Методы химико-токсикологического анализа. Химикотоксикологического анализа
 Скачать 210.5 Kb.
|
ТЕМА7 ТОКСИКОЛОГИЯ ФОСФОРОРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙРабота 1. Ферментный метод определения фосфорорганических пестицидов в патологическом материале Материальное оснащение: баня водяная, термометр химический до 100 °С, пробирки, колбы мерные на 100 и 50 мл, пипетки по 0,2-10 мл отдельно для каждого реактива, склянки с притертыми пробками, химические стаканы, весы, вата. Принцип метода. В основу метода положена способность фосфорорганических соединений (ФОС) угнетать холинэстеразу. Основное значение этого фермента разложение избытка ацетилхолина на холин и уксусную кислоту. Последняя в ходе реакции изменяет окраску индикатора бромтимолового синего до зеленого цвета. При угнетении фермента замедляется расщепление ацетилхолина, и образование уксусной кислоты в реакционной смеси происходит в течение длительного времени, что устанавливают по скорости изменения окраски индикатора. О наличии пестицидов в пробе судят по степени угнетения активности холинэстеразы, выраженной в процентах. Расчет проводят по калибровочному графику. Чувствительность метода 0,1 мг/кг анализируемого продукта. Точность метода 80%. Метод рекомендуется для определения хлорофоса, метафоса, карбофоса, трихлорметафоса-3, ме-тилнитрофоса, метилмеркаптофоса, ДДФВ и диброма в органах и тканях животных. Подготовка материала к исследованию. Исследуемый материал тщательно измельчают, после чего навеску в 20-30 г помещают в стаканчик с притертой пробкой, заливают адекватным количеством хлороформа (20-30 мл), закрывают пробкой и экстрагируют в течение часа при периодическом встряхивании. Затем пипеткой, нижний конец которой обернут ватой, набирают 1 мл хлороформенного экстракта и переносят в пробирку (или химический стаканчик). В другую контрольную пробирку (или химический стаканчик) вносят 1 мл хлороформа. Обе пробирки помещают на водяную баню при температуре не выше 40 °С или под струю воздуха до полного испарения хлороформа. К сухому остатку обе пробирки добавляют по 1 мл дистиллированной воды и снова помещают пробирки на водяную баню на 3 мин. После этого охлаждают до комнатной температуры. Ход опыта. В опытную (№ 1) и контрольную (№ 2) пробирки вносят по 1 мл раствора холинэстеразы или сыворотки крови лошади. Затем в пробирку № 1 добавляют экстракт из патматериала, а в пробирку № 2 - дистиллированную воду. Содержимое хорошо перемешивают и ставят на водяную баню при температуре 39-40°С на 30 мин. По истечении этого времени в пробирку № 3 вносят 0,5 мл содержимого из опытной пробирки № 1, а в контрольную пробирку (№ 4) - 0,5 мл из контрольной (№ 2). В каждую пробирку приливают по 4,5 мл раствора № 3 и сразу отмечают время начала реакции. Затем в отдельную пробирку (№ 5) помещают 0,5 мл содержимого из контрольной пробирки (№ 2) и добавляют 4,5 мл раствора № 2 Эта пробирка является колориметрическим стандартом (см. схему) В даль- нейшем отмечают время уравнения (в минутах) цвета жидкости в опытной и контрольной пробирках с цветом колориметрического стандарта. Процент угнетения активности холинэстеразы вычисляют по формуле:  где X - угнетение активности холинэстеразы, %; В - время уравнения цвета жидкости в контрольных пробирках с цветом стандарта; в - время уравнения цвета жидкости в опытных пробирках с цветом стандарта. Схема определения активности холинэстеразы
Угнетение активности холинэстеразы на 10% и более свидетельствует о наличии ФОС в исследуемом материале. Количественное определение ФОС проводят по калибровочному графику, построенному по препарату, наличие которого предполагается в исследуемом материале. Если подозревается незвестное ФОС, то калибровочный график строят по одному из ядохимикатов, перечисленных выше. Для этого необходимо иметь химически чистое вещество или препарат с известным содержанием активно действующего вещества (ДВ). Из заведомо чистого образца исследуемого материала (мышцы, орган или другой образец) в склянки с притертыми пробками берут 5 навесок по 10 г и вносят в них соответственно 1,0; 5,0; 10,0; 20,0; 50,0 мкг препарата по ДВ. Через 30 мин. каждую навеску заливают 10 мл хлороформа и экстрагируют один час. Хлороформенные экстракты исследуют в описанном выше порядке. По оси ординат откладывают процент угнетения активности холинэстеразы в каждой пробе, а по оси абсцисс-количество препарата (в мг/кг) по ДВ. Зависимость процента угнетения активности холинэстеразы от концентрации ФОС в исследуемом материале (примерный калибровочный график) представлена в таблице. Угнетение активности холниэстеразы в зависимости от содержания хлорофоса в молоке (мг/л) __
Работа 2. Токсическое действие хлорофоса и лечение отравления Материальное оснащение: кролик, шприцы, вата, спирт 10%-ный раствор хлорофоса, 0,1.%-ный раствор атропина сульфата. Ход опыта. Кролику ввести под кожу в области спины 10%-ньн раствор хлорофоса из расчета 180 мг на 1 кг массы по ДВ. Через 15-30 мин, когда возникнет яркая картина отравления, ввести 0,1%-ньп раствор атропина сульфата под кожу в количестве 3 мл (или внутри венно 2 мл). Повторно атропин ввести через 45 мин. Протокол весп по схеме:
Задание по фармакотерапии Выписать в рецептах и объяснить действие препаратов 1.10 овцам - 1,5%-ный раствор атропина сульфата. 2. Корове - комплексный антидот, состоящий из 1,5%-ного раствора атропина сульфата, 10%-ный раствор тропацина и 20%-ный раствор дипироксима. 3. 10 телятам - лекарственную смесь, состоящую из 0,9%-ного раствора натрия хлорида, 10%-ного раствора кальция хлорида, калия хлорида, тиамина бромида и аскорбиновой кислоты. 4. Лошади средство при сердечной слабости. 5. Витамины Bt и С для устранения параличей и слабости скелетной мускулатуры. 6. Рассчитать потребность в атропине сульфате для 50 лошадей при отравлении фосфорорганическими соединениями. Вопросы программированного контроля по токсикологии фосфорорганических соединений I. Применение фосфорорганических соединений в сельском хозяйстве. 1. Гербициды. 2^ Инсектициды. 3< Акарициды. 4. Нематоциды. 5. Фунгициды. 6. Бактерициды. 7.3ооциды. 8.Дефолианты. П. Фосфорорганические инсектициды контактного действия. 1. Байтекс. 2. Антио. 3. Бромофос. 4. Амифос. 5. ДДВФ. 6. Метил-меркаптофос. 7. Тиофос. 8. Октаметил. 9. Трихлорметафос-3. 10. Препарат М-81. 11. Фталофос. 12. Фосфамид. 13- Хлорофос. III. Фосфорорганические инсектициды системного действия 1. Байтекс. 2. Антио. 3. Бромофос. 4. Амифос. 5. ДДВФ. 6. Метил-меркаптофос. 7. Тиофос. 8. Октаметил. 9. Трихлорметафос-3. 10. Препарат М-81. 11.Фталофос. 12. Фосфамид. 13. Хлорофос. IV. Фосфорорганические инсектициды, применяемые для защиты животных от кровососущих насекомых. 1. Контактного действия. 2. Системного действия. V. Срок выжидания после обработки растений фосфорорганическими инсектицидами контактного действия. 1. Не ранее 6 дней. 2. Не ранее 6 недель. VI. Срок выжидания после обработки растений фосфорорганическими инсектицидами системного действия 1. Не ранее 6 дней. 2. Не ранее 6 недель. VII, Основные свойства фосфорорганических инсектицидов. 1. Высокая токсичность для насекомых и клещей. 2. Низкая токсичность для насекомых и клещей. 3. Высокая токсичность для человека и животных. 4. Низкая токсичность для человека и животных. 5. Узкий спектр действия. 6. Широкий спектр действия. 7. Являются липоидотропными веществами. 8. Хорошо всасываются через слизистые оболочки и кожу. 9. Обладают кумулятивным действием. 10. Кумуляция отсутствует. 11. Большой расход на единицу обрабатываемой площади. 12. Малый расход на единицу обрабатываемой площади. УШ. Что следует понимать под термином "летальный синтез"? 1. Превращение пестицида в организме в менее токсическое соединение. 2. Превращение пестицида в организме в более токсическое соединение. IX. Основные механизмы токсического действия фосфорорганических соединений. 1. Образование в организме карбоксигемоглобина, 2. Образование метгемоглобина. 3. Угнетение активности холинэстеразы. 4. Угнетение активности Na+, K+, АТФ-азы. X. Основные симптомы острого отравления фосфороганически-ми соединениями. 1. Бронхоспазм. 2. Расширение бронхов. 3. Судороги. 4. Мышечные подергивания. 5. Сухость во рту. 6. Обильная саливация. 7. Усиление перистальтики кишечника. 8. Атония кишечника. 9. Частое мочеиспускание. 10. Анурия. 11. Миоз. 12. Мидриаз. XI. Диагностическое значение определения активности холинэстеразы при отравлении фосфорорганическими соединениями. \. Основное. 2. Ориентировочное. ХП. Метод изоляции фосфорорганических соединений из биологического материала при химико-токсикологических исследованиях. 1. Подкисленной водой. 2. Перегонкой с водяным паром. 3. Органическими растворителями. 4. Минерализация. XIII. Укажите препараты, которые следует применять при отравлении фосфорорганическими соединениями. \. Карбахолин. 2. Атропин. 3, Пилокарпин. 4. Тропацин. 5. Реак-тиваторы холинэстеразы. 6. Унитиол. XIV. Фосфорорганические пестициды, присутствие которых недопустимо в кормах для сельскохозяйственных животных. 1. Карбофос. 2. Хлорофос. 3. Фосфамид. 4. Трихлорметафос-3. 5. Метилмеркаптофос. 6. Тиофос. 7. Меркаптофос. 8. Октаметил. XV. Указать Фосфорорганические пестициды максимально допустимый уровень которых в кормах для животных составляет не более 2 мг на 1 кг корма.
| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||