Характеристика вируса и лабораторная диагностика вичинфекции
 Скачать 1.4 Mb.
|
|
Справочный материал ХАРАКТЕРИСТИКА ВИРУСА И ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ВИЧ-ИНФЕКЦИИ. ВИЧ-инфекция - антропонозное вирусное заболевание с прогрессирующим иммунодефицитом и развитием вследствие этого вторичных оппортунистических инфекций и опухолей. Заболевание имеет характер пандемии. На планете более 40 миллионов больных вич-инфекцией. Около 1 млн больных в России 1981 год- первые сведения о случаях заболевания в США пневмоцистной пневмонией и саркомой Капоши у гомосексуалистов, лиц, употреблявших героин, гемофиликов и выходцев с Гаити. Болезнь получила название CПИД - синдром приобретённого иммунодефицита, (AIDS -Immune Deficiency Sindrome ). Возбудитель был выделен в 1983 году Люком Монтанье и Франсуазой Барре Занусси (Франция, институт им. Пастера) рис.1. LAV -1– вируса ассоциированного с лимфоаденопатией В 1986 году в Западной Африке открыт LAV-2. Учёным присуждена Нобелевская премия 2008 года. В 1986 году после определения идентичности HTLV и LAV -изолятов принято единое название – HIV- Human immunodeficiency virus (ВИЧ) -вирус иммунодефицита человека SIV (ВИО- вирус иммунодефицита обезьян)   Люк Монтанье Франсуаза Барре Занусси Рис.1 Происхождение вируса. Обезьяны шимпанзе и дымчатый мангобей явились резервуаром ВИО и ВИЧ в Африке. Таксономия. Вич относится к семейству Retroviridae, подсемейству Orthoretrovirinae, роду Lentivirus Структура. Вирус представляет собой сферические частицы с диаметром 100-120 нм Содержит: 1. Нуклеокапсид: две цепи РНК - p 15, Внутренние белки - р7, p9. Обратную транскриптазу, интегразу, протеазу. Белок капсида - p24, 2. Матрикс - р17. Наружная оболочка – суперкапсид состоит из двух слоёв липидов. В суперкапсид встроены гликопротеиды оболочки Gp41, gp120. Рис.2  Рис.2 Схема ВИЧ Геном содержит три структурных гена: gag, pol, env Регуляторные гены: tat, rev, nef. vif, vpu,vpr. LTR – длинный концевой повтор (ядерный фактор связывания) Антигенными свойствами обладают белки сердцевины и оболочечные белки вируса. Выделяют два основных типа вируса: ВИЧ-1 и ВИЧ-2. ВИЧ-1 делят на три группы: M, N и О. Большинство изолятов относится к группе М, в которой выделяют 14 подтипов: A, B, C, D, F-1, F-2, G, H, I, K… ВИЧ-2 вместо белков gp160, gp120, gp41, p24 содержит белки gp140, gp105, gp36, p26. Изменчивость.У пациента на разных стадиях заболевания накапливается различные антигенные варианты одного и того же изолята ВИЧ. Их называют квазивидами. Причина изменчивости – ошибки в работе фермента обратной транскриптазы. Рузистентность. ВИЧ инактивируется: при температуре 56 град за 30 мин., при кипячении за 1-3 мин.При 0,1>рН<13. Инактивируется перекисью водорода,3% р-ром хлорамина, эфиром,спиртом,растворами «Пресепта», «Клорсепта». ВИЧ устойчив к: УФО и ионизирующему излучению, высушиванию до 3-7 дней. Сохраняется в жидкой среде до 15 дней, в донорской крови, замороженной сыворотке несколько лет, в нативном состоянии в крови, на предметах внешней среды сохраняет заразную способность до 14 дней, в высушенных субстратах -до 7 суток. Культивирование. Восприимчивы шимпанзе. В культуре перевиваемых Т-хелперов с добавлением ИЛ-2. В культуре HeLa. Обнаруживают ЦПД - образование синцития Репродукция. Вирус взаимодействует своим gp 120 с рецептором CD4 на Т-лимфоцитах хелперах и корецептором (хемокиновые рецепторы ССR-5 и СХСR-4).Затем gp 41 способствует слиянию мембран и проникновению в клетку. На матрице вирусной РНК с помощью фермента обратной транскриптазы синтезируется ДНК-копия, которая затем достраивается в двух цепочную ДНК-копию. При помощи фермента интегразы ДНК-копия ВИЧ перемещается в ядро клетки образует кольцевую структуру и встраивается в ДНК клетки Т4-лимфоцита. ДНК- в виде провируса может сохраняться в клетке много лет. Причиной активации может стать вторичная инфекция. При этом активируется ядерный фактор (NF-kB) и стимулирует транскрипцию ДНК-копии - синтез вирусной матричной РНК. На вирусной матричной РНК клеточные рибосомы осуществляют синтез вирусных белков. Образование полипротеина и нарезание его при помощи фермента протеазы. Затем из вновь синтезированных вирусных белков и вирусной РНК происходит сборка и выход вирусных частиц из клетки , что заканчивается гибелью клетки. Эпидемиология. Вирус содержится во всех биологических жидкостях крови, сперме, вагинальном секрете, ликворе, слюне, слёзной жидкости, секрете потовых желёз. Источник инфекции – инфицированные люди, которыми могут быть и больные со всеми клиническими проявлениями и безсимптомные ВИЧ-инфицированные люди. Заражение человека ВИЧ происходит при попадании вируссодержащего материала непосредственно в кровь или на слизистые оболочки. Основные механизмы и пути передачи: передачи ВИЧ-инфекции –половой, парэнтеральный, У наркоманов через иглу шприца и использовании общей посуды для приготовления наркотика вертикальный(через плаценту, во время родов и при грудном вскармливании. В медучреждениях при переливании нетестированной крови . Особенности патогенеза ВИЧ-инфекции. ВИЧ инфицирует клетки, несущие на своей поверхности CD4- рецептор и хемокиновые рецепторы CCR5 и CXCR4: Th (helper)-лимфоциты, макрофаги, фолликулярные дендритные клетки, клетки островков Лангерганса, клетки микроглии мозга. Вирус также инфицирует широкий спектр клеток без CD4, обладающих хемокиновыми рецепторами: эпителий шейки матки, почечный эпителий, эпителий кишечника, эндотелиальные клетки капилляров мозга, клетки роговицы глаза и др. Вирус различными способами поражает иммунную систему. Развитие иммунодефицита связано с гибелью Т4 клеток , нарушении продукции цитокинов, аутоиммунном поражении клеток, поражение В-лимфоцитов. На фоне иммунодефицита могут возникать опухоли, поражается нервная система, жкт и другие системы, а также развиваться оппортунистические заболевания - кандидоз, криптококкоз, криптоспоридиоз, герпетические инфекции , атипичный микобактериоз, пневмоцистная пневмония, токсоплазмоз, гемофильная инфекция, гистоплазмоз, кокцидиоз и другие бактериозы. Лабораторная диагностика.  Рис.3 Стадии заболевания и динамика диагностических маркеров. .  Рис.4 Учёт ИФА 1. 2-хкратное исследование сывороток в ИФА для определения антител. Возможно одновременное определение антител с антигеном . 2. Исследование сыворотки методом иммуноблот позволяет сделать окончательное диагностическое заключение   Рис.5 Реактивы для иммуноблота и учёт результатов 3.Определение вирусной РНК или провирусной ДНК ВИЧ в лейкоцитах методом ПЦР. ПЦР позволяет определять вирусную нагрузку ВИЧ в крови инфицированного, определять мутации, резистентность ВИЧ к антиретровирусным препаратам. Пациенты, которым проводится диагностика ВИЧ с использованием ПЦР: Новорожденные, больные с агаммаглобулинемией, больные находящиеся в периоде «серологического окна», доноры крови. 4.Иммунограмма. Определение уровня лимфоцитов CD4+B сыворотке крови (иммунограмма методом моноклональных антител) 5.Экспресс-тесты: ИФА на полимерных мембранах (тест-полоски), имунохроматография для выявления антиена и антител в сыворотке крови. Рис.6   Рис.6. Иммунохроматографическая тест-система Ora Quick Advance. Диагноз ВИЧ-инфекции подтверждается при учёте совокупности эпидемиологических, клинических, иммунологических, вирусологических и молекулярно-генетических данных. Лечение. Современный способ лечения ВИЧ-инфекции называется ВАРТ (ВААРТ) - высокоактивная антиретровирусная терапия. Высокоактивная антиретровирусная терапия ВИЧ-инфекции заключается в одновременном приеме трех или четырех препаратов, направленных на подавление различных стадий репродукции вируса. По принципу действия все антиретровирусные препараты, используемые при ВИЧ-инфекции, делятся на группы: НИОТ - Нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы ВИЧ (азидотимидин,ретровир, ставудин) ННИОТ - Ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы ВИЧ ( делавердин,невирапин) ИП - Ингибиторы протеазы ВИЧ (ритоновир, индинавир) ИА- Ингибиторы адсорбции (энфувертид) ИИ- Ингибиторы интегразы – (долатегравир)  Лечебная вакцина.ВИЧРЕПОЛ – полимер-белковая рекомбинантная конъюгированная, созданная в ГНЦ Институте иммунологии ФМБА, включает консервативные антигены ВИЧ-1. Представляет собой рекомбинантный белок rec (24-41), копирующий аминокислотные последовательности белка р17, белка р24 и трансмембранного белка gp41, конъюгированный с полиоксидонием  Российский государственный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" (Новосибирск) разработал вариант вакцины «КомбиВИЧвак» Профилактика Специфическая профилактика ВИЧ-инфекции не разработана. Основное внимание в профилактике ВИЧ-инфекции в настоящее время отводится противоэпидемическим мероприятиям, направленным на исключение инфицирования: использование презервативов, одноразовых шприцев, игл, медицинских инструментов, систем для переливания крови, стерилизация инструментов, материалов и обеззараживание препаратов из крови, использование персоналом лечебных учреждений индивидуальных средств защиты (в частности, перчаток). Большое значение имеет своевременное обследование и выявление ВИЧ-инфицированных людей, борьба с проституцией, наркоманией, гомосексуализмом, безнравственностью, половое воспитание молодежи, просветительская работа среди населения. В России действует закон, предусматривающий уголовное наказание за умышленное заражение ВИЧ (ст. 122 УК РФ). ПРИЛОЖЕНИЕ 1. В Российской Федерации в соответствии с Приказом Минздравсоцразвития России от 17 марта 2006 г. №166 выделяют следующие клинические стадии ВИЧ-инфекции: 1. Стадия инкубации. 2. Стадия первичных проявлений. Варианты течения: - бессимптомное течение; - острая инфекция без вторичных заболеваний; - острая инфекция с вторичными заболеваниями. 3. Субклиническая стадия. 4. Стадия вторичных заболеваний: 4А. Потеря массы тела менее 10%, грибковые, вирусные, бактериальные поражения кожи и слизистых, повторные фарингиты, синуситы, опоясывающий лишай. 4Б. Потеря массы тела более 10%, необъяснимая диарея или лихорадка более месяца, повторные стойкие вирусные, бактериальные, грибковые, протозойные поражения внутренних органов, локализованная саркома Капоши, повторный или диссеминированный опоясывающий лишай. 4В. Кахексия. Генерализованные вирусные, бактериальные, микобактериальные, грибковые, протозойные, паразитарные заболевания, в том числе: кандидоз пищевода, бронхов, трахеи, легких, пневмоцистная пневмония; злокачественные опухоли; поражения центральной нервной системы. 5. Терминальная стадия. ПРИЛОЖЕНИЕ 2 Выделяют СПИД-векторные (индикаторные, сопутствующие, ассоциированные, оппортунистические) заболевания. По этиологическому фактору они подразделяются на следующие группы: 1. Бактериальные инфекции (внелегочный туберкулез, тяжелые пневмонии, инфекции, вызванные атипичными микобактериями и др.). 2. Грибковые инфекции (кандидоз, криптококкоз, гистоплазмоз, пневмоцистная пневмония, кокцидиоидомикоз). 3. Вирусные инфекции (герпесвирусные, цитомегаловирусная, папилломавирусная и др.). 4. Протозойные инфекции (токсоплазмоз, криптоспоридиоз, микроспоридиоз и др.). 5. Другие заболевания (саркома Капоши, лимфомы, ВИЧ-энцефалопатия, ВИЧ-истощающий синдром и др.). |