лекция. Методы изолирования. Методы очистки и концентрирования вытяжек из биоматериала
 Скачать 90.88 Kb.
|
СОВРЕМЕННЫЕ ОБЩИЕ И ЧАСТНЫЕ МЕТОДЫ ИЗОЛИРОВАНИЯ ВЕЩЕСТВ ИЗ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА. ДЕЛЕНИЕ «ЛЕКАРСТВЕННЫХ» ЯДОВ НА ПОДГРУППЫДля изолирования «лекарственных» ядов из биологического материала используют общие и частные методы. К общим методам изолирования принадлежат экстракция водой (метод Васильевой) или спиртом (метод Стаса-Отто), предварительно подкисленными щавелевой кислотой; экстракция амфифильными растворителями — ацетонитрилом (метод Сшедзинского) или ацетоном (метод Карташова). Широко внедрены в практику химико-токсикологического анализа методы экстракции «лекарственных» ядов водой или спиртом, подкисленными щавелевой кислотой. Методы экстракции амфифильными растворителями являются перспективными и имеют последующее развитие. Изолирование ядов экстракцией полярными растворителями включает такие этапы: 1. Подготовка образца к исследованию: измельчение органов трупа с помощью ножниц, мясорубки, гомогенизатора. 2. Взятие навески (1—100 граммов в зависимости от содержания ядовитого вещества в объекте и чувствительности методов исследования). 3. 2—3-разовая экстракция яда подкисленным растворителем или растворителем без подкисления. 4. Соединение, процеживание и центрифугирование экстракта. 5. Экстракция ядов из кислой водной фазы органическими растворителями — получение «кислой» хлороформной вытяжки. 6. Экстракция ядов из щелочной водной фазы органическими растворителями — получение «щелочной» хлороформной вытяжки. При использовании этанола как экстрагента предусмотрено осаждение белков абсолютным этанолом из концентрированной спиртной вытяжки со следующим фильтрованием вытяжки и разведением водой. При использовании ацетонитрила как экстрагента предусмотрено высаливание ядов, для чего к ацетонитрильной вытяжке добавляется раствор натрия сульфата перед экстракцией ядов неполярными или малополярными растворителями (гексаном, эфиром, хлороформом). При использовании ацетона как экстрагента примеси экстрагируются гексаном после разведения ацетоновой вытяжки раствором хлористоводородной кислоты. «Лекарственные» яды экстрагируются хлороформом или эфиром в присутствии высаливателя — натрия хлорида или натрия сульфата. Метод О.О. Васильевой не приемлем для анализа биологического материала, который поддался гнилостным изменениям, в связи с образованием стойких эмульсий на стадии экстракции веществ из водной вытяжки органическим растворителем и недостаточным очищениям экстрактов. Отмечен метод малопригодный для анализа барбитуратов и других веществ, плохо растворимых в подкисленной воде. Эти недостатки не имеют методы Стаса-Отто, Сшедзинского и В.А. Карташова. Однако метод изолирования подкисленной водой более дешев и безопасен, чем методы изолирования «лекарственных» ядов органическими экстрагентами, и применяется при исследовании лишь свежих 6иoлогических объектов. Частные методы изолирования нужны при направленном химико-токсикологическом анализе на определенную химическую группу ядов или индивидуальные вещества, учитывая их физико-химические особенности. Для изолирования барбитуратов из биологических объектов применяют метод Валова (экстракции водным раствором натрия гидроксида) и метод В.И. Поповой (экстракция водой, подкисленной серной кислотой, с последующим очищениям экстрактов от примесей методом гель-хроматографии). Для изолирования алкалоидов пользуются методом В.П. Крамаренко — экстракция водой, подкисленной серной кислотой. Для изолирования препаратов — производных фенотиазина — применяют метод Е.М. Саломатина (модификация метода Стаса-Отто: экстракция спиртом, подкисленным щавелевой кислотой) и модификации метода Сшеджинского (экстракция ацетонитрилом, подкисленным хлористоводородной кислотой). Изолирование метаболитов — производных 1,4-бензодиазепина — осуществляют методом Б.М. Изотова — экстракция бензофенона смесью хлороформа и пентанола (9 : 1) из гидролизата. При применении общих методов изолирования все «лекарственные» яды разделяются на две подгруппы: 1. Вещества, которые экстрагируются органическим растворителем из кислой водной среды, — «кислая» хлороформная вытяжка. В «кислую» хлороформную вытяжку попадают вещества кислого (салициловая кислота и ее производные, барбитураты), нейтрального (ноксирон, парацетамол), слабоосновного характера (алкалоиды, производные пурина, индола) и частично — средней основности (производные пиразолона, 1,4-бензодиазепина), что не дают стойкие соли с кислотами. 2. Вещества, которые экстрагируются органическим растворителем из щелочной водной среды, - «щелочная» хлороформная вытяжка. В «щелочную» хлороформную вытяжку попадают вещества основного характера (алкалоиды; синтетические препараты — производные фенотиазина, 1,4-бензодиазепина, пиразолона, п-аминобензойной кислоты). |