Акушерстов курсоваяяяя. Лекция 2 методы оценки состояния плода
 Скачать 1.08 Mb.
|
|
НЕИНВАЗИВНЫЕ МЕТОДЫ КАРИОТИПИРОВАНИЯ ПЛОДА В последние годы, в связи с наличием осложнений при проведении инвазивных процедур, направленных на получение клеток плода для последующего непосредственного генетического исследования, возрастает интерес к новому неинвазивному подходу в пренатальной диагностике - исследованию клеток плода, находящихся в периферической крови беременных женщин. E. dayton, W. Feldhays в 1964 г. показали, что с ранних этапов нормально протекающей беременности происходит процесс трансплацентарного переноса плазмы, форменных элементов крови и трофобластов плода в кровеносное русло матери. Клетки миелоидного ряда (так называемой белой крови) и трофобласты могут депонироваться в кроветворных органах матери и персистировать в ее кровеносном русле в течение длительного времени после родов. Клетки эритроидного ростка (эритробласты плода) не сохраняются в организме матери и не должны присутствовать в крови взрослого здорового человека, поэтому эритробласты являются оптимальным объектом генетического исследования плода при неинвазивном подходе к пренатальной диагностике. Концентрация клеток плода в клетках крови матери очень низкая - одна ядерная клетка встречается среди 105-108 ядерных клеток крови матери. Это состояние материнского организма принято обозначать термином «микрохимеризм», наличие которого создает во время беременности определенную толерантность матери по отношению к развивающемуся плоду. Низкая концентрация клеток плода в крови матери требует для их использования в диагностических целях многоэтапных и высокочувствительных методов обогащения, выявления и анализа. В связи с тем, что фоновая частота соматических анэуплоидных кле- ток в нормальном организме человека не превышает 1-2%, обнаружение большего числа клеток с аномальным кариотипом позволяет диагностировать у плода хромосомную аберрацию.
В связи с абсолютной безопасностью данного метода для матери и плода исследователи проявляют к нему возрастающий интерес, так как при доказательстве его достоверности и надежности в перспективе этот подход можно рассматривать в качестве потенциального при проведении пренатальных генетических исследований. Наиболее часто применяемые методики включают в себя последовательное соблюдение нескольких этапов. Периферическую кровь матери предварительно центрифугируют в градиенте плотности и получают фракцию одноядерных клеток, обогащенную эритробластами плода. В дальнейшем сепарацию эритробластов плода проводят тремя методами: с использованием положительной проточной флюоресцентноактивированной клеточной сортировки (ФАКС) с моноклональными антителами CD71 и GPA, отрицательной магнитно-активированной клеточной сортировки (МАКС) с моноклональными антителами CD45 двухэтапного центрифугирования в двух градиентах плотности. Детекцию клеток плода осуществляют FISH-методом с Y-хромо- сомоспецифичным зондом, а также с ДНК-зондами на определенные центромерные участки хромосом. Несмотря на то, что клетки плода, присутствующие в крови беременных женщин, могут быть выделены всеми методиками, они значительно отличаются по трудоемкости, стоимости и воспроизводимости. В то же время многими исследователями отмечается значительная индивидуальная вариабельность концентрации клеток плода в крови матери. Кроме того, при попытках использовать клетки лимфоидного ряда плода была отмечена их способность депонироваться в кроветворных органах матери, делиться в них и персистировать в крови матери в течение длительного времени (до 27 лет) после родов. Это главная причина диагностических ошибок, в силу чего исследование лимфоцитов плода ограничено паритетом и возможно только при первой беременности у женщин. Убедительные результаты получены практически только для антенатального неинвазивного определения пола плода в случаях заболеваний, сцепленных с полом, при этом эффективность диагностики, по данным различных авторов, составила 87,5-100%.
Таким образом, несмотря на достаточно обширный спектр диагностических методов, применяемых в пренатальной диагностике, конкретные программы скрининга, проводимого в различных стра- нах, определяются конкретными медико-социальными, экономическими и юридическими факторами. До сих пор ряд методик относится к разряду экспериментальных, однако, независимо от региона, наиболее значимыми тенденциями в развитии пренатальной медицины являются меньшая инвазивность, большая информативность, максимально ранние сроки обследования и минимальный риск для плода. |