Исследование фекалий и их клиническое значение. Методические указания Екатеринбург, 2007 ббк 48р У745 удк 591Л49. 1 Исследование фекалий и их клиническое значение
 Скачать 6.56 Mb.
|
|
Таблица № 2. Остатки непереваренного корма у здоровых животных
Микроскопические исследования кала. Оно проводится с целью изучения переваривающей способности желудочно-кишечного тракта, для отыскания элементов патологического отделяемого кишечной стенки и при бактериологическом, и гельминтлогическом исследованиях. Для этого просматривают под микроскопом соответствующие препараты. При изучении переваривающей способности желудочно-кишечного тракта большое значение имеет определение кормовых остатков в кале, количество и характер которых зависят от отдельных компонентов корма и функционального состояния органов пищеварения. В нормальном кале больше всего должно быть детрита, т.е. не поддающихся распознаванию переваренных до неузнаваемости кормовых частиц, распавшихся клеток и микробов; детрит составляет основной фон при микроскопии кала, а на этом фоне распределяются самые разнообразные элементы, например распознаваемые остатки корма, слизь, форменные элементы крови, клетки эпителия и др. Чем полнее происходит переваривание, тем больше в кале детрита. Методика Для микроскопического исследования фекалий приготовляют по специальной методике ряд препаратов. Первый (нативный) препарат готовят следующим образом. На предметное стекло наносят 1—2 капли воды и растирают в ней с помощью стеклянной палочки небольшой комочек фекалий до получения равномерной эмульсии, которую покрывают покровным стеклом. Этот препарат рассматривают сначала под малым, а затем под средним, иногда под большим увеличением микроскопа. В препарате можно дифференцировать большинство элементов фекалий: растительную клетчатку, мышечные волокна, нейтральный жир, жирные кислоты, мала, лейкоциты, эритроциты, кишечный эпителий, слизь, кристаллы, яйца гельминтов простейшие. Второй препарат готовят аналогичным образом, но комочек фекалий растирают на предметном стекле не с водой, а с люголевским раствором двойной крепости. В таком препарате можно обнаружить крахмал, йодофильную микрофлору. Третий препарат готовят в виде эмульсин смешиванием комочка фекалий на предметном стекле с реактивом Саатгофа (10 мл спирта, 90 мл ледяной уксусной кислоты, Судана III для получения ярко-красной окраски). Этот препарат служит для обнаружения жира и продуктов его расщепления. Для дифференциации жировых элементов применяют также окраску препарата реактивом Гехта (смешивают перед употреблением равные объемы 1%-ного раствора нейтрального красного и 0,2%-ного раствора бриллиантового зеленого). Четвертый препарат готовят из видимых примесей, если они есть (слизистые образования, пленки и др.). До изучения первого препарата рекомендуется просмотреть препарат, изготовленный из комочка фекалий величиной с горошину, раздавленного до тонкого слоя между двумя предметными стеклами. В этом препарате сначала определяют количество кормовых остатков, состав которых зависит от отдельных компонентов корма и функционального состояния органов пищеварения, и также детрита. Из остатков растительного корма в кале можно распознать растительную клетчатку и крахмал. Различают два вида клетчатки -переваримую и непереваримую. Переваримая клетчатка содержится во всяком растительном корме, она состоит из клеток, имеющих нежное строение и тонкую оболочку, а после переваривания крахмала от клеток остаются только слабые очертания. В кале здоровых животных переваримая клетчатка отсутствует или содержится в виде единичных клеток или клеточных групп, наличие большого количества переваримой клетчатки в кале свидетельствует о недостаточности пищеварения. Непереваримая клетчатка под микроскопом распознается легко благодаря своим резким очертаниям, толстым двухконтурным оболочкам клеток, толстым межклеточным перегородкам. Анализ кала на присутствие о нем крахмала производится в препарате, обработанном люголевским раствором. Под влиянием йода крахмальные зерна в зависимости от стадии их переваривания окрашиваются по-разному: неизменный крахмал приобретает сине-черный цвет; продукты постепенного его расщепления — амилодекстрин — фиолетовый; эритродекстрин — красно-бурый; дальнейшие стадии расщепления, начиная с ахродекстрина, уже не окрашиваются йодом. Крахмал может находиться внутри клеток переваримой клетчатки и внеклеточно в виде зерен или осколков. При нормальном пищеварении крахмал в кале отсутствует; его присутствие в кале указывает на недостаточность пищеварения, что бывает преимущественно при заболеваниях тонкого отдела кишечника, протекающих с признаками ускоренной эвакуации его содержимого и при недостаточности поджелудочной железы. Из остатков мясного корма плотоядных и всеядных могут быть распознаны мышечные волокна и соединительная ткань. Мышечные волокна или их обрывки, не подвергшиеся действию пищеварительных ферментов, имеют поперечную исчерченность; по мере переваривания они теряют свою структуру. Появление большого количества мышечных волокон, особенно сохранивших поперечную исчерченность, свидетельствует о ферментативной недостаточности желудочного или панкреатического переваривания; то же относится и к соединительной ткани, которая обнаруживается в виде полупрозрачных волокнистых тяжей с нечеткими контурами. Нейтральный жир и продукты его расщепления отыскиваются как в нативных препаратах, так и в обработанных реактивом Саатгофа, а также реактивом Гехта. Нейтральный жир при нормальном пищеварении усваивается почти полностью. Неусвоенная часть жира выделяется преимущественно в виде мышц. Появление большого количества нейтрального жира в кале (стеаторея) может быть при недостатке липазы (нарушение функции поджелудочной железы), а также при недостаточном поступлении желчи в кишечник, которая активирует липазу, переводит жир в состояние тонкой эмульсин, более доступно действию ферментов. Обнаружение большого количества кристаллов жирных кислот в кале наблюдается при недостатке желчи, когда расщепление жиров происходит, но всасывание уменьшается. Наконец, обнаружение большого количества кристаллов жирных кислот и их мыл указывает на то, что процесс эмульгирования и переваривания жиров не нарушен, по нарушено всасывание, что наблюдается при энтеритах. Количественную оценку содержания всех жировых элементов в кале можно производить с реактивом Саатгофа в подогретом препарате, а отдельных видов жировых элементов - после остывания препарата. Те капли, которые в остывшем препарате не изменяют свою форму, относятся к нейтральным жирам (капли округлой формы, с гладкими очертаниями, оранжево-красного цвета), а те капли, которые после охлаждения сморщились и стали бугристыми, а также бесцветные кристаллы о виде тонких игл, заостренных с обоих концов, относятся к жирным кислотам. Мыла образуют мелкие ромбические кристаллы и желто-коричневые глыбки, не окрашивающиеся Суданом до нагревания препарата. По данным кафедры клинической диагностики Ленинградского ветеринарного института, у здоровых телят и поросят в возрасте 2—10 дней жировые элементы в подогретом препарате (с реактивом Саатгофа) представлены единичными жировыми каплями не в каждом поле зрения микроскопа; в остывшем препарате нейтральный жир отсутствует или содержится в очень небольшом количестве; жирные кислоты и мыла также содержатся в небольшом количестве (А. М. Смирнов, И. В. Никишина, В. П. Лаухин). У телят и поросят более старшего возраста количество жировых элементов заметно уменьшено. При диспепсии и гастроэнтероколите особенно при тяжелом их течении у телят и поросят, количество жировых элементов в кале резко возрастает, появляется в большом количество нейтральный жир, увеличивается содержание жирных кислот и мыл. У взрослых животных показатели количества жировых элементов в кале малоизученны. Методика. Жир в фекалиях выявляют в виде нейтрального жира, жирных кислот и мыл (соли жирных кислот), Жировые элементы определяют следующим образом: на предметном стекле небольшую частицу фекалий тщательно смешивают с реактивом Саатгофа краем покровного стекла. Препарат накрывают покровным стеклом и просматривают для определения нейтрального жира, который обнаруживают в виде оранжево-красных капель разного размера с гладкими краями. Затем препарат нагревают на спиртовке до кипения. После этого немедленно снимают пинцетом покровное стекло, собирают им на середину расплавившиеся капли, снова накрывают тем же покровным стеклом и исследуют под микроскопом в горячем виде и после остывания. В теплом препарате хорошо видны окрашенные в красный цвет жировые капли. Количественную оценку жировых элементов проводят в теплом препарате при малом увеличении (от 80 до 112 раз) по пятибалльной системе, огромное количество жировых капель во всех полях зрения оценивают пятью крестами (+++++). Количество жировых капель в теплом препарате характеризует содержание жировых элементов вообще. Отдельные их виды определяют в том же препарате, но после его остывания. Те капли, которые в остывшем препарате не изменяют свою форму, относятся к нейтральным жирам (капли округлой формы, или «лужицы», с гладкими очертаниями, оранжево-красного цвета), а те капли, которые после охлаждения сморщиваются и становятся бугристыми, а также остроконечные бесцветные кристаллы относятся к жирным кислотам и мылам. Кристаллы жирных кислот имеют форму тонких игл, заостренных с обоих концов, часто они группируются по 2-3-4 вместе, образуя небольшие кучки. Иногда такие иглы, располагаясь радикально, как бы венчиком, окружают капли жира или жирных кислот. Мыла обнаруживают в виде кристаллов и желто-коричневых глыбок, не окрашивающихся Суданом III до нагревания препарата. Кристаллы мыл короткие, по форме они напоминают вытянутые маленькие ромбики. Для более точной дифференциации вида жиров применяют также окраску препаратов реактивом Гехта, при этом нейтральный жир и жирные кислоты окрашиваются в коричневато-красный, а мыла - в зеленый цвет-Количественную оценку жировых элементов (нейтрального жира, жирных кислот и мыл) можно также производить в плюсовых единицах, т.е. учитывать, сколько из общего количества жира в препарате приходится на нейтральный жир, кислоты и мыла. У здоровых телят в возрасте от 2 до 10 дн. жировые элементы в теплом препарате (с реактивом Саатгофа) представлены единичными жировыми каплями, до 10 в поле зрения, нейтральный жир отсутствует или содержится в малом количестве, жирные кислоты и мыла имеются от небольших до средних количеств (А. М. Смирнов, И В. Никишина). У здоровых поросят до 10-дневного возраста жировые элементы в теплом препарате (с реактивом Саатгофа) обычно обнаруживают по 1-2-4 капли не в каждом поле зрения микроскопа, нейтральный жир отсутствует или содержится в небольшом количестве (В.П. Лаухин). К элементам, отделяемым кишечной стенкой, относятся, кроме слизи, лейкоциты, эритроциты, клетки кишечного эпителия и др, Слизь микроскопически представляется в виде гомогенной прозрачной массы или тяжей, о которой заложены различные форменные элементы (лейкоциты, эпителий и др.). Наличие большого количества слизи является признаком воспаления слизистой оболочки кишечника. Единичные клетки кишечного эпителия могут встречаться в нормальном кале, наличие больших групп этих клеток, обычно расположенных в слизи, является признаком воспаления слизистой оболочки кишечника. Лейкоциты в нормальном кале встречаются в единичных экземплярах, большие скопления лейкоцитов, лучше определяемые в слизи, свидетельствуют о воспалительном процессе о кишечнике. Эритроциты в норме в кале не встречаются, они обнаруживаются при язвах, кровотечениях, воспалениях. Элементы слизистой оболочки кишечника - слизь, эритроциты, лейкоциты, эпителиальные клетки, макрофаги, клетки злокачественных опухолей. Клеточные элементы обнаруживают в слизи. Для этого отобранные кусочки слизи ополаскивают в физиологическом растворе и готовят препараты. В препаратах, приготовленных из каловых масс, среди детрита трудно выявить клеточные элементы, так как многие полиморфные частицы детрита имеют сходство с лейкоцитами, эритроцитами и эпителиальными клетками. При недостаточном опыте нередко по таким препаратам дают ошибочное заключение о наличии клеточных элементом там, где их нет. Слизь имеет вид светлых тяжей, клеточные элементы на фоне ее хорошо различимы. В норме при микроскопии редко обнаруживается связь с единичными эпителиальными клетками и лейкоцитами. Количество слизи увеличивается при заболеваниях кишечника (колит, дизентерия, язвенные процессы и др). Клетки цилиндрического эпителия имеют удлиненную фор), несколько расширенную с одного конца, с овальным крупным ядром. Клетки располагаются в слизи в виде одиночно рассеянных экземпляров или же скоплениями и пластами. В них почти всегда выражены дегенеративные изменения: зернистость, вакуолизация, разбухание, в результате чего клетки округляются. В большом количестве они обнаруживаются при острых воспалительных процессах, особенно катаральных, полилозе кишечника, опухолевых процессах. Лейкоциты, расположенные и СЛИЗИ группами и тяжами, большими скоплениями, указывают на воспалительные процессы кишечника. Обнаруживаются при дизентерии, амебиозе, язвенном колите, туберкулезе кишечника. Чаше лейкоциты представлены нейтрофилами. Эозинофилы в виде единичных клеток могут находиться среди нейтрофилов. Различают их по обильной равномерной зернистости, занимающей всю клетку, и более темной окраске. Эозинофилы, если их много, как правило, распределяются в слизи неравномерно, скоплениями. Они в больших количествах обнаруживаются при амебиозе и балантидиозе (наряду с кристаллами Шарко—Лейдена), гельминтозах и инвазиях другими кишечными простейшими, при аллергических состояниях. Макрофаги, полибласты, плазматические клетки различить в нативном препарате невозможно. При необходимости цитологического исследования дифференцировка их производится в препаратах, приготовленных в виде тонких мазков-отпечатков со слизистой оболочки и окрашенных по Романовскому. При цитологическом исследовании препаратов можно судить о наличии острого воспалительного процесса (в препаратах нейтрофилы и эритроциты, макрофаги) и хронического воспалительного процесса (лимфоциты, нейтрофилы, полибласты, плазматические клетки). Эритроциты неизменные в виде желтоватых дисков в норме не встречаются. Обнаруживаются в кале при язвенных, воспалительных процессах, распаде опухолей и прочих поражениях толстого кишечника. При кровотечениях из более высоких отделов кишечника эритроциты разрушаются. В таких случаях вопрос о присутствии эритроцитов (крови) решается путем химической реакции на скрытую кровь. Клетки злокачественных опухолей находят в препаратах, приготовленных с тампона или смывов со стенки кишечника, взятых при ректороманоскопии. Необходимо также использовать для цитологического исследования материал (слизисто-кровянистые массы), оставшийся на ректоскопе или на пальцах перчаток при пальцевом обследовании кишечника. Если свежевыделенный кал доставлен с примесью слизисто-кровяных масс, то его промывают в физиологическом растворе и готовят нативные препараты. Тканевые обрывки иногда встречаются при хронической инвагинации кишечника, дифтеритическом и крупозном его воспалении. Из кристаллических образований в кале встречаются трипельфосфаты, оксалаты, холестерин, кристаллы билирубина и др. Кристаллические образования. Кристаллы трипельфосфатов (фосфорно-кислая аммиак-магнезия). Образование их связано с распадом лецитина, нуклеина, в присутствии аммиака как продукта гниения белков и солей пищевого магния. Щавелевокислая известь (оксалаты кальции) встречается в кале при употреблении в пишу большого количества овощей. В норме соляная кислота желудка превращает оксалаты кальция в хлористый кальций. Присутствие их в кале может служить признаком понижения кислотности желудочного сока. Кристаллы Шарко-Лейдена имеют форму вытянутого ромба. В кале могут служить указанием на наличие гельминтов и кишечных простейших (при амебиозе, балантидиозе и др.). Чаще встречаются в слизи в сочетании с эозинофилами. Обнаружение их указывает также на аллергический процесс в кишечнике. Кристаллы билирубина могут быть в сличи жидких испражений при профузных поносах. Кристаллы гематоидина встречаются в кале после кровотечений и могут быть обнаружены в некротизированных тканевых клочках, например, при язвенных колитах. Нерастворимые лекарственные препараты в кале: 1) сернокислый барий - мельчайшие крупинки серого цвета; 2) висмут -темно-бурые; почти черные прямоугольники, ромбы и бруски, 3) карболен - черные, угловатой неправильной формы частицы. Бактериологическое исследование кала. Это исследование производится главным образом при инфекционных болезнях. Методика его описана в специальных руководствах. Одним из звеньев копрологического исследования является применение метода бактериоскопии, т. е. изучение флоры в окрашенном мазке под микроскопом. Это исследование имеет лишь относительное значение, так как большинство обнаруженных этим методом микробов не поддается дифференциации. Применяемые дифференциальные окраски дают возможность только отличить граммположительную, граммотрицательную, йодофильную, кислоустойчивую флору. В окрашенных по Граму мазках у здоровых телят и порося грамположительная микрофлора составляет 60-70-90%, грамотрицательная—соответственно 40-30-10 %. При простой диспепсии количество грамотрицательной микрофлоры резко увеличивается и составляет 50-80 %, при токсической диспепсии - 80-90%, а грамотрицательной микрофлоры соответственно уменьшено (А. М. Смирнов, В. М. Подкопаев, В. П. Лаухин и др.). В окрашенных раствором Люголя мазках йодофильная микрофлора имеет синий, фиолетовый или черный цвет, дрожжевые грибки - желтый или желто-коричневый. Большое количество йодофильной флоры в кале обнаруживают при недостаточном усвоении углеводов, при усиленных процессах брожения в кишечнике. Значительное количество дрожжевых клеток наблюдается при кандидомикозе и дисбактериозе. Большое значение имеет определение чувствительности микрофлоры кала к антибиотикам и другим антибактериальным средствам. Дрожжевые клетки чаще овальной или круглой формы, располагаются кучками или в виде почкующихся форм. В нормальном кале могут быть в небольшом количестве. Большое количество указывает на несвежесть испражнений, так как в этих случаях размножается плесневый гриб. В патологии увеличение гриба в виде почкующихся форм и нитей мицелия наблюдается при кандидамикозах и дисбактериозах. |