Токсилогическая химия. Токс химия. Изолирование метафоса из биологического материала
 Скачать 22.85 Kb.
|
|
1.На судебно-химическое исследование доставлены объекты (печень с желчным пузырем и желудок с содержимым) с указанием в направлении на необходимость проведения исследования на наличие метафоса. Вопрос 1: Укажите схему исследования объектов на наличие метафоса; Изолирование метафоса из биологического материала. 50 г измельченного биологического материала помещаем в коническую колбу с притертой пробкой на 250 мл, заливаем трехкратным объемом смеси ацетона, этанола, воды (2:2:1), перемешиваем, подкисляем щавелевой кислотой до рН=4,5 по универсальному индикатору, настаиваем при помешивании 2 часа. Надосадочную жидкость отделяем, фильтруем через сухой бумажный фильтр в фарфоровую чашку и выпариваем на водяной бане до объема 60 мл, остаток переносим в делительную воронку, добавляем 25 мл хлороформа, 75 мл 25% раствора натрия хлорида, смесь встряхиваем 5 минут. Хлороформный слой отделяем, оставшуюся жидкость дважды экстрагируем 15 мл хлороформа. Объединенные хлороформные извлечения очищаем активированным углем, фильтруем через бумажный фильтр в фарфоровую чашку, выпариваем до объема 2 мл и исследуем. Обнаружение метафоса С целью обнаружения метафоса применяют реакцию с растворами о-дианизидина и пербората натрия (NaBO 3 ·4H 2 O), а также метод хроматографии в тонком слое силикагеля. Реакция с о-дианизидииом и перборатом натрия. В пробирку вносят 1 мл ацетонового раствора исследуемого вещества, прибавляют 0,5 мл 3%-го свежеприготовленного ацетонового раствора о-дианизидина и 2 мл 1,25 %-го свежеприготовленного раствора пербората натрия. В зависимости от содержания метафоса через 5—30 мин раствор приобретает желтую или красноватую окраску. Если смесь реагирующих веществ довести до рН= 10-11, то чувствительность реакции повышается в 3—4 раза. ТСХ – предварительное обнаружение: На хроматографическую пластинку наносим исследуемое извлечение и растворы метчиков. Пластинку хроматографируем в системе бензол до пробега фронта растворителя на 10 см. Метафос проявляем 5% спиртовым раствором натрия гидроксида и нагреваем 5-10 мин. в сушильном шкафу при 100-110оС: наблюдается лимонно-желтое пятно. Подтверждающий анализ: 1. Метод ГЖХ. Анализ проводится по высоте или площади пика. Метод обладает высокой чувствительностью, поэтому широко и успешно применяется для обнаружения и количественного определения микро количеств пестицидов. Исследование проводят на капиллярных колонках с различающимися по полярности неподвижными жидкими фазами. Выбор неподвижной жидкой фазы требует индивидуального подхода для решения конкретной задачи. 2. Фотоколориметрический метод.Основан на минерализации ФОС с помощью серной и азотной кислот. Определенный объем извлечения из объекта помещают в колбу, добавляя 3 мл конц. HCl, 10 мл конц. HNO3. Смесь нагревают до просветления жидкости и появления белых паров. Минерализат охлаждают и доводят до определенного объема водой. К части раствора прибавляют молибдат аммония и бензидин. Регистрируют величину оптической плотности окрашенного раствора. Расфет ФОС ведут по калибровочному графику. Количественное определение метафоса проводят путем сравнения интенсивности окраски и размеров пятен препарата пробы и стандартов раствора. Полнота определения 85%. Используем пластинки «Силуфол». Пробу массой 50 г измельчают, заливают 50 мл н-гексана, экстрагируют 20 мин на аппарате для встряхивания. Экстракцию повторяют дважды. Гексановые экстракты объединяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия в мерную колбу. Хроматографирование. 1/3 часть экстракта концентрируют в выпарительной чашке и капиллярной пипеткой наносят на пластинку. Стенки чашки еще 3—4 раза ополаскивают небольшими порциями диэтилового эфира (по 0,2 мл), каждый раз наносят раствор в центр первого пятна. Пластинку с пробами и стандартными растворами помещают в камеру для хроматографирования со смесью гексана с ацетоном (4:1). После подъема фронта растворителя на высоту 10 см хроматографирование прекращают, пластинку помещают в вытяжной шкаф на 5—10 мин для удаления паров растворителей. Затем пластинку опрыскивают 4 н. раствором едкого натра и выдерживают в сушильном шкафу 20 мин при температуре 120—130°С. Метафос на пластинке проявляется в виде желтых пятен. Количество метафоса определяют путем сравнения размеров и интенсивности окраски пятен пробы и стандартного раствора. Расчет. Содержание метафоса в пробе вычисляют по формуле Х = А/Р где X — содержание метафоса в пробе, мг/кг или мг/л; А — количество метафоса, найденное путем сравнения со стандартами, мкг; Р — масса или объем анализируемой пробы, г или мл. 2.На судебно-химическое исследование доставлен объект (печень с желчным пузырем и желудок с содержимым) с указанием в направлении на необходимость проведения исследования на наличие карбофоса. Вопрос 1: Укажите схему исследования полученных объектов на наличие карбофоса; Изолирование карбофоса из биологического материала. 50 г измельченного биологического материала помещаем в коническую колбу с притертой пробкой на 250 мл, заливаем трехкратным объемом смеси ацетона, этанола, воды (2:2:1), перемешиваем, подкисляем щавелевой кислотой до рН=4,5 по универсальному индикатору, настаиваем при помешивании 2 часа. Надосадочную жидкость отделяем, фильтруем через сухой бумажный фильтр в фарфоровую чашку и выпариваем на водяной бане до объема 60 мл, остаток переносим в делительную воронку, добавляем 25 мл хлороформа, 75 мл 25% раствора натрия хлорида, смесь встряхиваем 5 минут. Хлороформный слой отделяем, оставшуюся жидкость дважды экстрагируем 15 мл хлороформа. Объединенные хлороформные извлечения очищаем активированным углем, фильтруем через бумажный фильтр в фарфоровую чашку, выпариваем до объема 2 мл и исследуем. Обнаружение карбофоса. Для обнаружения карбофоса применяют цветные реакции. Реакция с диазотированной сульфаниловой кислотой. Несколько миллилитров хлороформного раствора или хлороформной вытяжки вносят в пробирку и жидкость выпаривают досуха. К сухому остатку прибавляют 2 мл воды, 1 мл раствора диазотированной сульфаниловой кислоты и 0,5 мл 5 %-го раствора гидроксида натрия. Появление вишнево-красной окраски указывает на наличие карбофоса в исследуемом растворе. Реакция с реактивом Марки. В фарфоровую чашку вносят несколько миллилитров хлороформного раствора исследуемого препарата, который выпаривают досуха. К сухому остатку прибавляют 5—10 капель реактива Марки. Появление оранжевой окраски, которая через некоторое время переходит в темно-коричневую, указывает на наличие карбофоса в исследуемом растворе. Выполнению этой реакции мешает эмульгатор ОП-7, который содержится в технических препаратах карбофоса и в некоторых других ядохимикатах. ТСХ – предварительное подтверждение: На хроматографическую пластинку наносим исследуемое извлечение и растворы метчиков. Пластинку хроматографируем в системе бензол до пробега фронта растворителя на 10 см. Карбофос проявляем 0,5% раствором палладия хлорида в 1% растворе хлористоводородной кислоты: наблюдается желтое пятно; или раствором бромфенолового синего, содержащего серебра нитрат: наблюдается сиреневое пятно на синем фоне. Затем пластинку нагреваем при 60оС 20 мин. после охлаждения проявляем 10% раствором уксусной кислоты: наблюдается лиловое пятно. Подтверждающий анализ: 1. Метод ГЖХ. Анализ проводится по высоте или площади пика. Метод обладает высокой чувствительностью, поэтому широко и успешно применяется для обнаружения и количественного определения микро количеств пестицидов. Исследование проводят на капиллярных колонках с различающимися по полярности неподвижными жидкими фазами. Выбор неподвижной жидкой фазы требует индивидуального подхода для решения конкретной задачи. 2. Фотоколориметрический метод.Основан на минерализации ФОС с помощью серной и азотной кислот. Определенный объем извлечения из объекта помещают в колбу, добавляя 3 мл конц. HCl, 10 мл конц. HNO3. Смесь нагревают до просветления жидкости и появления белых паров. Минерализат охлаждают и доводят до определенного объема водой. К части раствора прибавляют молибдат аммония и бензидин. Регистрируют величину оптической плотности окрашенного раствора. Расфет ФОС ведут по калибровочному графику. Количественное определение – ТСХ: Подвижным растворителем служит смесь гексана с ацетоном (1:1). Количественно определение проводят путем визуального сравнения интенсивности окраски и размеров пятен проб и стандартных растворов. Хроматографирование. Пластинку с нанесенными пробами и стандартными растворами помещают в камеру для хроматографирования, в которую предварительно наливают бензол (для дополнительной очистки пробы на пластинке). Край пластинки с нанесенными растворами должен быть погружен в растворитель не более чем на 0,5 см. После того как фронт растворителя поднимется на 10 см, пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько минут для испарения растворителя. Пластинку вновь помещают в камеру для хроматографирования с подвижным растворителем (смесь гексана с ацетоном 1:1) и хроматографируют, как указано выше. Высушенную пластинку опрыскивают проявляющим реактивом. Проявление: последовательно опрыскивают смесью растворов бром-фенолового синего и нитрата серебра. Затем пластинку помещают в сушильный шкаф, нагретый до 60 СС, на 20 мин. После этого пластинку охлаждают и опрыскивают раствором лимонной кислоты. При наличии карбофоса в исследуемой пробе на желтом фоне хроматографической пластинки появляются лиловые пятна (Rf = 0,60-0,65). Можно использовать и другие реактивы (растворы о-толидина,хлорида палладия, аммиаката серебра в ацетоне). Количественное определение проводят путем сравнения размеров пятен пробы и стандартного раствора. Расчет. Содержание препарата в пробе (мг/кг) вычисляют по формуле Х = А/Р где А — количество препарата, найденное путем сравнения со стандартом,мкг; Р —масса исследуемой пробы, г. В качестве вопросов для собеседования: 1. Основные пути поступления, накопления, выделения хлорорганических пестицидов (ХОП). В организм поступают преимущественно ингаляционным путем, а также пероральяо, через кожу. Хлорорганические соединения обладают кумулятивным действием. Накапливаются они преимущественно в паренхиматозных органах, в липоидоеодержащих тканях. Выделяются желудочно-кишечным трактом, почками, молочными железами. 2. На какие органы, ткани ХОП оказывают наиболее характерное действие? Накапливаются они преимущественно в паренхиматозных органах, в липоидоеодержащих тканях. Хлорорганические соединения задерживаются в нервной ткани и липоидах паренхиматозных органов, нарушая в них процессы окисления и фосфоролирования. Оказывают влияние на процессы окисления и фосфорилирования, блокируют функцию дыхательных ферментов, нарушают обмен веществ (углеводный и другие). По токсическому действию хлорорганические соединения относятся к паренхиматозным, нервным ядам. Они относятся к ядам политропного действия с преимущественным поражением центральной нервной системы и паренхиматозных органов, в частности печени. Отравления ими в основном характеризуются поражением центральной и периферической нервной системы, печени, почек, нарушением функций эндокринной, сердечно-сосудистой системы, кроветворения. 3. Наиболее характерное отрицательное свойство ХОП для теплокровных. ХОП отрицательное воздействие на репродуктивность животных и выделение с молоком. Обладают эмбриотоксическим действием, вызывают пороки развития и мутагенные изменения. Задерживается половое развитие у самцов, а самок возникает угроза прерывания беременности. |