Исследование фекалий и их клиническое значение. Методические указания Екатеринбург, 2007 ббк 48р У745 удк 591Л49. 1 Исследование фекалий и их клиническое значение
 Скачать 6.56 Mb.
|
|
Расчет. Количество единиц фосфатазы в 1 г исследуемого материала по формуле: Е=Р/а , где а - количество разведенной вытяжки в пробирке со стандартной окраской, Р - предварительное разведение материала. Клиническое значение. В фекалиях здоровых взрослых людей щелочная фосфатаза содержится в количестве до 450 ед/г. Увеличение ее в фекалиях, так же как и увеличение содержания энтерокиназы, связано с изменением функции толстых кишок и деятельности микрофлоры. При кишечных заболеваниях иногда отмечают 1500-3000 ед/г щелочной фосфатазы. Повышение количества этих ферментов указывают на более тяжелые нарушения функции кишечника. У детей содержание щелочной фосфатазы в фекалиях выше, чем у взрослых. У новорожденных оно составляет в среднем 4500 ед/г, у детей в возрасте около года - 5000-20000, в среднем 12000 ед/г, далее оно уменьшается и в возрасте 10-12 лет находится на том же уровне, что и у взрослых. Определение энтерокиназы ( по Г.К. Шлыгину ). Энтерокиназа - специфический кишечный фермент, вырабатываемый слизистой оболочкой тонких кишок, катализирующий превращение трипсиногена в трипсин. Принцип. В основу метода положено активирование энтерокиназой неочищенного препарата трипсиногена. Способность воздействовать на трипсиноген в его естественном виде в присутствии ингибитора трипсина за короткое время - несколько десятков минут -является специфическим проявлением действия энтерокиназы. Активирование проводят в стандартных условиях с использованием ряда возрастающих разведений исследуемого материала. Находят максимальное разведение материала, которое еще обусловливает определенную интенсивность действия энтерокиназы: вызывает триптическую активность, достаточную для переваривания казеина, в отличие от его створаживания. Реактивы. 1. Препараты трипсиногена (сухой препарат поджелудочной железы коров, специально приготовленный для данной цели) выпускаются Московским мясокомбинатом, могут быть приготовлены в лаборатории. 2. Очищенный казеин готовят путем двукратного растворения в аммиаке (без нагревания) и осаждения уксусной кислотой. 3. 0,2 М фосфатный буфер (рН 7,16): смесь 3 объемных частей 0,2 М КН2РО4 и 7 частей 0,2 М Nа2НРО4. 4. 0,7 н аммиачный буфер рН 8,9: смесь 1 объемной части 0,7 н раствора аммиака (проверенного титрометрически) с 4 частями 0,7 н раствора NH4С1. Буфер можно хранить 1-2 недели. 5. 5% раствор казеина, содержащий кальций. Готовят каждый раз в день проведения определения. На одно определение энтерокиназы требуется 0,75-1 г очищенного казеина (указанного выше). На 1 г казеина берут 11 мл 1,15% раствора молочнокислого кальция и 9 мл 0,1 н раствора аммиака (проверенного титрометрически). Казеин заливают раствором молочнокислого кальция, тщательно перемешивают, добавляют аммиак и после растворения казеина раствор помещают на холод при температуре от 0 до 4°С Оборудование. 1. Цилиндрической формы бюксы диаметром 2,5 см (несколько десятков). 2. Черные фотографические кюветы. 3. Пипетки, калиброванные на 2 мл с выдуванием. 4. Центрифуга 2500-3000 об/мин. 5. Термостат. 6. Торсионные весы. 7. Ступки. Ход определения. Готовят водную вытяжку фекалий (1:10) путем растирания их в ступке с кварцевым песком или измельченным стеклом при постепенном добавлении воды. Спустя 30 мин. осадок отделяют центрифугированием; если вытяжка имеет кислую реакцию на лакмус, ее нейтрализуют добавлением аммиака и затем разводят водой вдвое (разведение материала 1:20). Если ожидают высокое содержание энтерокиназы, разводят еще в 10 раз (1:200), иногда даже в 100 раз (1:1000). В 7-10 бюксах готовят ряд геометрически возрастающих разведений так, что количество исследуемого материала убывает на 1/3 в каждом последующем сосуде по сравнению с предыдущим. Для этого во все бюксы, кроме первого, наливают по 1 мл дистилированной воды, в первый наливают 1 мл разведенной вытяжки. Путем двукратного набирания в пипетку и обратного выдувания вытяжку перемешивают с содержащейся во втором бюксе водой. Из второго бюкса 2 мл смеси переносят в третий, где таким же образом перемешивают, снова переносят в следующий бюкс и т. д. Из последнего бюкса 2 мл смеси отбрасывают. Во все бюксы прибавляют по 2 капли раствора фосфата рН 7,16 (реактив №3) и по 0,03 г препарата трипсиногена (реактив №1). Навески препарата по 0,03 г в нужном количестве подготовляют еще до начала определения, Удобно пользоваться для этого торсионными весами. После прибавления препарата, смеси взбалтывают и помещают для активирования в термостат на час при 37°С. После этого во все сосуды быстро прибавляют по 0,5 мл 0,7 н аммиачного буфера рН 8,9 (реактив №4) и по 2 мл 5% раствора казеина, содержащего кальций (реактив №5), взбалтывают, переставляют на нагретую в термостате подставку с темным дном и вновь инкубируют при 37°С в течение 10 мин, после чего регистрируют результат. При надлежащем предварительном разведении материала казеин в нескольких бюксах с большим содержанием энтерокиназы оказывается переваренным, а в других - створоженным, что легко различимо невооруженным глазом. Регистрируют последнюю переваренную порцию, содержание энтерокиназы в которой равно одной условно принятой единице. Отсюда простой расчет дает содержание этого фермента в I мл или I г первоначально взятого исследуемого материала: Е=Р/а , где а -количество разведенной вытяжки в последней переваренной порции; Р - предварительное разведение. Возможная ошибка таких определений равняется 1/6- 1/4 находимого количества единиц. Клиническое значение. В фекалиях здоровых взрослых людей содержится от следов до 20 ед/г энтерокиназы. Характер (до 10 дней) пищи мало влияет на содержание фермента, только после очень резкого изменения диеты на 2-3-й день оно может быть несколько повышено -50-60 ед/г. Концентрация энтерокиназы зависит главным образом от состояния функции толстых кишок и деятельности нормальной кишечной микрофлоры. При их нарушении находят 200 ед/г и более, а при острых кишечных заболеваниях с диареей - до 2000-3000 ед/г. У детей первых 2 лет жизни в норме высокое содержание энтерокиназы в фекалиях, в возрасте около года - 700-800 ед/г. КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ КОПРОГРАММЫ Копрологические синдромы патологических состоянии органов пищеварения При нарушении функции различных отделов желудочно-кишечного тракта появляются характерные изменения кала, получившие название копрологических синдромов, которые приводятся ниже Недостаточность жевания проявляется наличием в кале большого количества непереваренных частиц корма (зерна овса, стебли растений у травоядных; куски мяса, жира, пленки соединительной ткани у плотоядных животных). Недостаточность желчеотделения проявляется следующими признаками: цвет кала белый , глинистый, серовато-белый, что особенно хорошо заметно у молодняка молочного возраста, при этом реакция на билирубин и стеркобилин отрицательная или слабоположительная; в кале у телят молочников в большом количестве появляются жирные кислоты; мыла и нейтральный жир обнаруживаются в небольшом количестве; количество же аммиака увеличивается примерно в два раза при нормальном содержании органических кислот; консистенция кала чаще мазевидная, его запах зловонный, реакция кислая, часто щелочная вследствие вторичных гнилостных процессов. Недостаточность панкреатического сокоотделения характеризуется тем, что кал у телят - молочников неоформленный, чаще мазевидной консистенции; запах кала гнилостный, реакция чаще щелочная. Из жировых элементов резко увеличено количество нейтрального жира; жирные кислоты и мыла содержатся в незначительном количестве или отсутствуют. Количество аммиака в кале резко увеличено при незначительном повышении органических кислот в нем. Недостаточность переваривания в тонком кишечнике сопровождается следующими признаками: консистенция кала у телят жидкая, его цвет желтый, запах слабогнилостный, реакция слабощелочная; в кале в большом количестве обнаруживаются нейтральный жир, жирные кислоты и мыла; количество аммиака и органических кислот в кале может быть не увеличено при диарее, но соотношение между ними изменено в сторону щелочности. Недостаточность переваривания в толстом кишечнике проявляется следующими признаками: при преобладании процессов брожения консистенция кала кашицеобразная, часто пенистая из-за обилия пузырьков газа, цвет кала желтый, запах кислый, реакция его кислая; количество органических кислот резко увеличено и несколько уменьшено количество аммиака; реакция на растворимый белок чаще положительная; нейтральный жир в кале отсутствует или встречается в очень небольшом количестве; количество мыл и жирных кислот незначительно; много встречается переваримой клетчатки, крахмала и йодофильной флоры; при преобладании процессов гниения в кишечнике кал жидкий, темно-коричневый, гнилостного запаха, щелочной реакции; количество аммиака в нем резко повышено; реакция на растворимый белок чаще положительная; нейтральный жир обычно отсутствует; количество мыл и жирных кислот незначительно; количество переваримой клетчатки иногда значительно. Воспаление кишечника сопровождается появлением в кале примеси слизи, крови, гноя. При микроскопическом исследовании кала обнаруживают большое количество лейкоцитов в слизи, цилиндрический эпителий, иногда пластами, в некоторых случаях находят эритроциты. Часто выявляется «скрытая» кровь, реакция Трибуле-Вишнякова всегда резко положительная (А.М.Смирнов, И.В. Никишина) Клинический опыт показывает, что могут встречаться как изолированные формы перечисленных расстройств, так и различные их сочетания, при этом некоторые копрологические синдромы являются ведущими при постановке диагноза. Результаты исследования кала следует выражать в виде,так называемой копрограммы, по которой легче изучить патологические сдвиги органов пищеварения. Таким образом, диагностика болезней пищеварительной системы основывается на синтезе полученных фактических данных - симптомов, полученных при общих, инструментальных и лабораторных -методах исследовании больного животного. Список использованной литературы 1. Анохин Б.М. Клинико-лабораторная диагностика болезней органов пищеварения у телят. - Воронеж, 1980. 2. Богер М.М. Методы исследования поджелудочной железы.-Издательство «Наука», Сибирское отделение, Новосибирск,1982. 3. Бочаров И.А. Патология и терапия внутренних незаразных болезней сельскохозяйственных животных с основами диагностики. - Государственное издательство сельскохозяйственной литературы - М., Л., 1954. 4. Жарков А.Д. Диагностика болезней органов пищеварения у овец и их краткая характеристика. Учебное пособие. - Воронеж, 1993. 5. Клиническая диагностика внутренних незаразных болезней животных /А.М.Смирнов, П.Я.Конопелько, Р.П.Пушкарев и др. - М., Агропромиздат, 1988. 6. Клиническая диагностика внутренних незаразных болезней сельскохозяйственных животных /А.М.Смирнов, П.Я.Конопелько, В.С.Постников и др.-Л., Колос, 1981. 7. Лабораторные методы исследования в клинике; Справочник /Меньшиков В.В., Делекторская Л.Н.,Золотницкая Р.П. и др.:Под ред. В.В.Меньшикова. - М.: Медицина, 1987. 8. Ленец И.А. Диагностика незаразных болезней животных с применением вычислительной техники. - М., Агропромиздат, 1989. 9. Практикум по диагностике внутренних незаразных болезней сельскохозяйственных животных /А.М.Смирнов, И.М.Беляков, Г.Л.Дугин и др. - М., Агропромнздат, 1985. 10.Практикум по клинической диагностике с рентгенологией /Беляков И.М., Дугин ГЛ., Кондратьев В.С. и др. - М., Колос, 1992. 11.Пропедевтика внутренних болезней /Под ред. В.Х.Василенко, А.Л.Гребенева, Н.Д.Мнхайловой. - М.: Медицина, 1974. 12.Руководство по клинической лабораторной диагностике /Под ред. В.В.Меньшикова. - М.Медицина, 1982. 13.Синев А.В. Клиническая диагностика внутренних болезней домашних животных. - М., ОГИЗ, Сельхозгиз, 1946. 14.Справочник по клиническим лабораторным методам исследования /Под ред. проф, Е.А.Кост. - М.: Медицина, 1975. Приложение 1.
Оглавление Введение……3 Получение и хранение фекалий …4 Физические свойства фекалий….. 4 Микроскопические исследования кала…. 8 Бактериологическое исследование кала….. 14 Химическое исследование кала….. 17 Копрологические синдромы патологических состояний органов пищеварения…… .26 Приложение 1……… 27 Список использованной литературы……. 28 Исследование фекалий и их клиническое значение. Методические указания. Составитель Вера Михайловна Усевич ЛР № 020769 от 20.04.98 г. Подписано в печать Формат 60x84 1 /16 Бумага Печать Тираж экз. Уч. - из. /1.-2 Заказ |