Доклинические исследования. Доклад По теме Доклинические исследования
 Скачать 26.74 Kb.
|
|
Доклад По теме «Доклинические исследования» Студентки 5 курса 05-06 группы ИФиТМ Черненковой Анны Результаты доклинических исследований лекарственных средств необходимо представить с целью регистрации или проведения клинических исследований лекарственного препарата в РФ (№ 61-ФЗ от 12 апреля 2010 г., статья 18, часть 3, пункт 9 и статья 20, часть 2). Воспроизведенные ЛС: Общетоксические свойства: острая и подострая (субхроническая) токсичность, местнораздражающее действие в сравнении с зарегистрированным аналогом. Оригинальные ЛС: Общетоксические свойства: острая и подострая (субхроническая) токсичность, хроническая токсичность, местнораздражающее действие. Специфические виды токсичности: мутагенность; репродуктивная токсичность; канцерогенное действие; аллергизирующее действие; иммунотоксическое действие. Фармакологическая безопасность. Специфическая фармакологическая активность. Фармакокинетические исследования. Доклинические токсикологические исследования направлены на выявление и оценку выраженности токсических эффектов, возникающих при взаимодействии фармакологического вещества с организмом лабораторных животных. Согласно Федеральному закону от 12 апреля 2010 г. № 61-ФЗ «Об обращении лекарственных средств» они являются неотъемлемой частью доклинических исследований, направленных на получение доказательств безопасности лекарственных средств (ЛС). Конечной целью доклинических токсикологических исследований является получение данных, достаточных для определения возможности и риска проведения клинических исследований (КИ) ЛС. Доклинические исследования проводятся в соответствии с существующими правилами лабораторной практики, утвержденными уполномоченным федеральным органом исполнительной власти РФ (Приказ Минздравсоцразвития России от 23 августа 2010 г. № 708н «Об утверждении правил лабораторной практики»). При исследовании общетоксического действия решаются следующие задачи: 1. Выявляются переносимые и токсические дозы фармакологического вещества. 2. Устанавливаются органы и системы организма, наиболее чувствительные к изучаемому фармакологическому веществу, определяется характер и степень патологических изменений. 3. Определяется зависимость токсических эффектов от дозы и длительности применения фармакологического вещества и обратимость патологических изменений. ПРИНЦИПЫ НАДЛЕЖАЩЕЙ ЛАБОРАТОРНОЙ ПРАКТИКИ (Good Laboratory Practice) Принципы GLP определены как система обеспечения качества, касающаяся организационного процесса и условий, в которых неклинические исследования медицинской и экологической безопасности должны быть спланированы, выполнены, проконтролированы, оформлены и заархивированы. Принципы GLP предназначены для обеспечения согласованности и достоверности результатов доклинических исследований медицинской и экологической безопасности. Принципы GLP направлены на обеспечение приемлемости результатов научных исследований. ФЕДЕРАЛЬНЫЙ ЗАКОН №61-ФЗ «ОБ ОБРАЩЕНИИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ» (с изменениями и дополнениями ФЗ от 13.07.2015 N 241-ФЗ и ФЗ от 22.12.2014 N 429-ФЗ в редакции от 13.07.2015) ОБ УТВЕРЖДЕНИИ ПРАВИЛ НАДЛЕЖАЩЕЙ ЛАБОРАТОРНОЙ ПРАКТИКИ (Минздрав России, приказ №199н от 01 апреля 2016 г) 1. Общие положения. Условия проведения эксперимента. Токсикологические исследования обязательны для субстанции оригинального фармакологического вещества и всех лекарственных форм на ее основе. Если лекарственная форма содержит вспомогательные вещества (стабилизаторы, растворители и т.п.), не разрешенные для применения в медицинской практике, то каждое из этих веществ подвергают отдельному токсикологическому исследованию. При комбинации нескольких фармакологических веществ в одной лекарственной форме (фиксированная комбинация) изучают токсичность комбинации в целом и каждого ингредиента в отдельности, если он не был ранее разрешен для применения в медицинской практике. При изменении способа получения фармакологического вещества или лекарственной формы проводится повторная токсикологическая оценка на одном наиболее чувствительном виде животных, который определяется исходя из данных первоначальных исследований. При изменении количественного соотношения ингредиентов в лекарственной форме или увеличении дозировки следует провести ревизию уже имеющихся данных для обоснованного решения вопроса о необходимости проведения дополнительных токсикологических исследований и их объеме. 2. Фармакологическое вещество. Сведения о структуре, физико-химических свойствах, растворимости, условиях хранения, фармакологической активности с представлением данных экспериментальных исследований, предполагаемых дозах и путях введения в клинике, а также другие значимые для проведения эксперимента сведения о свойствах субстанции фармакологического вещества или его лекарственной формы, предоставляются разработчиком. В том числе в виде предварительной нормативной документации (проект ФС, аналитический паспорт вещества и пр.) на фармакологическое вещество. Для лекарственных форм предоставляются проект ФСП, сертификат соответствия и характеристика вспомогательных веществ, использованных при ее получении (растворители, наполнители, стабилизаторы и др.). 3. Общие принципы выполнения исследований. Токсикологические исследования проводят на здоровых половозрелых животных и, при необходимости, на животных моделях патологических состояний. Это правило имеет ряд исключений. Фармакологические вещества, предполагаемые для применения у детей, следует тестировать на новорожденных и неполовозрелых животных. Фармакологические вещества, предназначенные для разработки гериатрических лекарств, следует тестировать на старых животных. Фармакологические вещества, предназначенные для разработки лекарств для беременных, исследуют на беременных животных. Лабораторные животные. Для токсикологических исследований применяют здоровых половозрелых животных, полученных из сертифицированных питомников и прошедших карантин в течение 10—14 дней. Получение животных от не сертифицированных производителей не допускается. Исследования проводят на нескольких видах животных, причем наряду с грызунами обязательно использовать не грызунов. Для токсикологических исследований рекомендуются мыши, крысы, морские свинки, кролики, собаки, мини-свиньи и обезьяны. Токсикологические исследования можно проводить как на нелинейных, так и на линейных животных. В последнем случае следует указать линию животных, поскольку чувствительность к токсическому действию может быть генотипически зависима. При прочих равных условиях в исследованиях по определению острой и хронической токсичности предпочтительнее использование аутбредных животных. Исследования проводят на животных обоего пола одного возраста, разброс по исходной массе не должен превышать ± 10%. Содержание животных определяется Приказом Минздравсоцразвития России от 23 августа 2010 г. № 708н «Об утверждении правил лабораторной практики». Рекомендуется содержание грызунов в индивидуальных клетках, также неприемлема излишняя скученность животных. Следует учитывать, что чувствительность животных к фармакологическому веществу может изменяться под влиянием ряда внешних факторов (температура, влажность, освещенность и кратность воздухообмена помещения, состав подстилок, загрязненность помещения ксенобиотиками, состава корма, времени кормления и др.). В этой связи условия содержания животных, получающих фармакологическое вещество, и контрольных животных должны быть идентичными. Животные содержатся на стандартных, сертифицированных комбикормах в соответствии с действующими нормами при свободном доступе к воде и пище. Стандартные процедуры при работе с лабораторными животными Все исследовательские работы с лабораторными животными выполняются в соответствии с общепринятыми этическими нормами обращения с животными, на основе стандартных операционных процедур, принятых в организации — производителе исследований, которые соответствуют правилам, принятым Европейской Конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для исследовательских и иных научных целей (European Convention for the Protection of Vertebrate Animals Used for Experimental and other Scientifi c Purposes (ETS 123). Strasbourg, 1986). Планирование эксперимента. При планировании хронического токсикологического исследования следует учитывать возможную необходимость оценки динамики возможного токсического эффекта, что особенно важно при длительности введения свыше 3-х месяцев. С этой целью в исследование вводят группы животных, предназначенных для исследований в промежуточные сроки. Кроме того, необходимо предусматривать изучаемые группы для оценки обратимости наблюдаемых эффектов («отставленные группы»). Число животных в каждой группе должно быть достаточным для того, чтобы оценить характер и частоту проявления токсических эффектов и подвергнуть результаты исследований адекватной статистической обработке. Группа должна содержать не менее 10 особей каждого пола. Данные, полученные на самках и самцах, учитываются и анализируются раздельно. Фармакологические вещества вводят в фиксированное время суток с целью предупреждения ошибок, связанных с суточными ритмами. Для исключения ошибок, связанных с сезонными ритмами, обязательно параллельное ведение групп животных, получающих фармакологическое вещество, и контрольных. При исследовании хронической токсичности фармакологических веществ не рекомендуется применение дополнительных растворителей. При необходимости их использования исследование должно быть дополнено еще одной изучаемой группой — «контроль на растворитель». Изучение острой токсичности. Острая токсичность — токсикометрическая характеристика фармакологического вещества или лекарственного препарата (ЛП), выражающая его способность вызывать гибель животных при однократном введении или при введении через короткие (не более 6 ч) интервалы времени в течение суток. Целью изучения острой токсичности является определение переносимых, токсических и летальных доз фармакологического вещества и причин наступления гибели животных с анализом клинической картины интоксикации. Параметры острой токсичности ЛС могут быть вычислены с помощью любых статистических методов, однако предпочтительнее пользоваться методами, позволяющими провести сравнительную оценку исследованных параметров для двух или более фармакологических веществ. Использованный метод расчета среднелетальных доз должен быть обязательно указан в отчете, например, «метод Литчфилда и Уилкоксона». В исследованиях с использованием крупных животных достаточно описания токсических эффектов без достижения летальности. Вид и количество лабораторных животных. Острая токсичность изучается на нескольких видах животных. Причем обязательно используют тот вид животных, на которых была показана специфическая фармакологическая активность вещества и которые будут использоваться при исследовании хронической токсичности. Обычно используют 2 вида животных. Исследования на самцах и самках проводят раздельно, минимальный размер группы 5–6 особей грызунов, при использовании собак или кроликов 3–5 особей. Полученные результаты должны адекватно обеспечить возможность вычисления ЛД50, что предполагает наличие среди изучаемых групп одной группы со 100% летальностью и одной, в которой гибель животных отсутствует. Если из-за низкой токсичности фармакологического вещества нельзя определить ЛД50, следует указать максимальную дозу, которая была введена животным, но не менее 2 г/кг. Пути введения. У мелких лабораторных животных токсичность фармакологического вещества исследуют при нескольких путях введения, причем обязательно используется тот путь, при котором была показана специфическая фармакологическая активность вещества, и путь, который предполагается для клинического применения. Фармакологические вещества, предназначенные для системного введения, вводят перорально и парентерально (внутрибрюшинно, если они не растворимы в воде, внутривенно и подкожно, если они растворимы). Следует учитывать, что при определении токсичности имеют значение концентрация и объем вводимого фармакологического вещества, а при внутривенных инъекциях также скорость введения. Фармакологические вещества, предлагаемые для местного применения, наносят или вводят в соответствующую область согласно способу, предлагаемому для клиники. Фармакологические вещества, предлагаемые для приема внутрь, следует вводить через зонд, закладывать на корень языка. Фармакологические вещества, рекомендованные для ингаляции, изучают, помещая мелких лабораторных животных в затравочные камеры, снабженные специальными затравочными устройствами. Сравнение параметров токсичности при разных путях введения может дать ориентировочные данные о скорости и степени всасывания фармакологического вещества, а сопоставление прямых, отражающих зависимость величины токсического эффекта от дозы, позволяет судить о сходстве или различии в механизмах, вызывающих летальный исход при разных путях введения. Продолжительность наблюдения и регистрация картины интоксикации. Общая продолжительность наблюдения за животными при исследовании острой токсичности должна составлять не менее 14 дней, причем в первый день после введения животные должны находиться под непрерывным наблюдением. Регулярно фиксируют общее состояние животных, особенности их поведения, интенсивность и характер двигательной активности, наличие и характер судорог, координации движений, тонус скелетных мышц, реакцию на тактильные, болевые, звуковые и световые раздражители, частоту и глубину дыхательных движений, ритм сердечных сокращений, состояние шерстного и кожного покрова, окраску слизистых оболочек, размер зрачка, положение хвоста, количество и консистенцию фекальных масс, частоту мочеиспускания и окраску мочи, потребление корма и воды, изменение массы тела и другие показатели, характеризующие токсическое действие. Для соответствующих групп фармакологических веществ целесообразно исследовать некоторые гематологические показатели (морфологические, биохимические, свертываемость крови). Обязательна регистрация сроков развития интоксикации и гибели животных. Целесообразно проведение макроскопического исследования внутренних органов погибших животных, а в случае отсроченной гибели животных — и микроскопическое исследование (степень кровенаполнения органов, наличие кровоизлияний, изъязвлений слизистых оболочек и др.). Первичные данные доклинического токсикологического исследования должны документироваться и храниться в соответствии с требованиями, определяемыми Приказом Минздравсоцразвития России от 23 августа 2010 г. № 708н «Об утверждении правил лабораторной практики». В отчете представляются все первичные данные в виде таблиц и/или графиков, они должны быть обработаны статистически, заключения и выводы должны базироваться на статистических заключениях. Общие принципы статистической обработки данных биологических исследований представлены в специальном разделе настоящего руководства. Оформление отчета осуществляется в соответствии с ГОСТом 7.32-2001 «Отчет о научно-исследовательской работе» и Приказом Минздравсоцразвития России от 23 августа 2010 г. № 708н «Об утверждении правил лабораторной практики». Заключение должно содержать обоснованное мнение авторов о возможности КИ изученного ЛС. При решении и обосновании этого вопроса следует учитывать следующие факторы: 1. Терапевтическую широту фармакологического вещества, т.е. соотношение минимальной токсической и терапевтической доз. 2. Характер и обратимость выявленной патологии. Заключение должно содержать суждения исследователей о степени опасности острого и хронического отравления, прогноз возможных побочных реакций и рекомендации по необходимым ограничениям применения ЛС при КИ. Нормативно-правовая и методическая база проведения доклинических исследований лекарственных средств. Руководство по процедурам мониторинга соответствия GLP (ГОСТ 31879-2012). Руководство по проведению инспекций испытательных центров и аудитов исследований (ГОСТ 31880-2012). Роль и обязанности руководителя исследований в соответствии с GLP (ГОСТ 31881-2012). Организация и контроль архивов (ГОСТ 31882- 2012). Обеспечение качества в соответствии с GLP (ГОСТ 31883-2012). Соответствие поставщиков испытательного центра GLP (ГОСТ 31884-2012). Применение GLP к исследованиям в полевых условиях (ГОСТ 31885-2012). Применение GLP к краткосрочным исследованиям (ГОСТ 31886-2012). Применение GLP к компьютеризированным системам (ГОСТ 31887-2012). Роль и обязанности спонсора в соответствии с GLP (ГОСТ 31888-2012). Подача заявки и проведение инспекций и аудитов исследований в другой стране (ГОСТ 31889-2012). Руководство по подготовке отчетов об инспекциях испытательных центров (ГОСТ 31900-2012). Организация и управление исследованиями, проводимыми на нескольких испытательных площадках (ГОСТ 31890-2012). Применение GLP к исследованиям in vitro (ГОСТ 31891-2012). Методическая база токсикологических исследований Руководства по доклиническим исследованиям лекарственных средств в Российской Федерации. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств Часть первая / Под ред. А.Н. Миронова - М.: Гриф и К, 2012. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств (иммунобиологические лекарственные препараты). Часть вторая / Под ред. А.Н. Миронова - М.: Гриф и К, 2012. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р.У.Хабриева - М., 2005. Международные руководства по оценке безопасности химической продукции и лекарственных средств Организация Экономического Сотрудничества и Развития (ОЭСР; OECD). Методы испытаний химической продукции, представляющей опасность для окружающей среды. Методы испытаний по воздействию химической продукции на организм человека Руководства международной конференции по гармонизации (ICH) по оценке безопасности лекарственных средств. Современный стандарт содержания и использования животных в GLP исследованиях – благополучие и комфорт. Предсказательная ценность токсикологических исследований на животных зависит от надежности (воспроизводимости) экспериментальных данных. Только использование стандартных животных, так же как и стандартных методов и реагентов, приводит к получению воспроизводимых результатов. Достоверные (воспроизводимые) результаты можно получить только на моделях, в которых отсутствуют патогенные микроорганизмы, влияющие на их физиологию. Факторы, вызывающие боль, дискомфорт или стресс у животных в разной и непредсказуемой степени, могут исказить результаты экспериментов по изучению влиянию исследуемого фармакологического средства на организм живой тест-системы. Нормативные документы и литература для работ с лабораторными животными Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев) СП 2.2.1.3218-14. Об утверждении правил надлежащей лабораторной практики (Минздрав России, приказ №199н от 01 апреля 2016) Правила оборудования помещений и организации процедур при работе с лабораторными животными (ГОСТ 33215-2014) Правила работы с лабораторными грызунами и кроликами (ГОСТ 33216-2014) Правила работы с лабораторными хищными млекопитающими (ГОСТ 33217-2014) Правила работы с нечеловекообразными приматами (ГОСТ 33218-2014) Европейская Конвенция об охране позвоночных животных, используемых для экспериментов и в других научных целях (ETS № 123) Директива Совета Европы 2010/63/EU По охране животных, используемых в научных целях Руководство по лабораторным животным и альтернативным моделям в биомедицинских исследованиях / Под ред. Н.Н. Каркищенко, С.В. Грачева, 2010 Руководство по содержанию и использованию лабораторных животных (U.S.A., National Academy Press, Washington, D.C., 2011) Руководство по содержанию и использованию лабораторных животных (FELASA) Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев) СП 2.2.1.3218-14 Об утверждении правил надлежащей лабораторной практики (Минздрав России, приказ №199н от 01 апреля 2016) Европейская Конвенция об охране позвоночных животных, используемых для экспериментов и в других научных целях (ETS № 123) Директива Совета Европы 2010/63/EU по охране животных, используемых в научных целях Руководство по лабораторным животным и альтернативным моделям в биомедицинских исследованиях / Под ред. Н.Н. Каркищенко, С.В. Грачева, 2010 Руководство по содержанию и использованию лабораторных животных (U.S.A., National Academy Press, Washington, D.C., 2011) Список используемой литературы Васильев А. Н. Качественные доклинические исследования - необходимый этап разработки и внедрения в клиническую практику новых лекарственных препаратов // Антибиотики и химиотерапия. 2012. №1-2. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/kachestvennye-doklinicheskie-issledovaniya-neobhodimyy-etap-razrabotki-i-vnedreniya-v-klinicheskuyu-praktiku-novyh-lekarstvennyh (дата обращения: 10.01.2020). Ревякин А. О., Матвеенко Е. Л., Капанадзе Г. Д. Надлежащая лабораторная практика (GLP): персонал и управление экспериментальной работой в научном центре биомедицинских технологий РАМН // Биомедицина. 2012. №1. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/nadlezhaschaya-laboratornaya-praktika-glp-personal-i-upravlenie-eksperimentalnoy-rabotoy-v-nauchnom-tsentre-biomeditsinskih (дата обращения: 10.01.2020). Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. — М.: Гриф и К, 2012. — 944 с. ОРГАНИЗАЦИЯ И ПРОВЕДЕНИЕ ДОКЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ, ВЫПОЛНЯЕМЫХ В СООТВЕТСТВИИ С ПРИНЦИПАМИ НАДЛЕЖАЩЕЙ ЛАБОРАТОРНОЙ ПРАКТИКИ Панкратов Андрей Александрович МНИОИ им. П. А. Герцена - филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России andreimnioi@yandex.ru Доклинические и испытательные центры, современный образ и важные аспекты создания. Основные принципы обеспечения качества в современных вивариях Москва, 19 сентября 2019 European Convention for the Protection of Vertebrate Animals Used for Experimental and other Scientifi c Purposes (ETS 123). Strasbourg, 1986. |