лабораторная диагностика заболеваний печени. 1 том Курс рабов. Курсовая работа значение биохимических показателей крови при заболеваниях печени
 Скачать 403 Kb.
|
|
ГОСУДАРСТВЕННОЕ АВТОНОМНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ СРЕДНЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «БРЯНСКИЙ БАЗОВЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ КОЛЛЕДЖ» КУРСОВАЯ РАБОТА ЗНАЧЕНИЕ БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КРОВИ ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ПЕЧЕНИ Специальность: 31.02.03 Лабораторная диагностика ПМ 03. Проведение лабораторных биохимических исследований МДК 03.01 Теория и практика лабораторных биохимических исследований Работу выполнила: Шилкина Анна Алексеевна Группа: 39л4 Руководитель: Чекед Екатерина Леонидовна Работа заслушана________________________ (дата) Работа оценена: ____________________________________________________ (оценка, подпись преподавателя) Брянск, 2022 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ 3 ГЛАВА 1. ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ЭТИОЛОГИИ, ПАТОГЕНЕЗА И ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПЕЧЕНИ 4 1.1 Виды заболеваний печени, их этиология и патогенез 4 ГЛАВА 2. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ БИОХИМИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПЕЧЕНИ 10 2.1. Материал и методы исследования 10 2.2Результаты исследования 15 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 20 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 21 Приложение 4 25 26 ВВЕДЕНИЕАктуальность работы заключается в том, что значению биохимических исследований в диагностике заболеваний печени отводится незначительное внимание. Одним из актуальных вопросов современной медицины является определение активности и характера эволюции патологического процесса при заболеваниях печени. Цель работы – изучить значение биохимических показателей крови при заболеваниях печени. В соответствии с целью исследования были поставлены следующие задачи: На основе специальной медицинской литературы и интернет – источников изучить этиологию, патогенез и виды заболеваний печени; Рассмотреть изменения лабораторных показателей при различных заболеваниях печени; Провести исследование биохимических маркеров заболеваний печени; Сделать выводы о проведенном исследовании. Основные методы исследования: анализ научной литературы (преимущественно по медицине и биохимии, диагностика). Структура работы: работа состоит из введения, основной части (глава 1 и 2), заключения и списка литературных источников, приложения. ГЛАВА 1. ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ЭТИОЛОГИИ, ПАТОГЕНЕЗА И ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПЕЧЕНИ1.1 Виды заболеваний печени, их этиология и патогенезРабота печени может быть нарушена при множестве патологий. Всего известно более ста заболеваний печени, вызванных разными причинами и имеющих разные механизмы развития, разное течение и прогноз. Они встречаются у людей любого возраста и могут быть как врождёнными, наследственными, так и приобретенными. Печень – самый крупный орган в организме человека. Она находится в правом подреберье под диафрагмой, граничит с желудком, правой почкой и петлями кишечника и состоит из двух основных долей и множества долек. Печень выполняет ряд жизненно важных функций, необходимых для нормального функционирования организма: очистительную – очищение крови от микроорганизмов, токсинов, аллергенов, ядов; синтетическую – образование белков крови, гормонов, ферментов, холестерина, жиров и их производных; пищеварительную – синтез желчи, которая накапливается в желчном пузыре; депонирующую – хранение крови, гликогена, жирорастворимых гормонов, витаминов и микроэлементов [2]. При заболеваниях печени она может увеличиваться в размерах, что вызывает ощущение тяжести в животе. Нарушается отток желчи, необходимой для переваривания жиров, в результате появляются тошнота, рвота, повышенное газообразование, вздутие живота, нарушения стула. Печень не справляется с очистительной функцией, что приводит к проникновению в кровь ядов и токсинов и вызывает недомогание, слабость. Попадание в кровь желчных кислот при разрушении клеток печени может вызывать зуд. Желтушность кожи и слизистых обусловлена увеличением уровня билирубина. Нарушение синтеза белка (альбуминов) приводит к уменьшению осмотического давления крови и выходу жидкости в ткани, как следствие, возникают отеки. Из-за уменьшения количества факторов свертывания повышается кровоточивость [7]. Далее будут более рассмотрены заболевания печени. 1.Алкогольный гепатит Этиология Воспаление печеночной ткани, развивающееся вследствие токсического поражения печени алкоголем. Данное заболевание характеризуется скоплением жировых веществ внутри клеток печени, а также гибелью некоторых участков органа. Патогенез Накопления цитокинов, повреждения мембран гепатоцитов при продолжительном употреблении алкоголя. Морфологически это характеризуется воспалительной инфильтрацией, дистрофией гепатоцитов, реже – наличием ступенчатых некрозов [1]. 2.Желчнокаменная болезнь Этиология Заболевание гепатобилиарной системы, характеризующееся образованием конкрементов (камней) в желчном пузыре, в общем желчном протоке и печеночных желчных протоках. Патогенез К образованию камней приводит избыточная концентрация желчи в желчном пузыре, а также нарушение обмена холестерина или билирубина. Главной составляющей камней желчного пузыря является холестерин, кроме него в составе камней встречаются билирубин, соли кальция и другие соединения [4]. 3. Цирроз печени Этиология Тяжелое заболевание, при котором в ткани печени происходят необратимые изменения с замещением нормальных клеток фиброзной соединительной тканью. Патогенез Действие этиологических факторов: цитопатогенное действие вирусов, иммунные механизмы, влияние гепатотоксичных цитокинов, железа, продуктов перекисного окисления липидов, активизация функции клеток. И то, что приводит к избыточному разрастанию соединительной ткани, нарушение кровоснабжения паренхимы печени за счёт капилляризации синусоидов и уменьшения сосудистого русла с развитием ишемических некрозов гепатоцитов [8]. 4.Токсический гепатит Этиология Вызван прямым токсическим действием на печень ядовитыми грибами, суррогатами алкоголя, соединениями мышьяка, толуолом, бензолом, свинцом и другими веществами. Патогенез Вредные вещества, которые попадают в организм поражают печень, Проникая в кровь, оказывают прямое действие на печёночную клетку, нарушая её функцию и жизнедеятельность, нарушают кровообращение в мелких сосудах, питающих печень, это приводит к недостатку кислорода в клетках и их смерть, с последующим нарушением функции органа [1]. В группе риска: Люди, которым необходим длительный прием лекарств, обладающих токсическим действием на печень. Употребляющие наркотики. Злоупотребляющие алкоголем. Не привитые против гепатита А и В. Часто контактирующие с высокими дозами токсичных химических веществ – пестицидами, инсектицидами, бытовой. Беременные. Страдающие ожирением [2]. Таким образом, можно отметить, что заболеваний существует большое количество отличие их в том, что они имеют разное происхождение и по-разному воздействуют на печень, изменяя при этом разные показатели и объединяет их то, что они долго остаются незамеченными и трудно излечимы. 1.2. Биохимические показатели крови при заболеваниях печени При биохимических исследованиях остаётся необходимым исследование ферментного статуса, пигментного обмена, белкового состава сыворотки, осадочных проб и выделительной функции печени [3]. В лабораторной диагностике определение активности ферментов очень весомо. Синтез этих ферментов выполняется гепатоцитами и клетками эпителия желчных протоков. Далее были рассмотрены биохимические показатели крови, отклоняющиеся от референтных значений при заболевании печени и применяемые для точной диагностики вида патологического процесса. Билирубин. Желтый пигмент, продукт распада гемоглобина. Общий билирубин в крови в норме колеблется в пределах 3,4–17,1 мкмоль/л, прямой — 0–7,9 мкмоль/л, непрямой — до 19 мкмоль/л. Превышение нормы может указывать на патологические процессы в печени. Аспартат-аминотрансфераза (АСТ). Фермент, участвующий в обмене аминокислот. Референтные значения: мужчины — 37 Ед/л; женщины — 31 Ед/л. Превышение нормы наблюдается при повреждениях клеток печени (гепатоцитов) или сердечной мышцы. Аланин-аминотрансфераза (АЛТ). Участвует в образовании глюкозы из белков и жиров. Нормальные показатели: мужчины до 65 лет — 7–50 Ед/л; женщины до 65 лет — 5–44 Ед/л; Превышает норму в несколько раз при серьезных патологиях печени Щелочная фосфатаза (ЩФ). Участвует в реакциях отщепления остатка фосфорной кислоты от ее органических соединений. Содержится преимущественно в печени и костях. Норма в крови: для женщин — до 240 Ед/л; для мужчин — до 270 Ед/л. Повышенный показатель может свидетельствовать, помимо заболеваний костной системы, о раке или туберкулезе печени, циррозе, инфекционном гепатите. Альфа-амилаза. Фермент, помогающий организму усваивать сложные углеводы. Синтезируется в разных тканях и органах, главным образом в слюнных и поджелудочной железах. Слюнная фракция фермента участвует в начальном этапе пищеварения, а панкреатическая выводится в двенадцатиперстную кишку, где происходит основной этап расщепления углеводов, избыток фермента выделяется из организма с мочой. Норма в крови: для мужчин и женщин -28-100 Ед/л. В небольшом количестве амилаза постоянно присутствует в моче и крови, однако отклонения от нормы свидетельствуют о нарушениях со стороны поджелудочной или слюнных желез. Биохимическая лабораторная диагностика изучает баланс и дисбаланс в метаболизме веществ. При данной диагностике основываясь на полученных данных от исследования можно сразу же назначить лечение при первых же признаках и стадиях заболевания печени [10]. Таким образом для того чтобы дифференцировать заболевание печени необходимо определить значения следующих показателей АЛТ, АСТ, щелочная фосфатаза, билирубин, альфа-амилаза и ряд других, которые при заболеваниях изменяются. ГЛАВА 2. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ БИОХИМИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПЕЧЕНИ2.1. Материал и методы исследованияЦелью работы является исследование биохимических маркеров заболеваний печени. В качестве маркеров были выбраны следующие биохимические показатели крови: АЛТ АСТ Щелочная фосфатаза Билирубин. Альфа- амилаза Материалом для исследования являлась: сыворотка крови без следов гемолиза. Возраст и пол не учитывался. Практическое исследования было проведено на базе: ГАУЗ «Брянская городская поликлиника №4» Количество проб: от 12 пациентов ГАУЗ «Брянская городская поликлиника №4» В ходе практического исследования были использованы следующие методики лабораторных исследований: 1.Методика определения уровня билирубина в сыворотке крови. Принцип метода: Прямой (связанный, коньюгированный с глюкуроновой кислотой) билирубин непосредственно реагирует с диазотированной сульфаниловой кислотой, а общий билирубин - в присутствии кофеинового реагента с образованием окрашенного азосоединения. Интенсивность окраски реакционной среды пропорциональна концентрации билирубина и измеряется фотометрически при длине волны 535 (500-560) нм. Набор реактивов и ход определения (приложение 1). Нормальные значения: общий билирубин-8,5-20,5 мкмоль/л,прямой билирубин-до 4,0 мкмоль/л. Клинико-диагностическое значение определения уровня билирубина в сыворотке крови Причины повышения уровня билирубина: холецистит; наследственные нарушения обмена билирубина; мононуклеоз; гепатит; цирроз печени; опухоль печени; гемолитическая анемия. Причины снижения уровня билирубина: прием витамина С; прием медицинских препаратов(теофиллина или фенобарбитала и др.); 2.Методика лабораторного исследования уровня АсАТ в крови Принцип метода: Под действием фермента аспартатаминотрансферазы (АсАТ) в результате переаминирования происходит перенос аминогруппы с аспартата на а-кетоглутарат. Активность АсАТ пропорциональна количеству образовавшихся линитрофенилгидразонов пирувата и оксилоацетата в щелочной среде, которое определяется фотометрическим методом. Набор реактивов и ход определения (приложение 2). Нормальные величины: АсАТ 7—18 Ед/л X 0,017 Клинико-диагностическое значение определения активности АСТ в сыворотке крови Превышение верхнего предела нормы более, чем в 10 раз: острый гепатит и некроз печени; тяжелый синдром сдавления; тяжелая гипоксия тканей значения активности иногда могут превышать верхний предел нормы более, чем в 100 раз. Превышение верхнего предела нормы в 5—10 раз: инфаркт миокарда; после хирургического вмешательства; заболевание скелетных мышц; холестаз; хронический гепатит. Превышение верхнего предела нормы менее чем в 5 раз: физиологическое (у новорожденных); другие болезни печени; панкреатит; гемолиз (in vivo и in vitro). 3.Методика определение уровня АлАТ в сыворотке крови Принцип метода: Под действием фермента аланинаминотрансферазы (АлАТ) в результате переаминирования происходит перенос аминогруппы с аланина на альфы - кетоглутарат. Активность АлАТ пропорциональна количеству образовавшихся денитрофенилгидразонов пирувата в щелочной среде, которое определяется фотометрическим методом. Набор реактивов и ход определения (приложение 3). Нормальные величины для АлАТ: АлАТ АЛТ 5 — 30 Ед/л X 0,017 Клинико-диагностическое значение определения активности АлАТ в сыворотке крови Значительное повышение активности АлАТ (в два раза выше нормы и более) развивается при: некрозе печеночных клеток любого происхождения, правосердечной недостаточности, обширной травме печени, левосердечной недостаточности. циррозе печени, механической желтухе, опухоли печени, обширном инфаркте миокарда, миокардите, Клинико-диагностическое значение определения активности АлАТ и АсАТ в сыворотке крови. Подъем активности имеет место также при: некрозе клеток печени или их повреждении любой этиологии, включая холестатическую и обструктивную желтуху, хронические гепатиты, лекарственное повреждение печени, алкогольный гепатит (обычно АсАТ более АлАТ), тяжелой физической нагрузке. вирусные и хронические гепатиты (АлАТ более АсАТ в большинстве случаев, плохой прогноз при АсАТ более АлАТ); метастазах в печени и гематомах, некрозе или травме сердечной, или скелетной мышцы, 4.Методика определение уровня амилазы в сыворотке крови Энзиматический кинетический метод Принцип метода: Под действием a-амилазы синтетический субстрат EPS [4,6-этилиден(G7) -р-нитрофенил- (G1) -a,D-мальтогептаозид] гидролизуется с образованием бесцветных нитрофенилмальтоозидов. Под действием a-глюкозидазы нитрофенилмальтоозиды гидролизуются до глюкозы и окращенного р-нитрофенола. Скорость нарастания концентрации р-нитрофенола пропорциональна активности фермента. Оптическую плотность измеряют при длине волны 405 нм. Метод линеен до 1640 Ед/л. Материал для исследования: 1) негемолизированная сыворотка или плазма крови. Сыворотку или плазму крови следует отделить от форменных элементов крови немедленно после взятия крови. Образцы сыворотки или плазмы стабильны 7 суток при комнатной температуре, 1 месяц при температуре +(2-8) ОС, образцы не замораживать. Анализ сдается натощак. Между последним приемом пищи и взятием крови должно пройти не менее 8 ч (желательно - не менее 12 ч). Сок, чай, кофе, тем более с сахаром, пить нельзя! Можно пить воду. 2) Образцы мочи стабильны не более 24 часов при +(2-8) ОС, не замораживать. Проверьте уровень pH. Моча с pH <5 может приводить к снижению стабильности фермента. Ход определения и набор реактивов см. приложение 4. Нормальные величины активности альфа-амилазы в сыворотке или плазме взрослого человека составляют: 23-100 МЕ/л; в моче 10-490 МЕ/л. Клинико-диагностическое значение определения уровня альфа - амилазы в сыворотке крови Активность альфы-амилазы крови и мочи в течение суток значительно меняется. 1) Гиперамилаземия – повышение активности амилазы в сыворотки крови наблюдается при: Острый панкреатит – максимальные значения имеют место в первые 6 – 12 часов после проявления симптомов болезни. После этого времени активность фермента снижается, нормализуется через 2 – 5дней. Если активность сохраняется увеличенной более 5 дней, это свидетельствует о увеличении воспаления. Обострение при хроническом панкреатите Перфорация язвы двенадцатиперстной кишки Кишечная непроходимость Холецистит Перитонит Острый аппендицит 2) Гипоамилаземия – снижение активности амилазы в сыворотки крови (практически не имеет диагностического значения) наблюдается при: Некроз поджелудочной железы Тиреотоксикоз Инфаркт миокарда 3) Гиперамилазурия – повышенное выделение амилазы с мочой наблюдается при: Острый панкреатит – повышение активности фермента наблюдается в течение первых 24 часа воспаления. Повышенное выделение фермента с мочой сохраняется в последующие 7 -10 дней, несмотря на то, что активность амилазы в крови уже после 3 – 4дней нормальная. Рак поджелудочной железы Перфорация язвы двенадцатиперстной кишки Желчекаменная болезнь Болезни слюнных желез, паротит, камни в слюнных протоках 4)Гипоамилазурия – снижение выделения амилазы с мочой наблюдается при: Болезни почек Болезни печени Таким образом, можно отметить, что для выявления заболеваний печени используется целый ряд ферментативных тестов для определения уровня АСТ, АЛТ и альфа-амилазы в сыворотке крови, которые могут помочь диагностировать данные патологические процессы на ранней стадии. Результаты исследованияБыло проведено биохимическое исследований 12 проб сыворотки крови пациентов ГАУЗ «Брянская городская поликлиника №4», в которых определялись показатели АЛТ, АСТ, щелочная фосфатаза, билирубин. На основе полученных результатов была составлена таблица 2.1. Таблица 2.1. Показатели крови пациентов ГАУЗ «Брянская городская поликлиника №4»
Для интерпритации результатов необходимо вспомнить нормы исследуемых показателей: Общий билирубин в крови в норме 3,4–17,1 мкмоль/л, прямой — 0–7,9 мкмоль/л, непрямой — до 19 мкмоль/л; Аспартат-аминотрансфераза в норме у мужчин — 37 Ед/л, у женщин — 31 Ед/л; Аланин-аминотрансфераза в норме у мужчин— 7–50 Ед/л, у женщин — 5–44 Ед/л; Щелочная фосфатаза в норме у женщин — до 240 Ед/л, у мужчин — до 270 Ед/л. Альфа- амилаза- 28-100 Ед/л Анализируя полученные результаты, можно сделать следующие выводы: 1) У образцов сыворотки №1, № 7 и № 11 повышен уровень билирубина, но при этом значения остальных показателей в норме, поэтому можно предположить, что у данной группы пациентов цирроз. 2) У образцов сыворотки № 2 и № 12 уровень АЛТ, щелочной фосфатазы, прямого и общего билирубина, сильно повышен, уровень АСТ умерено повышен, а альфа-амилаза в норме. Можно предположить, что у данной группы пациентов развивается гепатит. 3) У образца сыворотки № 3 умеренно повышен уровень показателей АСТ, АЛТ, щелочной фосфатазы, показатель альфа- амилазы в 2 раза выше нормы, билирубин не вышел за пределы нормы. На основе полученных результатов можно предположить, что у данного пациента возможно осложнение желчнокаменной болезни, т.е. холецистит. 4) У образцов сыворотки № 4, все показатели в диапазоне референтных величин, но повешен уровень общего и не прямого билирубина, что может свидетельствовать о гемолитической желтухе. 5) У образцов сыворотки №5 и №9 показатели щелочной фосфотазы, билирубина и альфа амилазы выше нормы, АЛТ и АСТ умеренно повышены, что может говорить о панкреатите. 6) У образцов сыворотки № 6 и № 10 все показатели в диапазоне референтных величин, что говорит о хорошей компенсации либо отсутствии патологических процессов, связанных с нарушением ферментного обмена, выраженного изменением уровня исследуемых показателей крови. 7) У образца сыворотки № 8 уровень общего и прямого билирубина, АСТ, АЛТ, щелочной фосфатазы в несколько раз превышает нормальны значения, а показатель альфа- амилазы умеренно повышен Таким образом, можно отметить, что в большинстве исследуемых образцов сыворотки крови повышены исследуемые ферменты, что может предположительно подтверждать диагноз, поставленный врачом, но при этом необходимо учитывать результат всех диагностических тестов. Далее был проведен анализ полученных результатов, а именно на основании данных таблицы 2.1. была составлена диаграмма 2.2., наглядно позволяющая оценить значение биохимических маркеров в заболеваниях печени. Для оценки полученных результатов при составлении диаграммы 2.1. учитывалось, что разграничение образцов крови на группы по заболеваниям печени на основе исследования уровню показателей ферментативного обмена условно и носит предположительный субъективный характер, так как для установки точно диагноза врач проводит ещё ряд функциональных и инструментальных исследований, а также обращает особое внимание на изучение анамнезе пациента.  Диаграмма 2.1. Сравнительный анализ уровня биохимических показателей крови пациентов ГАУЗ «Брянская городская поликлиника №4»Рассмотрев данную диаграмму можно заметь следующие: 1. В среднем значении группы пациентов с предположительно заболеванием гепатит значение уровня АЛТ и АСТ выше, чем у других групп. 2. У группы пациентов предположительно с заболеванием панкреатит уровень альфа- амилазы находиться выше, чем у остальных групп. 3. При развитии желтухи, в основном повышается уровень билирубина, и в зависимости от их разновидности, изменяется показатель прямого и непрямого билирубина Таким образом, можно отметить, что заболевания печени сопровождается повышением уровня ферментов, альфа-амилаза, АСТ, АЛТ, билирубина и щелочной фосфатазы, поэтому при подозрении патологии печени биохимические показатели помогут помочь врачу скорректировать последующую терапию. ЗАКЛЮЧЕНИЕВсе заболевания печени очень сильно влияют на все процессы жизнедеятельности организма. При острых нарушениях печени страдает в первую очередь обмен веществ. Внешне меняется цвет лица и состояние кожи, структура ногтей и волос. Может значительно меняться масса тела. Однако, по результатам исследований, описанных ранее, мы наблюдаем, что при заболевании печени, метаболизм, все же, подвергается изменениям. Подводя итоги исследования биохимического анализа печени, пациенты, которые перенесли заболевание печени и находятся на этапе реабилитации, можно предположить, что острые нарушения влияют на нормальную работу печени, тем самым, ухудшая ее. Важными показателями в диагностике печени являются повышение внутриклеточных ферментов (АЛТ и АСТ), что свидетельствует о наличии обструкции желчевыводящих протоков при патологиях печени. Не менее значимым лабораторным показателем является уровень билирубина, альфа- амилазы и щелочной фосфатазы в крови. По результатам проведенных лабораторных исследований и анализа полученных данных сделан вывод, что изменения биохимических маркеров зависит от заболеваний, а они разнообразны и малоизучены, как и действия, оказываемые на организм и на саму печень. Таким образом, биохимический анализ является одним из ключевых звеньев в цепи логических размышлений врача при постановке диагноза заболевания печени. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫАнтонова Т. В. Гепатиты в вопросах и ответах: пособие для врачей / Т. В. Антонова, Д. А. Лиознов. – М. : Литтерра, 2016. – 329 с. Бабаева А.Г. Регенерация : факты и перспективы / А.Г. Бабаева. – Москва, РАМН АНО, - 2019. – 334 с. Базарный В.В. Характеристика гематологических параметров у реципиентов печени / В.В. Базарный, А.Ю. Максимова, Е.Н. Бессонова // Вестник гематологии. – 2019. - №3(15). – С. 5. Ивашкин, В.Т. Болезни печени и желчевыводящих путей: руководство для врачей / В.Т. Ивашкина. – Москва : Вести, 2002. – 416 с. Кишкун, А.А. Клиническая лабораторная диагностика : учебное пособие / А.А. Кишкун. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2013. - 976 с. Лазебник Л.Б. Возрастные изменения печени (клинические и морфологические аспекты) / Л.Б. Лабезник, Л.Ю. Ильченко // Клиническая геронтология. – 2007. - №1. – С. 3-8. Лазебник Л.Б. Невирусные поражения печени / Л.Б Лазебник, И.Г. Журавлева // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. – 2013. - №1. - С. 40-46. Чесноков Е. В. Хронические гепатиты и циррозы печени : руководство для практических врачей / Е. В. Чесноков, Э. А. Кашуба. – Тюмень : ИПП Тюмень, 2020. – 286 с. Щастный А.Т. Проблемы и перспективы использования клеточной терапии в лечении патологии печени / А.Т. Щастный, С.А. Сушков, О.Д. Мяделец // Новости хирургии. – 2017. - № 25(2). – С. 183-193. Общая врачебная практика: диагностическое значение лабораторных исследований : учеб. пособие / под ред. С. С. Вялова, С. А. Чорбинской. – 3-е изд. – Москва : МЕДпресс-информ, 2009. – 176 с Приложение 1 Методика определения уровня билирубина в сыворотке крови Состав набора: Реагент №1. Кофеиновый реагент(200мл) Реагент №2. Сульфаниловая кислота(55мл) Реагент №3. Натрия нитрит(2мл) Реагент №4. Физиологический раствор(250мл) Калибратор-85,5 мкмоль/л (в 2 мл дистил. воды) 1 флакон Процедура анализа:
Пробы перемешайте. Для определения прямого билирубина точно! через 5 мин при 18-25 С измерьте величину экстинкции опытной пробы против соответствующей контрольной пробы при длине волны 535 нм (500-560 нм). Для определения общего билирубина через 20 мин при 18-25 С измерьте величину экстинкции опытной пробы против соответствующей контрольной пробы при длине волны 535 нм (500-560 нм). Экстинкцию калибратора измерьте против дистил. воды через 20 мин при 18-25 С при длине волны 535 нм (500-560 нм). Расчет концентрации билирубина в пробе (С) проведите по формуле: С=Епробы/Екалибр. х 85,5мкмоль/л, где Е пробы - экстинкция опытной пробы, Е калибр. - экстинкция калибровочной пробы, 85,5-концентрация билирубина в калибраторе, мкмоль/л.  Приложение 2 Методика лабораторного исследования уровня АсАТ в крови Состав набора: Реагент №1. Буфер - субстратный раствор (100 мл) Реагент №2. Раствор 2,4-ДНФГ (100 мл) Реагент №3. Натрий едкий(100мл) Калибратор (раствор пирувата натрия)- 1,0ммоль/л(2мл) Процедура анализа:
Инкубация при температуре 370С в течение 60 мин
Пробы перемешайте и инкубируйте 20мин при комнатной температуре (18-250С). Затем в пробирки внесите по 2,5мл разведенного реагента № 3, перемешайте реакционную смесь и через 10 мин измерьте оптические плотности опытных и соответствующих контрольных проб против дистиллированной воды при длине волны 537 нм(500-560нм). Активность аспартатаминотрансферазы выражается в единицах, которые определяются количеством образовавшегося пирувата за единицу времени в единице объема биологической жидкости. Расчет активности (А) фермента проведите по формуле: А=(Еопыт-Еконтр.) х К,где Е опыт - оптическая плотность опытной пробы, Е контроль - оптическая плотность соответствующей контрольной пробы, К-коэффициент, рассчитанный по калибровочному графику. При активности фермента, превышающей 4 ммоль/л или 1,112мкмоль/л, сыворотку крови рекомендуется развести физиологическим раствором и учесть степень разведения при расчете. Приложение 3 Методика определение уровня АлАТ в сыворотке крови Состав набора: Реагент№1.Буфер - субстратный раствор (100 мл) Реагент№2.Раствор 2,4-ДНФГ(100мл) Реагент №3, Натрий едкий(100мл) Калибратор (раствор пирувата натрия)-1,0ммоль/л (2мл) Процедура анализа:
Инкубация при температуре 370С в течение 30 мин
Пробы перемешайте и инкубируйте 20 мин при комнатной температуре (18-250С). Затем в пробирки внесите по 2,5 мл разведенного реагента №3, перемешайте реакционную смесь и через 10 мин измерьте оптические плотности опытных и соответствующих контрольных проб против дистиллированной воды при длине волны 537 нм (500-560 нм). Активность аланинаминотрансферазы выражается в единицах, которые определяются количеством образовавшегося пирувата за единицу времени в единице объема биологической жидкости. Расчет активности (А) фермента проведите по формуле: А=(Еопыт-Еконтроль)хК ,где Е опыт-оптическая плотность опытной пробы, Е контр.-оптическая плотность соответствующей контрольной пробы, К-коэффициент, рассчитанный по калибровочному графику. При активности фермента, превышающей 4 ммоль/(ч х л) или 1,112 мкмоль/(с х л), сыворотку крови рекомендуется развести физиологическим раствором и учесть степень разведения при расчете. Приложение 4 Методика определения уровня альфа-амилазы в сыворотки крови Состав набора: Реагент №1 – буфер Реагент №2 – концентрированный субстрат Реагент №3 – концентрированный раствор йода Реагент №4 – раствор фторида калия Реагент №5 – кислота соляная Подготовка реагентов к процедуре анализа: Рабочий раствор субстрата: смешать реагенты №1 и №2 в соотношение 24:1. Рабочий раствор йода: смешать дистиллированную воду, реагент №3 и реагент №4 в соотношении 7:1:2. Рабочий раствор соляной кислоты: развести содержимое флакона №5 дистиллированной водой в 16 раз. Ход определения:
Опытные и контрольную пробы фотометрировать против дистиллированной воды при длине волны 630 – 690 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 1 см. Активность альфы-амилазы выражается в единицах активности, которые определяются как: Количество крахмала (мг), гидролизованного 1 л биологической жидкости за 1 сек инкубации. Расчет активности альфы-амилазы в сыворотке/плазме крови проводить по формуле: (мг/с х л) =(Екон-Ео/Екон) х С х t х К или (Екон-Ео/Екон) х 66,6 где Еои Екон- экстинкция опытной и контрольной проб, измеренные относительно воды. С – коэффициент пересчета на 1 мг крахмала, t – коэффициент пересчета на 1 секунду инкубации К – коэффициент пересчета на 1 л жидкости. При соблюдении приведенных в инструкциях соотношений ( С х t х К)=66,6 Если результат определения активности альфа-амилазы превышает 1600 МЕ/л, то следует разбавить пробу физраствором (0,9% NaCl) в 2 раза и повторно провести измерение, а полученный результат умножить на 2. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||