КОЛОК. Методы микробиологической диагностики инфекционных болезней бактериоскопический, бактериологический, биологический, серологический, аллергический и собственно иммунный. Их достоинства и недостатки
 Скачать 6.71 Mb.
|
|
Иммунопрофилактика  В качестве специфической профилактики предложены вакцины, содержащие полисахаридные антигены различных серогрупп, но они формируют лишь группоспецифический иммунитет. Лечение – антибиотики(б-лактамы, пенициллины, цефалоспорины.) 14. Возбудители раневой анаэробной инфекции: клостридии и бактероиды. Их классификация, характеристика биологических свойств, факторы патогенности. Патогенез раневой инфекции, методы лабораторной диагностики, специфическая профилактика и терапия. 15. Клостридии столбняка, классификация, свойства микробов, факторы патогенности, столбняк новорожденных. Лабораторная диагностика, специфическая профилактика и терапия столбняка. Анаэробная инфекция – инфекционное заболевание, вызываемое анаэробами, характеризующееся общей интоксикацией, некрозом тканей, их распадом. Обычно под анаэробной инфекцией понимают раневую инфекцию, однако анаэробы могут поражать любые органы и ткани. Анаэробная инфекция вызывается облигатными анаэробами, которые делят на две группы: бактерии, образующие споры (клостридии) бактерии, не образующие споры, или так называемые неклостридиальные анаэробы. ВОЗБУДИТЕЛЬ СТОЛБНЯКА Стобняк (tetanus) – тяжёлая раневая инфекция, вызываемая Clostridium tetani, характеризующаяся поражением нервной системы, приступами тонических и клонических судорог. Возбудитель столбняка открыт в 1884 г. Э. Николайером и С. Китазато. Морфология и культивирование Столбнячная палочка - строгий анаэроб, грамположительная, перетрих, образует споры Продуцирует сильный экзотоксин при выращивании на жидких питательных средах. На плотных питательных средах образует прозрачные и слегка сероватые колонии с шероховатой поверхностью. Не расщепляет углеводы, обладает протеолитическими свойствами Антигенная структура По Н-антигены выделяют 10 сероваров, О-антиген является общим у всех сероваров. Все серовары продуцируют однородный столбнячный экзотоксин Факторы патогенности Столбнячный токсин – основной фактор патогенности. Это белок около 150 кД, состоит из тетанолизина и тетаноспазмина, оказывающих гемолитическое и спастическое действие. К столбнячному токсину чувствительны человек, мыши, морские свинки, кролики и другие животные. Резистентность и экология C. tetani нормальный обитатель кишечника человека и животных, попадает в почву, где в виде спор может сохраняться десятилетиями. Споры устойчивы к дезинфектантам, при кипячении погибают через 50- 60 минут. Эпидемиология Столбняк распространён повсеместно, вызывает спорадическую заболеваемость с высокой летальностью Заражение происходит при попадании спор при ранениях (боевых, производственных, бытовых), обморожениях, ожогах, через операционные раны, при инфицировании пуповины (столбняк новорождённых). Больной не заразен для окружающих. Патогенез Главный патогенетический фактор – столбнячный токсин. Из места размножения возбудителя (рана) он распространяется по кровеносным, лимфатическим сосудам, нервным стволам, вызывая поражение нервной системы. Поражаются нервные окончания синапсов, секретирующие медиаторы (ацетилхолин и другие вещества), нарушая проведение импульсов по нервным волокнам. При столбняке поражается не только нервная система, в патологический процесс вовлекаются практически все системы организма. Столбнячный токсин – нейротоксин – блокирует синтез тормозных медиаторов Клиническая картина Инкубационный период составляет 6 -14 дней. У больных наблюдается спазм жевательных мышц, затруднённое глотание, напряжение мышц затылка, спины (туловище принимает дугообразное положение – опистотонус), судороги мышц всего тела, повышенная чувствительность к различным раздражителям. Заболевание протекает при повышенной температуре тела и ясном сознании. Иммунитет После перенесения инфекции иммунитет не вырабатывается. От матери к плоду передаётся непродолжительный пассивный антитоксический иммунитет. Микробиологическая диагностика При столбняке яркая типичная клиническая картина. Бактериологические исследования проводят редко и лишь для подтверждения клинического диагноза. Исследуют материал из раны, воспалительных очагов, кровь, секционный материал; с профилактичекой целью исследуют шовный и перевязочный материал. Биопроба на мышах – определяют токсигенность Лечение и профилактика Для лечения применяют противостолбнячную антитоксическую сыворотку (иммунизируют лошадей) или противостолбнячный иммуноглобулин человека Для профилактики проводят: хирургическую обработку раны, введение столбнячного анатоксина и человеческого противостолбнячного иммуноглобулина АКДС Антитела в синапсы не проникают! ВОЗБУДИТЕЛИ ГАЗОВОЙ ГАНГРЕНЫ Раневая инфекция, вызываемая бактериями рода Clostridium (C.perfringens, C.septicum, C.novyi, C.histolyticum и др.), называется газовой гангреной. Морфология и культивирование Грамположительные спорообразующие палочковидные бактерии, в поражённых тканях образуют капсулу Облигатные анаэробы Факторы патогенности Продуцируют экзотоксины, специфические для каждого вида, воздействующие на ЦНС, миокард, эритроциты (в результате гемолиза поражаются почки) Основной – α-токсин С.perfringens – мембранотоксин-лецитиназа Образуют ферменты агрессии – коллагеназу, протеазы, гиалуронидазу, дезоксирибонуклеазу, гемолизины Резистентность и экология Возбудители газовой гангрены являются нормальными обитателями кишечника человека и животных, споры с фекалиями попадают в окружающую среду, где сохраняют жизнеспособность десятилетиями. Споры возбудителя устойчивы к кипячению и дезинфектантам Эпидемиология Газовая гангрена распространена повсеместно, особенно часто регистрируется при массовых ранениях и травмах (войны, катастрофы) и несвоевременной хирургической обработке ран. Патогенез и клиническая картина Газовая гангрена развивается в результате попадания спор возбудителя в рану, особенно при наличии в ране некротизированных тканей, снижении резистентности организма. Вегетативные формы клостридий образуют токсины и ферменты, повреждающие ткани организма. Инкубационный период 1- 3 дня. Клиническая картина разнообразная и сводится к отёку, газообразованию в ране, нагноению с интоксикацией. Течение инфекции осложняет вторичная инфекция (стафилококки, протеи, кишечная палочка, бактероиды и др.) Распространяется по тканям. Если инфекция достигает ягодичной области, то невозможно помочь больному Высокая летальность Иммунитет Перенесённая инфекция не создаёт иммунитет. Ведущая роль принадлежит антитоксическому иммунитету Микробиологическая диагностика Исследуют кусочки поражённых тканей, раневое отделяемое, кровь. Проводят микроскопию. Бактериологические исследования проводят в анаэробных условиях; идентификация токсина с помощью РН на мышах с диагностическими противогангренозными антитоксическими сыворотками. Лечение и профилактика Лечение включает хирургическое иссечение всех омертвевших тканей, антибиотики широкого спектра действия и введение протвогангренозной антитоксической лечебную сыворотки. Профилактика – правильная хирургическая обработка ран, соблюдение асептики и антисептики при операциях; для активной иммунизации применяют анатоксины против газовой гангрены в составе секстаанатоксина (используется также для иммунизации лошадей), такая вакцинация проводится по специальным показаниям (военнослужащие, землекопы и др.) БАКТЕРИОИДЫ – неспорообразующие анаэробы Сем. Bacteroidaceae Род bacteroides B. fragilis, B. Melaninogenicus Свойства Полиморфные анаэробные Г- палочки (одиночные или попарные), спор нет, у некоторых есть капсула Растут медленно, на средах с кровью, яичным белком, тканевыми экстрактами Колонии мелкие, неправильной формы Ферментируют многие сахара, протеолитические свойства не выражены Антигенные свойства Антигенная структура по О – антигену вариабельна, мало изучена. Факторы патогенности: Эндотоксин Нейраминидаза Гиалуронидаза Фибринолизин Капсула Эпидемиология Обитают в кишечнике человека и животных, влагалище, мочевыводящих путях Патогенез Вызывают нагноение ран, ректальные абсцессы, аппендицит, перитонит, плеврит, гангрену легких, цистит, отит, сепсис. Вызывают гнойно-воспалительные заболевания, возникающие, в основном, как эндогенная инфекция. В ассоциациях с другими микроорганизмами встречаются при перитонитах, абсцессах брюшной полости, легких, циститах, инфекционных поражениях клапанов сердца. Диагностика . Исследуемый материал– кровь, гной и др. в зависимости от локализации. Методы диагностики: Микроскопический метод - грамотрицательные полиморфные палочки, располагающиеся поодиночке или парами. 2. Бактериологический метод. Выделение чистой культуры проводится в анаэробных или микроаэрофильных условиях. Посев проводится на плотную или жидкую среду КАБ, на тиогликолевые среды с гемином и витамином К. Учитывают культуральные, морфологические и тинкториальные свойства (см. выше). Производят пересев из подозрительных колоний на плотную среду КАБ для выделения чистой культуры. Идентифицируют по биохимическим свойствам, используя специальные тест-системы. Определяют чувствительность к антибиотикам. Лечение Специфическая профилактика и лечение не разработаны. 16. Коринебактерии, классификация. Характеристика биологических свойств возбудителя дифтерии, факторы патогенности, патогенез дифтерии. Иммунитет и методы его выявления. Лабораторная диагностика, специфическая профилактика и терапия. ДИФТЕРИЯ – острая инфекционная болезнь, вызывается токсигенными штаммами коринебактерий дифтерии. Передаётся воздушно-капельно и контактно. Характеризуется местным фибринозным воспаление чаще слизистых рото- и носоглотки. Явлениями общей интоксикации и поражением ССС, НС и выделительной системы. Повреждающее действие оказывает экзотоксин возбудителя (дифтерийный гистотоксин). КЛАССИФИКАЦИЯ Группа коринеформных бактерий Сем Corinebacteriacea Род Corinebacterium Вид C. diphtheriae (Corina – булавовидные) Условно-патогенные коринебактерии. К роду коринебактерий, помимо возбудителя дифтерии, относятся другие виды, способные при определённых условиях вызывать гнойно-воспалительные заболевания – C. pseudodiphtheriticum, C. hoffmanii, C. xerosis и т.д. Эти бактерии обитают там же, где возбудители дифтерии, - в зеве. На конъюнктиве, коже. МОРФОЛОГИЯ и ТИНКТОРИАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА Гр+полиморфные палочки, размер 1 – 6 мкм, располагаются под углом в виде V, L (у дифтероидов параллельно) Образуют скопления за счёт поверхностных липидов. Имеют зерна волютина (метахроматические гранулы) – полифосфаты, непостоянные включения (у дифтероидов по всей длине, постоянные, до 5шт) Метахромазия – неравномерное окрашивание клеток за счет зерен волютина. Зёрна волютина обнаруживают при окраске по методу Лёффлера (простая окраска, метиленовым синим) (темно-синие гранулы) и методу Нейссера (сложная) (чёрно-коричневые гранулы, палочка желтая). Спор, капсулу не образуют, неподвижные. Полиморфизм, расположение клеток под углом, наличие зёрен волютина, явление метахромазии – признаки дифференциально-диагностические. Хемоорганотрофы. Факультативные анаэробы. КУЛЬТУРАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА На простых питательных средах не растут, требуют среды, богатые белком (кровяная, сывороточная) Среда Ру (свёрнутая сыворотка) – элективная среда, высокая скорость роста, колонии формируются через 10 – 12 часов. Среда Клауберга (кровяной теллуритовый агар - КТА) - дифференциально-диагностическая среда, колонии дифтерийной палочки восстанавливают металлический теллурий и окрашиваются в серый или чёрный цвет. Характерный «шагреневый» рост. Кровяной агар (КА) – дают гемолиз. Теллурит калия подавляет рост сопутствующей микрофлоры  БИОЛОГИЧЕСКИЕ ВАРИАНТЫ C. diphtheriae, ИХ ХАРАКТЕРИСТИКА: • gravis – короткие палочки, зерен волютина мало, на КТА чёрные колонии, R- форма колоний (колонии с радиальной исчерченностью - “цветки маргаритки”), проба на цистиназу положительная, дают гемолиз на КА, ферментируют крахмал. Выделяются от больных с тяжёлыми формами дифтерии. • mitis - длинные палочки, зерен волютина много, S-форма колоний, чёрные или серые колонии, проба на цистиназу положительная, крахмал не ферментируют, гемолиз на КА не дают. Выделяются от больных с более лёгким течением болезни. • intermedius – длинные палочки, мало волютина, S- и R- форма колоний, проба на цистиназу положительная, крахмал не ферментируют, гемолиз на КА не дают . Этот биовар выделяется редко. • Внутри каждого биовара встречаются токсигенные и нетоксигенные штаммы. Токсигенные штаммы всех биоваров продуцируют идентичный экзотоксин. АНТИГЕНЫ Полисахариды клеточной стенки – дают перекрёсные реакции с микобактериями туберкулёза. Белковая микрокапсула (К-антиген) – определяют серовар, их более 10. Классификация по антигенной структуре недостаточно разработана, на практике не используется. ФАКТОРЫ ПАТОГЕННОСТИ • Дифтерийный гистотоксин – основной поражающий фактор, блокирует синтез белка, вызывает некроз тканей, общую интоксикацию. DLM на 1 кг массы тела человека составляет 100 нг (10-9 г). 0,001 мкг дифтерийного токсина вызывает видимую некротическую реакцию. Дифтерийный гистотоксин один из самых сильных ядов на Земле, по своей силе уступает лишь ботулиническому и столбнячному экзотоксинам. Дифтерийный гистотоксин обладает тропизмом к клеткам миокарда, нервным ганглиям, поражает ССС, кору надпочечников и почки. Токсигенные культуры дифтерийной палочки лизогенные (явление фаговой конверсии – геном фага). Дифтерию вызывают только токсигенные культуры дифтерийной палочки. Вызывает токсический миокардит, нефрит, поражение центров ЦНС, полиневриты • Белки микрокапсулы - адгезия во входных воротах инфекции: зев, гортань, трахея, реже нос, ухо, конъюнктива глаза, половые органы у девочек. • Липиды клеточной стенки и корд-фактор (димиколат трегалозы) – разрушают митохондрии, подавляют фагоцитоз. • Ферменты агрессии (нейраминидаза, гиалуронидаза, фибринолизин и др.)- колонизация и инвазия возбудителя во входных воротах инфекции. • Некроз тканей – ведёт к образованию биогенных аминов и общей интоксикации организма. ЭПИДЕМИОЛОГИЯ И УСТОЙЧИВОСТЬ В ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЕ • Источник инфекции – больной человек или носитель токсигенной культуры дифтерийной палочки. Выделяется в окружающую среду со слюной, плёнками. • Пути передачи - воздушно-капельный (основной), контактный (через предметы, игрушки), реже алиметарный (через инфицированные продукты, например, молоко). • Дифтерийная палочка в окружающей среде устойчива. Устойчива к высушиванию, на предметах окружающей среды сохраняет жизнеспособность до 5 месяцев. К дезинфектантам чувствительна. • Для дифтерии характерна сезонность заболевания – осенне-зимний период. Пики заболевания регистрируются каждые 7 – 9 лет. Цикличность характеризуется для всех инфекционных заболеваний. ПАТОГЕНЕЗ Заболевание развивается у лиц, не имеющих антитоксического иммунитета. Входные ворота инфекции – слизистые оболочки зева, носа, дыхательных путей и т.д. На месте входных ворот наблюдается фибринозное воспаление, образуется характерная дифтерическая (фибриновая) плёнка, которая с трудом отделяется от подлежащих тканей (по ней язвено-некротическая поверхность). Экзотоксин, выделяемый бактериями, попадает в кровь, в результате чего развивается токсинемия. Токсин поражает миокард, почки, надпочечники, нервную систему. КЛИНИЧЕСКАЯ КАРТИНА Существуют разнообразные по локализации формы дифтерии: дифтерия зева, носа, гортани, глаз, половых органов, кожи, ран и др. В 85 -90% случаев наблюдается дифтерия зева. Инкубационный период от 2 до 10 дней. Заболевание начинается с повышения температуры тела, появления боли при глотании, плёнки на миндалинах, увеличение лимфатических узлов. У взрослых дифтерия может протекать как лакунарная ангина. У детей раннего возраста нередко одновременно с зевом и носом в патологический процесс вовлекается гортань, и в результате отёка гортани развивается дифтерийный круп (истинный круп), который может привести к асфиксии и смерти. Другие тяжёлые осложнения, которые могут явиться причиной смерти, - токсический миокардит, острая недостаточность гипофизарно-надпочечниковой системы, паралич дыхательных мышц. ИММУНИТЕТ • Наиболее восприимчивы к дифтерии дети от 1 до 4 лет. • После перенесения дифтерии формируется антитоксический иммунитет, возможны повторные заболевания в 6 – 7% случаев. • Невосприимчивость к дифтерии зависит от содержания антитоксических антител в крови. Достаточно продолжительным является поствакцинальный иммунитет (до 3 – 5 лет). • Низкие уровни антимикробных антител (опсонины, преципитины, комплементсвязывающие), возможно, являются причиной формирования носительства. • В связи с массовой вакцинацией детского населения циркуляция токсигенных штаммов снижается, но наблюдается рост числа носителей нетоксигенных культур дифтерийной палочки. • Уровни антитоксических антител определяют в РНГА с эритроцитарным диагностикумом, нагруженным дифтерийным анатоксином. Титры антител 1:20 являются защитными. Ранее применяли реакцию Шика. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА • Микроскопический – дает предварительный результат. В окрашенных микроскопических препаратах обнаруживают палочки, имеющие типичную морфологию. Легко пропустить дифтерийную палочку. Материал – мазок или пленки • Бактериологический – основной. Принадлежность к роду коринебактерий определяют по морфологическим и культуральным свойствам, вид – по биохимическим свойствам (проба на цистиназу, неспособность расщеплять мочевину). Токсигенность определяют в реакции преципитации на питательном агаре. Изначально делают посев на Клауберге • Серологический – определяют наличие антитоксического иммунитета, ставят РПГА с сывороткой крови пациента и дифтерийным эритроцитарным диагностикумом – проба Шика • иммунологический ПРОФИЛАКТИКА И ЛЕЧЕНИЕ Основное значение в профилактике имеет активная иммунизация населения. В нашей стране трёхкратная иммунизация детей с 3-месячного возраста (до этого возраста у детей сохраняется плацентарный иммунитет) вакцинами АКДС (адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина – адсорбированные анатоксины на гидроокиси алюминия) или АДС (адсорбированный дифтерийно-столбнячный анатоксин). Вакцинация в 3,4,5 мес Ревакцинацию проводят с помощью АДС-анатоксина не только в детском возрасте (2,5,6,9,15 лет), но и взрослым людям каждые 10 лет (по желанию). При контакте с больным человеком людям, не имеющим напряжённого антитоксического иммунитета, вводят дифтерийный анатоксин (АД). Состав АКДС: анатоксины дифтер.+столбнячн, коклюшная – убитая вакцина Помимо данных препаратов, выпускают АКДС-М , АД-М – анатоксины, содержащие малое количество антигена и используют для иммунизации людей м предрасположенностью к аллергии, однако эти препараты являются менее иммуногенными. • Выявление и санация носителей антибиотиками. • Лечение дифтерии должно быть начато как можно раньше – не дожидаясь результатов микробиологического диагноза. Вводят антитоксическую противодифтерийную сыворотку (пассивный иммунитет). Серотерапия эффективна в ранние сроки, пока экзотоксин не связался с клетками-мишенями и ткани существенно не повреждены. Антибактериальная терапия антибиотиками (пенициллин, тетрациклины, эритромицин, сульфаниламидные препараты) Перед введением сыворотки обязательна аллергическая проба (1:10). Сыворотку вводить всегда, даже если реакция +, но при этом с мощной антиаллергической терапией Для профилактики проводят пробу Шика (вводят токсин 1/40 DLM морской свинки – через 48-72 часа воспаление при + реакции) : если -, то ввести сыворотку, затем вакцину. 17. Микобактерии, классификация, характеристика биологических свойств возбудителя туберкулеза, виды микобактерий, факторы патогенности. Иммунитет, его особенности, методы микробиологической диагностики, специфическая профилактика туберкулеза.  |