лекция. Лекция 18 неделя. Лекция 18 неделя
 Скачать 1.21 Mb.
|
|
Лекция 18 неделя Репарация ДНК. Процесс восстановления исходной нативной структуры ДНК называют репарацией ДНК, или генетической репарацией, а системы, участвующие в нем - репарационными. В настоящее время известно несколько механизмов генетической репарации. Одни из них более просты и «включаются» сразу же после повреждения ДНК, другие требуют индукции большого числа ферментов, и их действие растянуто во времени. С позиций молекулярного механизма первичные повреждения в молекулах ДНК могут быть устранены тремя путями: 1. прямым возвращением к исходному состоянию; 2. вырезанием поврежденного участка и заменой его нормальным; 3. рекомбинационным восстановлением в обход поврежденного участка. По отношению к процессу репликации различают два основные типа репарации ДНК: дорепликативную(фотореактивация и эксцизионная форма пострепликативную(рекомбинационная) Спонтанные повреждения ДНК. Ошибки репликации (появление некомплементарных пар нуклеотидов) Апуринизация (отщепление азотистых оснований из нуклеотида) Дезаминирование (отщепление аминогруппы) Индуцированные повреждения ДНК Димеризация (сшивание соседних пиримидиновых оснований с образованием димера) Разрывы в ДНК: однонитевые и двунитевые Поперечные сшивки между нитями ДНК ТИПЫ ПОВРЕЖДЕНИЙ ДНК  ПРЯМАЯ РЕПАРАЦИЯ ДНК Этот тип репарации обеспечивает прямое восстановление исходной структуры ДНК или удаление повреждения. Широко распространенная система репарации такого рода — фотореактивация пиримидиновых димеров. Это пока единственная, известная ферментная реакция, в которой фактором активации служит не химическая энергия, а энергия видимого света. При этом активизируется фермент фотолиаза, которая разъединяет димеры. Фоторепарация Схематически световая репарация выглядит следующим образом: Нормальная молекула ДНК ↓ Облучение УФ-светом ↓ Мутантная молекула ДНК – образование пиримидиновых димеров. ↓ Действие видимого света ↓ Синтез фермента фотолиазы ↓ Расщепление димеров пиримидиновых оснований ↓ Восстановление нормальной структуры ДНК Световая репарация  РЕПАРАЦИЯ ДНК ЗА СЧЕТ ЭКЗОНУКЛЕАЗНОЙ АКТИВНОСТИ ДНК-ПОЛИМЕРАЗ Установлено, что большинство полимераз кроме 5'-3'-полимеразной активности имеют 3'-5'-экзонуклеазную активность, благодаря которой обеспечивается коррекция возможных ошибок. Эта коррекция осуществляется в два этапа: сначала идет проверка соответствия каждого нуклеотида матрице перед включением его в состав растущей цепи, а затем — перед включением в цепь следующего за ним нуклеотида. При встраивании неправильного нуклеотида двойная спираль деформируется. Это позволяет ДНК-полимеразе распознать в большинстве случаев дефект в растущей цепи. Если ошибочно встроенный нуклеотид не способен формировать водородную связь с комплементарным основанием, ДНК-полимераза приостановит процесс репликации до тех пор, пока нужный нуклеотид не встанет на его место. У эукариот ДНК-полимераза не обладает 3’-5’ экзонуклеазной активностью. РЕПАРАЦИЯ АЛКИЛИРУЮЩИХ ПОВРЕЖДЕНИЙ Генетические повреждения, вызываемые присоединением алкильных или метильных групп, могут репарироваться в результате удаления этих групп специфическими ферментами. Специфический фермент О6 -метилгуанин трансфераза распознает О6 - метилгуанин в ДНК и удаляет метильную группу и возвращает основание в исходную форму. ДЕЙСТВИЕ ПОЛИНУКЛЕОТИДЛИГАЗЫ Например, под действием ионизирующего облучения могут возникнуть однонитевые разрывы ДНК. Фермент полинуклеотидлигаза воссоединяет разорванные концы ДНК. ЭТАПЫ ЭКСЦИЗИОННОЙ РЕПАРАЦИИ 1. Узнавание повреждения ДНК эндонуклеазой 2. Инцизия (надрезание) цепи ДНК ферментом по обе стороны от повреждения 3. Эксцизия (вырезание и удаление) повреждения при помощи геликазы 4. Ресинтез: ДНК-полимераза застраивает брешь и лигаза соединяет концы ДНК  МИСМЭТЧ-РЕПАРАЦИЯ Во время репликации ДНК бывают ошибки спаривания, когда вместо комплементарных пар А-Т, Г-Ц образуются некомплементарные пары. Неправильное спаривание затрагивает только дочернюю цепь. Система репарации мисмэтч должна найти дочернюю цепь и произвести замену некомплементарных нуклеотидов. Как отличить дочернюю цепь от материнской? Оказывается, специальные ферменты метилазы присоединяют метильные группы к аденинам в последовательности ГАТЦ на материнскую цепь и она становится метилированной, в отличие неметилированной дочерней. У E.coli продукты 4-х генов отвечают за мисмэтч репарацию: mut S, mut L, mut H, mut U.  Мисмэтч репарацияПОСТРЕПЛИКАТИВНАЯ РЕПАРАЦИЯ ДНК Пострепликативная репарация осуществляется в тех случаях, когда повреждение доживает до фазы репликации (слишком много повреждений, или повреждение возникло непосредственно перед репликацией) или имеет такую природу, которая делает невозможным его исправление с помощью эксцизионной репарации (например, сшивка цепей ДНК). Эта система играет особенно важную роль у эукариот, обеспечивая возможность копирования даже с поврежденной матрицы (хотя и с увеличенным количеством ошибок). Одна из разновидностей этого типа репарации ДНК - рекомбинационная репарация. Рекомбинационная репарация  SOS -РЕПАРАЦИЯ Обнаружена в 1974 г. М.Радманом. Он дал название, включив в него международный сигнал бедствия. Включается тогда, когда повреждений в ДНК настолько много, что они угрожают жизни клетки. Индуцируется синтез белков, которые присоединяются к ДНК-полимеразе комплексу и строят дочернюю цепь ДНК напротив дефектной матричной. В результате ДНК удваивается с ошибкой и может произойти клеточное деление. Но если были задеты жизненно важные функции клетка погибнет. SOS - репарация  РЕПАРАЦИЯ ДНК И НАСЛЕДСТВЕННЫЕ БОЛЕЗНИ ЧЕЛОВЕКА Нарушение системы репарации у человека является причиной: Преждевременного старения Онкозаболеваний (80-90 % всех раковых заболеваний) Аутоиммунных заболеваний (ревматоидный артрит, СКВ, болезнь Альцгеймера) БОЛЕЗНИ, СВЯЗАННЫЕ С НАРУШЕНИЕМ РЕПАРАЦИИ Пигментная ксеродерма Атаксия-телеангиэктазия или синдром Луи-Бар Синдром Блума Трихотиодистрофия (ТТД) Синдром Коккейна Анемия Фанкони Прогерия детей (синдром Хатчинсона-Гилфорда) Прогерия взрослых (синдром Вернера) Пигментная ксеродерма Аутосомно-рецессивный тип наследования (А-Р) Повышенная чуствительность к (УФ) солнечному свету: пигментация, сухость кожи, язвы, рубцы. Есть неврологические симптомы, связанные с ранней гибелью нейронов. Нарушения эксцизионной репарации.  Атаксия-телеангиэктазия или синдром Луи-Бар: А-Р, мозжечковая атаксия, нарушение координации движений, телеангиэктазы – локальное чрезмерное расширение мелких сосудов, иммунодефицит, предрасположенность к онкозаболеваниям. Синдром Блума: А-Р, высокая чувствительность к УФ лучам, гиперпигментация, краснота на лице в виде бабочки. Трихотиодистрофия: А-Р, нехватка серы в клетках волос, ломкость, напоминают тигровый хвост, аномалии кожи, зубов, дефекты полового развития. Синдром Коккейна: А-Р, карликовость при норме гормонов роста, глухота, атрофия зрительного нерва, ускорение старения, чувствительны к солнечному свету. Анемия Фанкони: уменьшение кол-ва всех клеточных элементов крови, скелетные нарушения, микроцефалия, глухота. Причина- нарушение вырезания пиримидиновых димеров и нарушение репарации межцепочечных сшивок ДНК. Прогерия детей – синдром Хатчинсона-Гилфорда  Маленький рост Птичье лицо с клювообразным профилем Преобладание мозгового черепа над лицевым Выпадение бровей, ресниц Продожительность жизни -13 лет Причина: нарушение репарации, Сшивки ДНК Прогерия взрослых- синдром Вернера Симптомы старения проявляются после полового созревания: Седина, выпадение волос, морщины, гиперпигментация, сухость, голос утрачивает звонкость  |