диагностика инфекционных болезней. Диагностика смешанных форм инфекционных болезней молодняка
 Скачать 17.87 Kb.
|
|
Диагностика смешанных форм инфекционных болезней молодняка может представлять значительные сложности, требует многого времени и комплексного подхода. Диагноз ставят на основании: Эпизоотологических данных, Клинических признаков, Патологоанатомических изменений Результатов лабораторных исследований. Решающую роль играют бактериологические, серологические и вирусологические исследования. В этиологии болезней молодняка раннего возраста, протекающих с картиной ОКЗ и ОРЗ, наряду с бактериями большое значение имеют и вирусы. Лабораторная диагностика указанных инфекционных заболеваний заключается в следующем: Микроскопия мазков из патматериала или суспензии; Выделение возбудителя из биоматериала на питательных средах, в культуре клеток или в куриных эмбрионах и его идентификация путем изучения культуральных и биохимических свойств или в одной из серологических реакций: РА, РСК, РДП, РТГА, РН, РТПГА, РИФ; Определение патогенности и вирулентности возбудителя путем проведения биопробы на лабораторных животных; Обнаружение антигена в биологическом материале методом иммунофлуоресценции, реакции связывания комплемента, реакции диффузной преципитации; Выявление антител в крови больных и переболевших животных (ретроспективная диагностика) в одной из серологических реакций: РА, РНГА, РДП, РДГА, РСК. В лабораторию для исследования направляют биологический материал больных животных, взятый в период максимального проявления у них клинических признаков, или у вынужденно убитых, или павших животных, взятый не позднее, чем через 2 ч после их гибели. Материал берут у животных не подвергнутых лечению. У больных животных берут: тампонами мазки со слизистой носовых полостей для реакции ИФ и для выделения возбудителя; фекалии для выделения возбудителя; пробы крови для выявления антител. Тампоны с материалом помещают в пробирки или пенициллиновые флаконы с 5 мл физиологического раствора для бактериологических исследований или с 5 мл питательной среды для культуры клеток или раствора Хенкса, содержащие 1000 ЕД/мл пенициллина и 1000 мкг/мл стрептомицина — для вирусологических исследований. Кровь берут в стерильные пробирки в объеме не менее 5 мл. У вынуждено убитых и павших животных берут кусочки носовой перегородки, трахеи, легких, селезенки, почки, средостенные и брыжеечные лимфатические узлы, при поносах — кусочки тонкого отдела кишечника, фекалии. Флаконы с биоматериалом доставляют в лабораторию в термосе со льдом не позднее 2–3 ч после взятия. Можно фиксировать материал 30%ным (при бактериологических исследованиях) или 50%ным раствором глицерина (при вирусологических исследованиях). Подготовка материала для бактериологических исследований. Флаконы с тампонами встряхивают, тампоны отжимают и удаляют, а содержимое флакона центрифугируют в течение 10 мин. Осадок отсасывают в стерильную пробирку и делают мазки для световой и люминесцентной микроскопии, посевы на соответствующие питательные среды и, при необходимости, заражают лабораторных животных. Пробы фекалий или соскобы со слизистой кишечника разводят стерильным физиологическим раствором 1:10–20, тщательно перемешивают и выдерживают при комнатной температуре 10–15 мин для осаждения крупных частиц. Из надосадочной жидкости делают посевы на специальные среды. Подготовка материала для вирусологических исследований. Отжатую с тампонов жидкость после центрифугирования собирают в стерильную пробирку, куда вносят по 500 ЕД/мл пенициллина и 500 мкг/мл стрептомицина. Выдерживают при 4С в течение 2–4 ч и используют для заражения культуры клеток или куриных эмбрионов. Из осадка центрифугата готовят мазки для исследования методом иммунофлуоресценции. Флаконы с фекалиями замораживают при температуре –20С в течение 18 ч, после чего размораживают при 37С и центрифугируют в течение 20 мин. Надосадочную жидкость отсасывают в стерильную пробирку, вносят 1000 ЕД/мл пенициллина, 1000 мкг/мл стрептомицина и 50 ЕД/мл нистатина. Выдерживают при 4С в течение 2–4 ч, дополнительно центрифугируют и используют для заражения культуры клеток или куриных эмбрионов. Со слизистой носовой перегородки, трахеи, влагалища, бронхов и кишечника скальпелем делают соскобы, вносят их в центрифужную пробирку с 5 мл физраствора и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 10 мин. Осадок клеток суспендируют в 0,5 мл того же раствора и готовят мазки на обезжиренных предметных стеклах для исследования методом ИФ. Из кусков легкого, лимфатических узлов готовят мазки отпечатки и исследуют методом РИФ. Для выделения возбудителей бактериальной этиологии (бактерий, микоплазм, хламидий, грибов) проводят бактериологические исследования. При этом используют микроскопические, бактериологические, серологические методы и заражение лабораторных животных (биопробу). При микроскопии мазки из патматериала окрашивают. Чаще всего применяют дифференцирующую окраску по Граму. С помощью микроскопии можно поставить предварительный диагноз и определить направление дальнейших исследований. Для выделения чистой культуры возбудителя делают посевы на питательные среды (простые, накопительные и специальные). Выросшие культуры идентифицируют по специальным схемам на основе морфологических, культуральных, биохимических и патогенных свойств. Биопроба проводится для установления патогенности возбудителя, подтверждения характера заболевания по клиническим и патологоанатомическим признакам и выделения возбудителя в чистом виде. При каждой инфекционной болезни определены чувствительные виды лабораторных животных, методы заражения, доза, сроки падежа или заболевания. Серологические методы диагностики разработаны при многих инфекционных болезнях молодняка. При бактериальных инфекциях используют РИФ (сальмонеллез, хламидиоз); РА (сальмонеллез, эшерихиоз, лептоспироз, туляремия, кампилобактериоз, псевдомоноз, микоплазмоз); РП (стрептококкозы); РСКРДСК (хламидиоз); ИФА (в последние годы разработаны методы диагностики при некоторых болезнях). Для определения возбудителя при вирусных инфекциях используют световую и электронную микроскопию(Выделение возбудителя путем заражения культур клеток, куриных эмбрионов и лабораторных животных, а также биологические и иммунологические методы). При световой микроскопии мазков отпечатков можно обнаружить: -вирусные внутриклеточные включения,(появляющиеся при вирусных болезнях), -изучить состав и морфологические изменения клеточных элементов. Это позволяет судить об изменениях в динамике болезни и внести коррективы при лечении больных животных. Электронную микроскопию используют в крупных научных центрах для изучения более тонкой структуры возбудителя болезни. Для выделения возбудителя из патматериала, содержащего с вирусы, используют: первичные или перевиваемые культуры клеток для: - накопления вируса -изучения цитопатогенных свойств; -куриные эмбрионы, которые погибают после заражения; -лабораторных животных для обнаружения и накопления вируса в их тканях. Для идентификации выделенных вирусов используют биологические и иммунологические методы исследований. При вирусных инфекциях наиболее распространена серологическая диагностика. Для нее выпускаются наборы диагностикумов. С их помощью, во первых, обнаруживают или типируют вирусный антиген в патматериалах и, во-вторых, обнаруживают антитела к вирусу. В последние годы для диагностики используют ПЦР и ИФА. Серологическую (ретроспективную) диагностику респираторно кишечных инфекций проводят с целью обнаружения специфических антител в сыворотке крови переболевших животных. В реакции используют парные сыворотки, взятые в первые 2–3 суток болезни и через 14–30 суток. Пробы сывороток прогревают при температуре 56С в течение 30 мин и исследуют на наличие антител. Ретроспективный диагноз считается положительным при четырехкратном и больше при росте в парных пробах сывороток у переболевших животных. Лабораторные исследования наиболее точны при диагностике инфекционных болезней молодняка, так как без них окончательный диагноз не считается установленным. |