг. р-лем.

Распределит-ная –Основывается на разл-ой раств-ти компонентов смеси в подвижном и неподвижном р-ле. Сорбент вып-ет роль инертного носителя жидкой фазы и не принимает участия в процессе растворения.

Гель-хр-фия. Раздел-е основано на различных скор-тях диф-зии ч.з сетч-ю структуру полимера. Это позвол-ет проводить фракционное раздел-е. техника вып-ния – колоночная.

Афинная –БАВ-во выбирает то в-во, к кот-му оно имеет сродство. БАВ-ми явл-ся лиганды, закрепленные на сорбенте. Афинная хром-фия склад-ся из стадий:1)Иммобилизация – это закр-ние лиганда на сорбенте.2) Адсорбция.3) Десорбция. Метод применяют для выделения гармонов, ферментов идр.

Примен-ние хр-фии в мед-не. С пом-щью жидк-ной хр-фии анализ-ют биол-кие жидк-ти, мозг, печень,миокард. С ее помошью решают такие проблемы, как: ранняя диагн-ка забол-ний, чистота лекарств, контроль за акт-тью БАВ при забол-ниях, связывание лекарств белками.

Тонкослойная хроматография плазмы крови.

Принцип метода: Тонкослойная хроматография основана на различии в степени адсорбции разделяемых веществ микропористым адсорбентом (окись алюминия и др.) и их растворимости в растворителе.
3. Количественное определение глюкозы в крови)

Метод предназначен для определение глюкозы в крови после удаления белков. Он позволяет определить истинное содержание глюкозы, в присутствии различных сахаров и других веществ неуглеводной природы. С помошью этого метода можно определить примерно от 0,2 до 4,0 г/л глюкозы в испытуемом растворе. Особенно целесообразно применение метода, при диагностике диабета и других заболеваний, связанных с нарушением углеводного обмена. Ферментативный метод основан на каталитическом действии глюкозооксидазы. Она специфически катализирует перенос двух водородных атомов с первого углеродного атома глюкозы, на кислород воздуха. В результате реакции выделяется кислород, который окисляет добавленный к реакционной смеси о-толидин-краситель….в сыворотки продолжение.
4. Определение содержания глюкозы в сыворотке крови.

Принцип метода: Глюкоза при нагревании с о-толуидином в растворе уксусной кислоты дает зеленое окрашивание, интенсивность которого пропорциональна содержанию глюкозы.

Клинико-диагностическое значение.

Концентрация глюкозы крови находится под контролем многих органов и систем и поэтому отражает их функциональное состояние, но в первую очередь функциональное состояние инсулярного аппарата и обмена инсулина, затем функциональное состояние эндокринных систем, вырабатывающих антиинсулярные гормоны и метаболизм этих гормонов. В меньшей степени уровень глюкозы отражает состояние внутренних органов прежде всего печени и почек, а также глюкозозависимых (головной мозг), интенсивно гликолизирующих тканей (опухолевая, жировая) и др. Вот почему при патологических состояниях указанных органов и систем исследуется концентрация глюкозы крови как диагностического и прогностического биохимического показателя, помогающего уточнить или установить диагноз, проследить динамику течения болезни и эффективность лечения, документировать выписку больного.

5.Электрофорез белков сыворотки крови.

Принцип метода: Разделение белков сыворотки крови происходит за счет различной скорости перемещения отрицательно заряженных белков при действии постоянного электрического тока. Скорость перемещения пропорциональна соотношению величины заряда к молекулярной массе белка.

Клинико-диагностическое значение определения общего белка сыворотки крови.

Содержание общего количества белка в сыворотке крови здорового человека 65-85 г/л. Увеличение содержания: дегидратация, синдром Шегрена, гипериммуноглобулинемии.

Снижение содержания: потери белка (при гастроэнтеропатиях, острых ожогах, нефротическом синдроме), снижение биосинтеза белка (при тяжелой белковой недостаточности, хронических заболеваниях печени, синдроме нарушения всасывания), перитонит, пернициозная анемия.

Клинико-диагностическое значение определения фракций белка сыворотки крови.

Содержание отдельных фракций белка в % у здорового человека:

альбумины 50-70, глобулины (α1 3-6, α2 9-15, β 8-18, γ 15-25), А/Г=1,3+0,4.

Увеличение содержания α-глобулинов в сыворотке крови характерно для острых воспалительных процессов, т.к. в данную фракцию входят белки острой фазы (с-реактивный белок, α1-антитрипсин, α2-макроглобулин, церулоплазмин, гаптоглобулин и др.). Содержание α-глобулинов может увеличиваться также при обострениях хронических заболеваний. Увеличение β-глобулинов сыворотки крови происходит вслед за повышением α-фракции, а также при гиперлипопротеидемиях. Содержание γ-глобулинов увеличено при хронических патологических состояниях, связанных с интенсификацией иммунных процессов, т.к. эта фракция состоит главным образом из иммуноглобулинов. Увеличение γ фракции также происходит при образовании парапротеинов. Гипо γ-глобулинемия может быть врожденной или развивается при истощении иммунной системы. Снижение содержания альбуминов возникает при потерях белка (гастроэнтеропатии, нефротический синдром, снижение синтеза). Снижение содержания альбуминов и увеличение содержания глобулинов приводит к уменьшению индекса А/Г, особенно заметному при циррозе печени и нефротическом синдроме.
6.Качественное и количественное определение активности ферментов.

В норме аспартат- и аланин-аминотрансфераз колеблется от 0,0050 до 0,0028 и от 0,0028 до 0,0186 мкмолей субстрата, расщепленного за одну минуту 1 мл сыворотки соответственно.

Определение активности АЛТ в мышечной ткани: метод основан на определение АК, образующейся в результате реакции трансаминирования. Определение образующегося аланина проводится методом хроматографии на бумаге.

Определение активности аминотрансфераз в сыворотке крови является очень важным тестом для диагностики таких заболеваний как инфаркт миокарда, вирусный гепатит, цирроз и рак печени

Определение щелочной фосфатазы: Ее активность возрастает при тяжелом рахите, при заболеваниях печени, острых гепатитах, циррозах, при различных заболеваниях костной системы. Метод определения основан на установление кол-ва фосфора, отщепляемого ферментом от субстрата.

Определение ЛДГ: по изменению содержания изоферментов в сыворотке крови можно судить как о топографии патологического процесса, так и о степени поражения органа или ткани.
8.Определение активности ЛДГ в сыворотке крови.

Принцип метода: основан на определении скорости снижения реакции катализируемой ЛДГ. Спектрофотометрическое определение оптической плотности при окислении НАДН₂ в НАД⁺ проводят при длине волны 340 нм (тест-Варбурга).

ПВК + НАД·Н + Н⁺ ← лактатдегидрогеназа → МК + НАД⁺

Скорость падения Е (оптической плотности) пропорциональна снижению концентрации НАДН и активности ЛДГ.

Определение содержания молочной кислоты в сыворотке крови.

Принцип метода: Определение молочной кислоты основано на реакции катализируемой ЛДГ (см. выше) и тесте-Варбурга – спектрофотометрической регистрации прироста НАДН при длине волны 340 нм, эквимолярному окисленной молочной кислоте.

Клинико-диагностическое значение: Определение активности ЛДГ и содержания молочной кислоты в сыворотке крови широко используется в клинической практике для характеристики функционального состояния гликолиза, тканевого дыхания и проницаемости клеточных мембран. Так при снижении или полном прекращении поступления кислорода в ткани, при ингибировании или структурном повреждении ферментов тканевого дыхания происходит повышение обоих биохимических показателей. Однако при большинстве патологических состояний повышенная активность гликолиза и проницаемость мембран сочетаются и это приводит к более резкому увеличению концентрации МК и активности ЛДГ, например, при воспалительных процессах в почках, мышцах, ишемии тканей и т.д.

Существуют патологические состояния, когда наоборот, активность гликолиза снижается - при гипогликемических состояниях, дефиците регуляторных факторов, стимулирующих гликолиз или при его ингибировании.

9. определения общей активности креатинкиназы в сыворотке крови.

Принцип метода:

В ходе последовательных реакций происходит восстановление НАДФ:

1) Фосфокреатин + АДФ ← _{креатинкиназа} → креатин + АТФ

2) АТФ + глюкоза ← _{гексокиназа} → АДФ + глюкозо-6-фосфат

3) глюкозо-6-фосфат + НАДФ ← _{глюкозо-6-ф-дегидрогеназа} → 6-фосфоглюконат + НАДФ•Н

Скорость восстановления НАДФ в НАДФ•Н пропорциональна активности креатинкиназы в пробе. Изменение концентрации НАДФ•Н определяют фотометрически на спектрофотометре при длине волны 340 нм. Фотометрирование против воздуха.

Температура инкубации: 25 ˚С.

Исследуемый материал: 1) сыворотка крови №1 контрольной крысы 2) сыворотка крови №2 крысы с искусственной ишемией мышечной ткани (лаборант за 10 минут до взятия крови у крысы перетягивает лапу).

Диагностическое значение: Креатинкиназа, именуемая также креатинфосфокиназой (АТФ: креатинфосфотрансфераза КФК, КК; КФ 2.7.3.2) пред­ставляет собой энзим, обратимо катализирующий фосфорилирование креатина при помощи АТФ:

Креатин + АТФ→АДФ + креатинфосфат.

Креатинкиназа (молекулярная масса 81 000 Д) играет важную роль в энергетическом обмене мышечной, нервной и других тка­ней. Наиболее богаты ею скелетная мускулатура, миокард, матка и мозг. Достаточно высокая активность фермента выявляется в щито­видной железе и легких. В остальных органах, в том числе в пече­ни, а также в эритроцитах обнаруживаются лишь «следы» актив­ности КК.

Молекула фермента имеет димерную структуру, при комбинации этих субъединиц образуется три изофермента: ММ — мышечный, ВВ — мозговой и MB — гибридный, содержа­щийся в большом количестве в сердечной мышце. В миокарде со­держится два изофермента — MB и ММ, причем активность изо­фермента MB составляет около 25% от общей энзиматической активности. Разделение креатинкиназы на отдельные изоферменты осуществляют с помощью электрофореза.

Определение общей активности креатинкиназы и ее изоформ требует­ся в основном для диагностики миопатий, инфаркта миокарда, заболеваний центральной нервной системы.

Повышение активности КК может указывать на:

1. 
   инфаркт миокарда (ММ, ВМ): рост активности начинается через 4—6 ч. после инфаркта, самая высокая активность отмечается через 18—30 ч. (превышение нормы в 5-10 раз), через 72 часа активность КК, как правило, нормализуется;
   
2. 
   миодистрофии (При прогрессирующей мышечной дистрофии активность КФК может увеличиваться в 50 и более раз по сравнению с нормой), выраженные изменения при миодистрофии Дюшенна;
   
3. 
   внутримышечные инъекции тетрациклина, некоторых пенициллинов, хлорпромазина, диазепама, др.антибиотиков, седативных средств;
   
4. 
   полимиозит;
   
5. 
   травма мышц (краш-синдром);
   
6. 
   отравление стрихнином, окисью углерода;
   
7. 
   состояние после операционного вмешательства;
   
8. 
   травмы головы;
   
9. 
   гипофункцию щитовидной железы (тироксин ингибирует креатинкиназу).
   
10. 
    острую лучевую болезнь;
    
11. 
    тяжелую физическую нагрузка.
    

Значения активности общей креатинкиназы в сыворотке крови (при 25˚С) у здоровых людей: мужчины - до 80 U/л, женщины - до 70 U/л, новорожденные (2-12 мес.) - до13б U/л, дети - до 94 U/л. Каталитическая концентрация КК сыворотки крови здоровых людей приходится в основном на изоферменты КК-ММ, доля КК-МВ в ней составляет лишь 1—3% от общей каталитической концентрации креатинкиназы.
10,11,12. Качественная реакция на белок.

В пробирку №1 наливают 1 мл HNO₃ и осторожно по стенки наслаивают мочу. На границе жидкостей при наличие белка появляется белый аморфный слой в виде кольца или муть.

Качественная реакция на сахар.

В пробирку №2 наливают 1 мл мочи и 0,5 мл реактива Ниландера. Нагревают до кипения, около 2 минут кипятят. Появление мелкокристаллического черного осадка висмута свидетельствует о присутствии в моче сахара.

№2 Полуколичественное определение глюкозы в моче: метод основан на реакции Флеминга- взаимодействия глюкозы со смесью сернокислой меди, цитрата натрия и углекислого натрия, при нагревание развивается окраска от синей до кирпично-красной, в зависимости от концентрации глюкозы. Клин-диагн знач: Глюкозурия у больных сахарным диабетом свидетельствует о декомпенсации течения болезни о содержании глюкозы в крови выше сахарного порога. Такое состояние болезни всегда опасно развитием острых и хронических осложнений.

Качественная реакция на обнаружение крови в моче.

В пробирку №3 добавляют 1 мл мочи и несколько капель бензидинового реактива (бензидин растворяют в уксусной кислоте и к раствору прибавляют несколько капель Н₂О₂). При наличии крови в моче появляется зеленое окрашивание.


Полуколичественный экспресс- анализ содержания кетоновых тел в моче.

Метод основан на реакции с нитропруссидом натрия, который при взаимодействии с ацетоном и ацетоуксусной кислотой в щелочной среде образует продукты реакции фиолетового цвета.

Клинико-диагностическое значение. Повышение концентрации кетоновых тел в крови и моче больных сахарным диабетом свидетельствует о декомпенсированном состоянии болезни, при котором может развиться кетоацидотическая кома и летальный исход.

14 Качественное определение фенола в моче.

Принцип метода: Лекарственные препараты (производные салициловой кислоты и ПАСК), ароматические углеводороды частично обезвреживаются в печени с образованием гидроксила в бензольном кольце. В гидроксилированной форме они попадают в мочу и с хлорным железом дает красно-фиолетовое окрашивание.

Ход работы: в пробирку добавляют 2 капли раствора фенола, затем вносят 3 капли воды и 1 каплю хлорного железа.
17 Полуколичественный экспресс - анализ содержания глюкозы в моче с использованием диагностических тест-полосок «Глюкозо-Уротест»

Принцип метода. Тест-полоска представляет собой полоску полистерола с нанесенным на неё аналитическим составом в виде цветного квадратика, который при взаимодействии с раствором глюкозы, в концентрации от 0,1% до 20%, изменяет свой цвет вследствие окисления глюкозы и восстановления красителя, например, о-толидина. Реакция идет в два этапа при участии двух ферментов – глюкозооксидазы и пероксидазы.

Высокая специфичность и чувствительность этого метода, а также простота и быстрота выполнения позволяют широко применять его как предварительный тест при массовом обследовании больных и населения. Кроме того, он позволяет самому больному следить за содержанием глюкозы в моче и степенью компенсации диабета.

Ход работы. Тест-полоски погрузить на 1 – 2 секунды в пробы мочи больных, излишек мочи удалить с полосок о край сосуда, выдержать 1 – 3 минуты на воздухе, и по цветной шкале определить наличие или примерную концентрацию глюкозы в моче больных.

Результаты внести в сводную таблицу. + про кетоновые из 12.

18.Определение амилазной активности в моче (крови) методом Каравея со стойким крахмальным субстратом.

Принцип метода: α-амилаза гидролизует крахмал с образованием продуктов, не дающих цветной реакции с йодом. Об активности α-амилазы судят по уменьшению интенсивности окраски.

Нормальные значения. Сыворотка крови: 3,3-8,9 мг/(с•л), Моча: до 44 мг/(с•л).

Клинико-диагностическое значение. Повышение активности α-амилазы в крови и моче наблюдается при остром панкреатите (до 90% и более), а также при вирусном гепатите и раке поджелудочной железы. Труднообъяснимую гиперамилаземию вызывают холецистит, перитонит, ожоги, острый аппендицит. Употребление многих фармакологических препаратов (кортикостероиды, салицилаты, тетрациклин, гистамин) приводит к повышению уровня активности α-амилазы. При почечной недостаточности α-амилаза в моче отсутствует.
20,40 Глюкозо толерантный тест

У больных с СД после приёма пищи концентрация глюкозы в крови может достигать 300-500 мг/дл и со­храняется на высоком уровне в постабсорбтивном периоде, т.е. снижается толерантность к глюкозе. На стадии латентного СД концен­трация глюкозы в крови натощак соответству­ет норме, а нагрузочные пробы уже выявляют снижение толерантности к глюкозе. Определение толеран­тности к глюкозе Обследуемый принимает раствор глюкозы из расчёта 1 г на 1 кг массы тела (сахарная нагрузка). Концентрацию глю­козы в крови измеряют в течение 2-3 ч с интервалами в 30 мин. 1 — у здорового человека; 2 — у больного сахарным ди­абетом.

При помощи сахарной нагрузки можно обнаружить легкие формы диабета, протекающие при почти нормальном содержании сахара в крови.

22.Определение мочевины в сыворотки крови.

Принцип метода: Мочевина образует с диацетилмонооксином в кислой среде в присутствии тиосемикарбазида и солей железа окрашенные вещества, интенсивность окраски которых пропорциональна содержанию мочевины в растворе.

Клинико-диагностическое значение работы.

Определение мочевины имеет значение для диагностики заболеваний почек, печени и патологий, сопровождающихся повышенным катаболизмом белков. Повышенное содержание мочевины – один из главных признаков почечной недостаточности. Кроме того повышение уровня мочевины наблюдается при избыточном белковом питании и голодании (за счет распада тканевых белков). Главной причиной пониженного содержания мочевины являются патологические состояния, связанные с уменьшением клеточности паренхимы печени (снижение ее мочеобразующей функции) – гепатит, острая дистрофия и цирроз печени.

22.Определение мочевой кислоты в сыворотке крови.

Принцип метода: Мочевая кислота – это главный продукт обмена пуриновых нуклеиновых оснований. Определение мочевой кислоты основано на фотоколориметрическом определении окрашенных продуктов, образующихся при восстановлении фосфорно-молибденового реактива Фолина мочевой кислотой. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации мочевой кислоты.

Клинико-диагностическое значение работы.

Определение мочевой кислоты имеет особое значение для диагностики начальных стадий поражения почек и подагры. Повышенное содержание мочевой кислоты (гиперурикемия) может быть следствием нефритов и сморщивания почки (уменьшение выделения мочевой кислоты). Резкая гиперурикемия может быть причиной и признаком подагры. Повышенное содержание мочевой кислоты в крови и моче наблюдается при патологиях, связанных с усиленным распадом нуклеопротеидов: лейкозах, гемолитической желтухе, злокачественных опухолях, диабете и др. Повышенное содержание мочевой кислоты в сыворотке крови наблюдается при анемии и приеме некоторых лекарственных препаратов (салицилаты, атофан).

25.Определение содержание кальция в моче по Сулковичу.

Принцип метода: Ионы кальция со щавелевой кислотой образуют нерастворимую соль – оксалат кальция.

Повышение содержание кальция в сыворотке крови: гиперпаратиреоз, метастазы опухолей в костную ткань, миеломная болезнь, сниженное выделение кальцитонина, передозировка витамина Д, тиреотоксикоз.

Снижение содержания кальция в сыворотке крови: гипопаратиреоз, увеличение выделения кальцитонина, гиповитаминоз Д, нарушение реабсорбции в почках, массивная гемотрансфузия, гипоальбунемия.

Повышенное выделение кальция с мочой: длительное воздействие солнечных лучей (гипервитаминоз Д), гиперпаратиреоз, метастазы опухолей в костную ткань, нарушение реабсорбции в почках, тиреотоксикоз, остеопороз, лечение глюкокортикоидами.

Снижение выведения кальция с мочой: гипопаратиреоз, рахит, острый нефрит (нарушение фильтрации в почках), гипотериоз.
27,38Определение концентрации общего билирубина и его фракций (неконъюгированного и конъюгированного билирубина) в сыворотке крови по Йендрашику.

Клинико-диагностическое значение: Определение общего билирубина и его фракций (некоъюгированного и конъюгированного билирубина) в сыворотке крови и уробилиногена в моче относится к обязательным биохимическим исследованиям при диагностике заболеваний печени, так как позволяет установить уровень нарушения пигментного обмена и дифференциально диагностировать желтухи.

Содержание общего билирубина (БРобщ) в сыворотке крови в норме составляет 8,5-20,5 мкмоль/л (0,5-1,2 мг%), из них 75% приходится на долю свободного (неконъюгированного) билирубина (БРнекон).

Гипербилирубинемия (повышение концентрации БР в сыворотке крови) - является результатом нарушения динамического равновесия между скоростью образования и выделения БР и может быть вызвана различными причинами (гемолиз, цитолиз, холеотаз).

Повышение концентрации БР в сыворотке крови до 28мкмоль/л и более сопровождается желтушной окраской кожных покровов, слизистых оболочек склер глаз т.е. желтухой (за счет отложения в тканях диффундирующего из крови БР).

Принцип метода: Общий билирубин сыворотки крови (БРнекон. и БРкон.) определяется на основе реакции с диазореактивом (диазотированной сульфаниловой кислотой) после диссоциации комплекса альбуминов плазмы и БРнекон, в присутствии кофеинового реактива и перехода БРнекон в растворимое состояние. БРкон (растворимый) дает с диазореактивом розовое окрашивание сразу (без кофеинового реагента).

Интенсивность окрашивания исследуемого раствора пропорциональна концентрации азобилирубина в сыворотке крови и оценивается колориметриметрически на ФЭКе.

Концентрация БРнекон определяется расчетным путем как разность между концентрациями БРобщ и БРкон.

28 Количественное определение гемоглобина крови гемоглобинцианидным методом.

Принцип метода: Гемоглобин при взаимодействии с железосинеродистым калием (красная кровяная соль) окисляется в метгемоглобин (гемиглобин), образующий с ацетонциангидрином окрашенный гемоглобинцианид, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации гемоглобина.

Нормальное содержание Hb у женщин 120-140г/л, у мужчин 130-160 г/л.

Повышение содержания Hb в крови: при обезвоживании организма и миелопролиферативных заболеваниях (при эритремии 180-210 г/л), физиологическое повышение – у новорожденных.

Снижение содержания Hb в крови – основной симптом анемии: железодефицитная анемия (наиболее частая), гемолитическая анемия в период криза, В₁₂, Вс дефицитные анемии, гипопластическая, а также через несколько часов после острой кровопотери.
29 Небелковый азот крови называют также остаточным азотом, т е остающимся в фильтрате после осаждения белков. У здорового человека колебания остаточного азота не велики в основном зависят от кол-ва поступающей с пищей белков. При ряде патологических состояний уровень остаточного азота повышается. Это состояние носит название азотоемии. В зависимости от причин, вызывающих ее, она подразделяется на ретенционную и продукционную. Первая возникает в рез-те недостаточного выделения с мочой азотосодержащих продуктов при нормальном поступление их в кровеное русло. Вторая наблюдается при избыточном поступление азотосодержащих продуктов в кровь, как следствие усиленного распада тканевых белков при общирных воспалениях, ранениях, ожогах.
33.Определение содержания общего ХС в сыворотке крови.

Принцип метода - основан на реакции Златкис-Зака. Холестерин при взаимодействии с хлорным железом в присутствии смеси серной, фосфорной и уксусной кислот образует окрашенный продукт, оптическая плотность его раствора пропорциональна концентрации холестерина.

Клинико-диагностической значение: Исследование уровня ХС в сыворотке крови не даёт точной диагностической информации о конкретном заболевании, а лишь отражает патологию обмена липидов в организме. Его содержание исследуется для уточнения диагноза типа липидемии, а также для расчёта коэффициента атерогенности (см. ниже) и прогноза развития коронарного артериосклероза. Повышенный уровень ХС наблюдается при IIа, IIб, III типах липидемий, сахарном диабете, ожирении, алкоголизме, холестазе и др. Гипохолестеринемия - при голодании, синдроме мальабсорбции, гипертиреозе, онкологической кахексии, туберкулёзе, анемиях.
34Определение содержание ХС-ЛПВП в сыворотке крови.

Принцип метода: Добавление к образцу сыворотки крови осаждающего раствора – смеси фосфорновольфрамовой кислоты и MgCI₂, приводит к осаждению всех липопротеидных фракций сыворотки крови, кроме ЛПВП. В полученном при центрифугировании супернатанте, определяется ХС-ЛПВП, аналогично общему холестерину.

Клинико-диагностическое значение.

Снижение содержания ХС-ЛПВП ниже, чем 1,42 у мужчин и 1,68 у женщин следует рассматривать как неблагоприятный признак, предсказывающий развитие атеросклероза и ИБС. При снижении концентрации с 0,91 до 0,78, т.е. всего на 0,13 ммоль/л, повышается риск развития ИБС в 3 раза. Таким образом, ХС-ЛПВП является очень чувствительным интегральным тестом, отражающим состояние обмена ЛП, и не зависит от изменения уровня общего ХС.

Снижение содержания ХС-ЛПВП наблюдается при ожирении, курении, избыточном употреблении в пищу углеводов, гиподинамии и, значительное снижение - при атеросклерозе, инфаркте миокарда, сахарном диабете, заболеваниях печени, липопротеинемии IV типа, болезни Танжи, дефиците ЛХАТ.

Повышение ХС-ЛПВП происходит под влиянием физических нагрузок, эстрогенов, пестицидов, алкоголя, но при его исчезновении из крови их уровень снижается до исходного.

В клинической практике для оценки атерогенности дислипопротеинемий пользуются расчетным коэффициентом атерогенности (КА).

КА = ХС общ. – ХС-ЛПВП / ХС-ЛПВП

В норме КА не должен превышать 3,5. В противном случае ставится диагноз - атеросклероз.

При нормолипидемии, чем ближе КА к верхней допустимой границе, тем выше вероятность развития атеросклероза. Таким образом, коэффициент КА позволяет выявлять клинические и доклинические стадии атеросклероза.

36.Определение рН желудочного сока.

Принцип метода: Индикатор Конго в нейтральной и слабо кислой среде имеет красную окраску, а при рН меньше 3-4 меняет ее на синюю. Это происходит только в присутствии сильной соляной кислоты (органические кислоты не снижают рН ниже 4,0).

Определение лактата в желудочном соке.

Принцип метода: Качественная реакция на молочную кислоту основана на ее способности образовывать с ионами Fe³⁺ комплекс желто-зеленого цвета. Эта окраска наиболее четко определяется при проведении реакции с фенолятом железа.

Определение кислотности желудочного сока.

Принцип метода: Определение кислотности желудочного сока основано на титровании кислореагирующих веществ 0,1 Н раствором NaOH. Титрование в присутствии двух индикаторов позволяет в одной пробе определить свободную HCl, связанную HCl и общую кислотность. Кислотность определяется количеством мл 0,1 Н раствора NaOH, пошедшего на титрование 100 мл желудочного сока (титрационные единицы, Т.Е.). В норме общая кислотность у взрослых составляет 40-60 Т.Е.

Клинико-диагностическое значение работы.

Исследование желудочного сока проводят для выяснения функционального состояния желудка. При острых воспалительных процессах (острая язва, острый гастрит) наблюдается повышение содержания соляной кислоты (гиперхлоргидрия), а при переходе их в хроническую форму гиперхлоргидрия сменяется гипохлоргидрией. Атрофия, возникающая при злокачественном перерождении тканей, сопровождается ахлоргидрией (отсутствием соляной кислоты) и даже ахилией (полное отсутствие секреции). Наблюдая изменение секреции соляной кислоты можно уточнять диагноз и давать прогноз течения болезни. Лактат появляется в желудочном соке в результате молочнокислого брожения, которое возникает при снижении кислотности (развитие микрофлоры).

37.Тимоловая проба (диспротеинемический тест) и ее клинико-диагностическое значение.

Клинико-диагностическое значение: Тимоловая проба (ТП) - является одной из наиболее чувствительных осадочных проб и фиксирует дис- и парапротеинемию по изменению соотношения альбуминов и β, γ- глобулинов, липопротеидов, фосфолипидов и по появлению в сыворотке крови высокомолекулярных аномальных белков. Проба не специфична, так как дает положительный (+) ответ при острых и хронических воспалительных процессах протекающих в различных органах и тканях (печень, почки, легкие, соединительная ткань и т.д.).

ТП имеет цифровое выражение - от 0 до 20 и более ед. S-H, по которому можно судить о наличии патологического процесса и его и его степени тяжести и динамика развития. В норме (отсутствие воспаления) - ТП отрицательная –ТП (-), равна на 0-4 ед. S-Н, ТП (+) - при 5 -20 и более ед. S-Н.

В клинике ТП используется наряду с другими биохимическими тестами при диагностике заболеваний печени: ТП (+) - при острых вирусных и хронических токсических гепатитах, декомпенсированном циррозе, раке и его метастазах в печень. ТП (+) при печеночной желтухе. ТП (-) при надпеченочной и подпеченочной желтухе (без цитолиза).

Принцип метода: При взаимодействии сыворотки крови с тимоло-вероналовым буфером (рН=7,55) появляется помутнение вследствие образования глобулин-холестерин-липопротеид-тимол-фосфолипидного комплекса. Его интенсивность связана с количеством и % соотношением отдельных фракций. Степень помутнения оценивается нефелометрически на ФЭК.