ТСХ. Комплект электронных слайдов иллюстративные материалы по инструментальным методам анализа лекарственных средств. Часть i
 Скачать 2.46 Mb.
|
КОМПЛЕКТ ЭЛЕКТРОННЫХ СЛАЙДОВ «ИЛЛЮСТРАТИВНЫЕ МАТЕРИАЛЫ ПО ИНСТРУМЕНТАЛЬНЫМ МЕТОДАМ АНАЛИЗА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ. ЧАСТЬ I»ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пермская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации Кафедра фармацевтической химии факультета очного обучения Кафедра токсикологической химии Пермь, 2014 Авторы: доцент кафедры фармацевтической химии факультета очного обучения, директор Центра дистанционных образовательных технологий Пермской государственной фармацевтической академии Саттарова О.Е., доцент кафедры токсикологической химии Пермской государственной фармацевтической академии, кандидат фармацевтических наук Люст Е.Н., профессор кафедры фармацевтической химии факультета очного обучения Пермской государственной фармацевтической академии Ярыгина Т.И. Рецензент: Эвич Н.И., кандидат фармацевтических наук, доцент кафедры фармацевтической химии факультета дополнительного профессионального образования и факультета заочного обучения. Комплект электронных слайдов предназначен для студентов 3-5 курсов факультета очного обучения Утверждено Ученым советом ГБОУ ВПО ПГФА Минздрава России, протокол № 5 от 26 декабря 2013 г. СодержаниеКраткие теоретические основы метода Методика хроматографического разделения 2.1. Подготовка пластинки, хроматографической системы, хроматографической камеры 2.2. Нанесение проб на хроматографическую пластинку 2.3. Хроматографический процесс 2.4. Обнаружение (детектирование) компонентов на хроматограмме 2.5. Идентификация компонентов на хроматограмме 3. Список литературы 1. Краткие теоретические основы метода Хроматографией называется процесс разделения смесей веществ, основанный на количественных различиях в поведении разделяемых компонентов при их непрерывном перераспределении между двумя контактирующими фазами, одна из которых неподвижна, а другая имеет постоянное направление движения. Хроматография в тонком слое сорбентаХроматография в тонком слое сорбента – это разновидность распределительной хроматографии. Метод основан на непрерывном перераспределении хроматографируемых веществ между двумя фазами, подвижной и неподвижной. Неподвижной фазой в данном случае являются сам твердый сорбент с небольшим содержанием воды. Подвижная фаза – свободно перемещающийся растворитель или смесь растворителей. В основе разделения веществ в ТСХ преимущественно лежат процессы распределения и адсорбции. 2. Методика хроматографического разделения Подготовка пластинки, хроматографической системы, хроматографической камеры Нанесение проб на хроматографическую пластинку Хроматографический процесс Обнаружение (детектирование) компонентов на хроматограмме Идентификация компонентов на хроматограмме (при необходимости количественное определение). 2.1. Подготовка пластинки, хроматографической системы, хроматографической камеры В качестве хроматографической камеры может быть использована герметически закрываемая емкость любой формы Чаще всего это стеклянные емкости различного размера цилиндрической или прямоугольной формы с плоским дном Необходимое условие – наличие герметичной крышки (пришлифованное стекло, завинчивающиеся крышки и др.). Пластинки для ТСХПри проведении анализа можно использовать пластинки, выпускаемые промышленным способом или изготовленные вручную Рациональнее для работы пользоваться готовыми пластинками, т.к. пластинки, приготовленные вручную, обычно не имеют стандартной толщины слоя по всей поверхности Слой сорбента на пластинке может быть закрепленным или незакрепленным. При работе с незакрепленными слоями чаще всего используют алюминия оксид, который равномерно распределяется по пластинке нужного размера с помощью стеклянной палочки или специального устройства. Пластинки для ТСХ«Мерк» «Силуфол» «Силуфол УФ-254» «Силуфол УФ-365» «Сорбфил» «Плазмахром» Подготовка пластинкиНаносят линию старта Наносят линию финиша 10 см 1,5 см 2.2. Нанесение проб на хроматографическую пластинку Нанесение пробыАнализируемый раствор наносят микропипеткой, микрошприцем или капилляром на линию старта, проведенную на расстоянии 1-1,5 см от нижнего края пластинки, так, чтобы пятна образцов отстояли друг от друга и от краев слоя сорбента не менее чем на 2 см Каждую следующую каплю в одну и ту же точку можно наносить только после полного высыхания предыдущей Нежелательное растекание пятен анализируемых проб при нанесении предотвращают путем периодического подсушивания. Нанесение пробыМикропипетка, капилляр и микрошприц Нанесение пробыОбъекты Хлороформные растворы веществ: Хинин Папаверин Аминазин Нанесение пробыНаносимый объем извлечения – 1-10 мкл Размер наносимого пятна не более 3 мм 2.3. Хроматографический процесс На дно камеры наливают подвижную фазу в количестве, достаточном для образования слоя глубиной 0,5 см, камеру закрывают и выдерживают для насыщения парами растворителей 30-60 мин. Состав подвижной фазы: диоксановая система (диоксан-хлороформ-ацетон-25% раствор аммиака 47,5:45:5:2,5). После окончательного высыхания нанесенных на линию старта пятен веществ пластинку вносят в камеру. Нижний край пластинки при этом должен погрузиться в подвижную фазу на 0,5-1 см. 2.4. Обнаружение (детектирование) компонентов на хроматограмме Когда фронт растворителя достигнет линии финиша (10-15 см), пластинку вынимают, подсушивают до полного удаления растворителя и открывают пятна хроматографировавшихся веществ: 1. Визуально (для веществ, имеющих собственную окраску). 2. По флюоресценции веществ при облучении пластин УФ-светом или по поглощению ультрафиолетового излучения (темные пятна на флюоресцирующем фоне). 3. С помощью хромогенных реагентов (образование окрашенных соединений с исследуемыми веществами). Совокупность пятен, полученных после хроматографирования анализируемого образца и последующего проявления их тем или иным способом, называется хроматограммой. Облучатель хроматографический УФС-254/365Камера для опрыскивания хроматографических пластинПульверизатор для хроматографических пластинДетекция: реактив Драгендорфа и 20% раствором серной кислоты (реагент наносится опрыскиванием) аминазин папаверин хинин Детекция: облучение УФ-светом хинин (голубая флюоресценция) папаверин аминазин поглощение УФ-излучения (темные пятна на флюоресциру-ющем фоне) 2.5. Идентификация компонентов на хроматограмме ИдентификацияИдентификация компонентов проводится с использованием свидетелей (метчиков) – известных эталонных веществ сравнения, которые хроматографируются одновременно с анализируемой пробой на одной и той же пластинке. Отношение длины пробега анализируемого вещества к длине пробега растворителя – величина Rf – служит качественной характеристикой соединения на данном сорбенте и в данной системе растворителей. Величина Rf зависит от: природы сорбента; толщины слоя; природы подвижной фазы; температуры; длины пробега растворителя. Идентификация компонентов на хроматограммеа b Величина Rf – отношение длины пробега анализируемого вещества (а) к длине пробега растворителя (b) Список литературы:Беликов, В.Г. Фармацевтическая химия / 4-е изд., перераб. и доп. – М., МЕДпрессинформ", 2008. – 613 с. Государственная фармакопея СССР [Текст] / М-во Здравоохранения Рос. Федерации. – 11-е изд., доп. – М.: Медицина, 1987. Вып. 1. – 336 с. Руководство к лабораторным занятиям по фармацевтической химии: учеб. пособие / Э.Н. Аксенова, О.П. Андрианова, А.П. Арзамасцев и др. / под. ред. А.П. Арзамасцева. – 3-е изд., перераб. и доп. – М., Медицина, 2001. – 384 с. : ил.1. «ТСХ-скрининг в химико-токсикологическом анализе лекарственных веществ»: учебно-методическая разработка для самоподготовки и лабораторных занятий студентов очного и заочного факультетов по токсикологической химии / Н.В. Кокшарова, Т.Л. Малкова, Е.В. Метелева; под ред. Т.Л. Малковой – Пермь, 2002. – 31 с. |