Тезисы по биохимии. Ермакова тезисы. Фгбу научноисследовательский институт вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова рамн
 Скачать 420.5 Kb.
|
ФГБУ Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН«Изучение мембранного механизма противовирусного действия полиэлектролитов (ПЭ) полистиросульфоната со степенью полимеризации 8 и полиаллиламина с молекулярной массой 6 кДа с помощью фосфолипидных монослоев» Ермакова А.А. Актуальность работыГрипп является глобальной инфекцией, которая в период сезонных эпидемий поражает от 10 до 20% населения планеты, а так же единственной, способной вызвать в современном мире пандемии В России на грипп и ОРВИ ежегодно приходится до 90% от всей регистрируемой инфекционной заболеваемости (до 30 млн. больных; из них 45-60% дети) Полиэлектролиты (ПЭ) — это полимеры, в состав молекул которых входят группы, способные к ионизации в растворе.Полиаллиламин (ПАА) Полистиролсульфонат (ПСС) Цель работы:Изучение мембранного механизма вирусингибирующего действия различных полиэлектролитов (ПЭ) с различной молекулярной массой и степенью полимеризации на модели мономолекулярных фосфолипидных монослоев (МФМ). Задачи:Получение МФМ по свойствам соответствующих мембранам оболочных вирусов (на примере вируса гриппа) Определение оптимальной нетоксичной концентрации, молекулярной массы и степень полимеризации электролитов, при которых проявляется их выраженное вирусингибирующее действие с помощью МФМ. Задачи:Изучение кинетики инфекционного титра вируса при использовании различных нетоксических концентраций ПЭ Выявление изменения физико-химических характеристик монослоев после взаимодействия с различными концентрациями ПЭ (полистиролсульфонат, полиаллиламин). Жизнеспособность клеток линии MDCK по данным MTT-тест (оценка активности митохондриальных дегидрогеназ) после добавления различных концентраций ПСС-8 (р˂0,005).Жизнеспособность клеток линии MDCK по данным MTT-тест (оценка активности митохондриальных дегидрогеназ) после добавления различных концентраций ПАА (6 кДа) (р˂0,005).Жизнеспособность клеток линии MDCK по данным MTT-тест (оценка активности митохондриальных дегидрогеназ) после добавления различных концентраций ПАА (8 кДа) (р˂0,005).Кинетика снижения инфекционного титра вируса гриппа. 1- добавление к вирусу 30 мкМ ПАА (6 кДа), 2 - добавление к вирусу 30 мМ ПСС-8, 3 – добавление к вирусу 30 мМ ПСС-31, 4 - добавление к вирусу 30 мМ ПСС-77, 5 - добавление к вирусу 30 мМ ПСС-170, 6 - добавление к вирусу 30 мМ ПСС-360, 7 - добавление к вирусу 30 мМ ПСС-430,8 – контроль вируса.Определение IC50 для ПСС-8 и ПАА (6 кДа)
Зависимость S/S0 (отношение площади фосфолипидного монослоя при добавлении соответствующей концентрации ПЭ к исходной площади) от концентрации ПЭ.ПСС-8 ПАА (6кДа) Выводы:Определен дипазаон нетоксических концентраций для ПСС-8 - 1-40 мМ и ПАА (6 кДа) - 1-40 мкМ, с IC50 = 3,8 ± 0,19 мМ и 1,8 ± 0,09 мкМ, соответственно. Показано выраженное вирусингибирующее действие ПСС со степенью полимеризации 8 (ПСС-8) и ПАА (6 кДа) в отношении вирусов гриппа. Выявлено увеличение степени конденсации МФМ при увеличении концентрации ПЭ. Данный процесс сопровождается увеличением вязкости монослоя, что в свою очередь, может приводить к изменению структурно-функционального состояния монослоев. Спасибо за внимание! В работе использовались очищенные штаммы вируса гриппа:А/ВЧП/Вейбридж (H7N7) А/Маллард Пенсильвания/10218/84 (H5N2) А/NIBRG-14(H5N1) с исходным инфекционным титром 4,5 lg ТЦД50/мл. Для получения монослоёв из фосфатидилхолина («Sigma», США) с конечной концентрацией фосфатидилхолина 10 мг/мл была использована оригинальная установка, состоящая из тефлоновой ванны Ленгмюра с размером 200x200x1 мм, весов Ленгмюра, неподвижного и снимающего барьера. При движении снимающего барьера монослой оказывает определённое давление на тефлоновую пластинку весов, которая передаётся через торсионную нить на ИК- датчик (Россия). Напряжение с ИК - датчика и электропривода (координатора барьера) вводится в компьютер. Установка обеспечивает точность измерения поверхностного давления F= 0,05 мН/м. Установка Ленгмюра-БлоджеттА . 1- Ванна; 2-Поверхностные барьеры; 3-Подложка; 4-Электронные весы Вильгельми; 5-Поверхность воды с ПАВ; 6-Поверхность воды без ПАВ. Молекулы амфифильного соединения на поверхности воды“ А - в двумерной “газообразной” фазе, Б - в двумерной “жидкой” фазе, В - в двумерной “жидкокристаллической” фазе На поверхность субфазы наносят ПАВ, например липиды, жирные кислоты, белки, амфифильные полимеры и др. На межфазной границе молекулы ориентируются так, что их полярные части (например, головки липидов) оказываются погружены в жидкость, а гидрофобные фрагменты (например, углеводородные хвосты) обращены к воздуху |