ИФА. Любой вариант ифа содержит 3 обязательные стадии
 Скачать 0.72 Mb.
|
|
Метод основан на специфическом связывании антитела с антигеном, при этом один из компонентов конъюгирован с ферментом, в результатереакции с соответствующим хромогенным субстратом образовывается окрашенный продукт, количество которого можно определить спектрофотометрически Любой вариант ИФА содержит 3 обязательные стадии: 1. стадия узнавания тестируемого соединения специфическим к нему антителом, что ведет к образованию иммунного комплекса; 2. стадия формирования связи конъюгата с иммунным комплексом или со свободными местами связывания; 3. стадия превращения ферментной метки в регистрируемый сигнал. В основу классификации методов ИФА положено несколько подходов: 1. По типу реагентов, присутствующих на первой стадии ИФА, различают конкурентный и неконкурентный методы. А) В конкурентном ИФА на первой стадии в системе присутствуют одновременно анализируемое соединение и его аналог, меченный ферментном и конкурирующий за центры специфического связывания с ним. Б) Для неконкурентных методов характерно присутствие в системе на первой стадии только анализируемого соединения и специфичных к нему центров связывания. 2. Все методы ИФА делются на гомогенные (всё в растворе) и гетерогенные (отделение из раствора). Анализ крови методом ИФА проводится в условиях специализированной лаборатории. Предварительно для его проведения забирается венозная кровь, обычно из локтевой вены в объеме 5-10 мл, которая затем отправляется в лабораторию. В среднем результат анализа можно получить уже на следующий день, что является важным моментом для скорейшего назначения лечения после установления диагноза заболевания. Для получения достоверных результатов исследования методом иммуноферментного анализа следует придерживаться несколько несложных подготовительных рекомендаций, к которым относятся: За день до сдачи анализа следует отказаться от употребления в пищу жирных продуктов питания (мясо, копчености) и алкоголя. Материал для исследования необходимо сдавать утром натощак. В день исследования желательно избегать физических и психоэмоциональных нагрузок. Перед исследованием необходимо постараться не курить. Результаты Повышение активности IgМ и отсутствие IgG – свидетельство недавнего инфицирования и острого течения инфекционного процесса. Повышение активности IgМ и IgG – обострение инфекционного процесса при его хроническом течении и давнем заражении. Высокая активность IgG и отсутствие IgМ – хроническое течение инфекционного процесса на фоне давнего заражения, после которого прошло более полугода (время, необходимое для образования антител класса IgG). Антигенами к ВИЧ являются p24, p15, p17, p31 и гликопротеины gp41, gp55, gp66, gp120, gp160 Преимущества: 1) небольшая стоимость, 2) высокая стабильность реагентов, 3) высокая чувствительность, 4) короткий срок проведения, 5) минимальное влияние человеческого фактора (но лучше провести в 2-ух учереждениях)  ИФА 4 поколения. Более точный, более широкий спектр концентраций, 60 дней на определение. Проводится платно + 250 проб. +ПЦР +тест Комбо (иммунный блотинг), если ИФА + или не даёт точного результата. Причины ложноположительного результата - хронические заболевания - длительные инфекционные заболевания - беременность Доп тест на вирусную нагрузку |