|
методичка. Методические указания к лабораторнопрактическим занятиям по ветеринарной токсикологии Москва2005
Лабораторная работа
Работа № 1
Токсическое действие ФОС на кролика и лечение отравления.
Материальное обеспечение работы.
Кролик-1
Шприцы с иглами на 5 мл -2
Вата
Спирт 96% - 50мл
10% раствор хлорофоса -1 Омл (или 10% раствор карбофоса -1 Омл)
0,1% раствор атропина сульфата -10мл
Линейка
Фонендоскоп.
Ход опыта.
Оценить исходное состояние кролика по тестам (см.таблицу №5). Протокол опыта
| | | | Атропин на фоне хлорофоса
| | | | | | | | | | ЦНС (возбуждение, угнетение)
| | | | | | | | | Рефлексы (усиление, ослабление)
| | | | | | | | | Тремор, судороги (есть, нет)
| | | | | | | | | | | | | | | | | | Саливация (усиление, угнетение)
| | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | Дыхание (дых. движений /мин.)
| | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | Ввести под кожу 10% раствор хлорофоса в дозе 500 мг/кг (LD5o хлорофоса =540 мг/кг внутрь для мышей). Подбор дозы провести по содержанию Д.В. в препарате хлорофоса и в зависимости от индивидуальной чувствительности животного.
В течение 30 минут наблюдать за состоянием животного по тем же тестам.
На максимуме клинического проявления отравления ввести внутривенно атропина сульфат в дозе 5мг/кг (1мл 0\1% раствора на 1кг массы).
В зависимости от тяжести состояния ввести препараты патогенетической и симптоматической терапии:
Сульфокамфорокаин внутривенно в дозе 10 мг/кг.
Тиамина бромид внутримышечно в дозе 1 мг/кг.
Кальция хлорид внутривенно в дозе 50 мг/кг.
Кислоту аскорбиновую подкожно или внутримышечно в дозе 1 мг/кг.
Глюкозу внутривенно в дозе-500 мг/кг.
Объяснить механизм наблюдаемых изменений состояния животного под действием хлорофоса и атропина.
Работа №2.
Ферментный метод определения фосфорорганических пестицидов в
патологическом материале. Материальное оснащение: баня водяная, термометр химический до 100° С, пробирки, колбы мерные на 100 и 50 мл, пипетки по 0,2-10мл отдельно для каждого реактива, склянки с притертыми пробками, химические стаканы, весы, вата.
Принцип метода. В основу метода лежит способность фосфорорганических соединений (ФОС) угнетать холинэстеразу. Основное значение этого фермента- разложение избытка ацетилхолина на холин и уксусную кислоту. Последняя в ходе реакции изменяет окраску индикатора бромтимолового синего до зеленого цвета. При угнетении фермента замедляется расщепление ацетилхолина, и образование уксусной кислоты в реакционной смеси происходит в течение длительного времени, что устанавливают по скорости изменения окраски индикатора.
О наличии пестицидов в пробе судят по степени угнетения активности холинэстеразы, выраженной в процентах. Расчет проводят по калибровочному графику. Чувствительность метода 0,1мг/кг анализируемого продукта. Точность метода 80%. Метод рекомендуется для определения хлорофоса, метафоса, карбофоса, трихлорметафоса -3, метилнитрофоса, метилмеркапто-фоса, ДДФВ и диброма в органах и тканях животных.
Подготовка материала к исследованию. Исследуемый материал тщательно измельчают, после чего навеску в 20-30 г. помещают в стаканчик с притертой пробкой, заливают адекватным количеством хлороформа (20-3Омл), закрывают пробкой и экстрагируют в течении часа при периодическом встряхивании. Затем пипеткой, нижний конец которой обернут ватой, набирают 1мл хлороформенного экстракта и переносят в пробирку (или химический стаканчик). В другую контрольную пробирку ( или химический стаканчик) вносят 1мл хлороформа. Обе пробирки помещают на водяную баню при температуре не выше 40° С или под струю воздуха до полного испарения хлороформа. К сухому остатку в обе пробирки добавляют 1мл дистиллированной воды и снова помещают пробирки на водяную баню на 3 минуты. После этого охлаждают до комнатной температуры.
Ход опыта. В опытную(№1) и контрольную (№2) пробирки вносят по 1 мл раствора холинэстеразы или сыворотки крови лошади. Затем в пробирку №1 добавляют экстракт из патматериала, -а в пробирку №2 дистиллированную воду. Содержимое хорошо перемешивают и ставят на водяную баню при температуре 39-40°С на ЗОмин. По истечении этого времени в пробирку №3 вносят 0,5мл содержимого из опытной пробирки №1, а в контрольную пробирку (№4) — 0,5мл из контрольной (№2). В каждую пробирку приливают по 4,5мл раствора №3 и сразу отмечают время начала реакции. Затем в отдельную пробирку №5 помещают 0,5мл содержимого из контрольной пробирки (№2) и добавляют
4,5мл раствора №2. Эта пробирка является колометрическим стандартом (см. схему). В дальнейшем отмечают время уравнения (в минутах) цвета жидкости в опытной и контрольной пробирках с цветом колометрического стандарта. Процент угнетения активности холинэстеразы вычисляют по формуле/
где X -угнетение активности холинэстеразы, %;
В - время уравнения цвета жидкости в контрольных пробирках с цветом В - время уравнения цвета жидкости в опытных пробирках с цветом стандарта.
Схема определения активности холинэстеразы
| | | | | | | Экстракт из патологического материала
| | | | | | | | | | | | Сыворотка крови лошади 1 :3
| | | | | | Инкубация при 40°С в течение ЗОмин.
| | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | Инкубация при 38-39°С до уравнения цвета
| | | | | | Угнетение активности холинэстеразы на 10% и более свидетельствует о наличии ФОС в исследуемом материале.
Количественное определение ФОС проводят по калибровочному графику, построенному по препарату, наличие которого предполагается в исследуемом материале. Если подозревается неизвестное ФОС, то калибровочный график строят по одному из ядохимикатов перечисленных выше. Для этого необходимо иметь химически чистое вещество или препарат с известным содержанием активно действующего вещества (ДВ). Из заведомо чистого образца исследуемого материала (мышцы, орган или другой образец) в склянки с притертыми пробками берут 5 навесок по 1 г. и вносят в них соответственно 1,0; 5,0; 10,0; 20,0; 50,0 мкг по ДВ. Через ЗОминут каждую навеску заливают 10мл хлороформа и экстрагируют один час. Хлороформенные экстракты исследуют в описанном выше порядке. По оси ординат откладывают процент угнетения активности холинэстеразы в каждой пробе, а по оси абсцисс -количество препарата (в мг/кг) по ДВ. Зависимость процента угнетения активности холинэстеразы от концентрации ФОС в исследуемом материале (примерный калибровочный график) представлена в таблице.
Угнетение активности холинэстеразы в зависимости от содержания хлорофоса в молоке (мг/л)
Концентрация хлорофоса, мг/л
| Угнетение активности холинэстеразы, %
| | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | |
t
' 1. С какой целью ФОС применяются в сельском хозяйстве?
| 1.3. Акарициды 1.4. Дефолианты
| 2. Какие препараты относятся к ФОС контактного действия?
| Хлорофос
Карбофос
Меркаптофос
2.4. Октаметил
| 3. Срок ожидания после обработки растений ФОС контактного
действия?
|
| 4. Срок ожидания после обработки растений ФОС системного действия?
|
дней 15 дней 30 дней 45 дней
| 5. механизм токсического действия ФОС?
| | 5.1. Образование метгемоглобина
Угнетение активности холинэстеразы
5.3 Образование карбоксигемоглобина
| 6. . Основные симптомы острого отравления ФОС на глад ко- мышечные органы?
| Бронхоспазм
Расширение бронхов
Атония кишечника
6.4. Усиление перистальтики кишечника кишечника
| 7. Симптомы острого отравления ФОС на глаз
| Миоз
Мидриаз
Спазм аккомодации
7.4 Паралич аккомодац и и
| 8. Через какой срок разрешен убой животных на мясо после отравления ФОС?
| Через 5 дней
Через 15 дней
Через 25 дней
В любое время
| Группы препаратов для лечения I ! острого отравления ФОС?
| 9.1Стимуляторы ЦНС
9.2Наркотические анальгетики
9.3Реактиваторы холинэстеразы
9.4Холиноблокаторы.
| 10. Какой препарат используется для устранения параличей и слабости скелетной мускулатуры приотравлении ФОС отравлении ФОС?
| 10.1Тиамина бромид
10.2Сульфокамфокаин
10.3 Унитиол
10.4 Атропина сульфат
| 11. Метод извлечения ФОС из патматериала для ХТА
| 11.1 Минерализация
11.2 Экстракция водой
11.3 Водяным паром
| | 12.1 Ферментный
12.2 тонкослойная хроматография
12.3 титрометрический
| 13.Фосфорорганические инсектициды контактного действия
| 13.1 Байтекс;
13.2 Антио;
13.3. Хлорофос.
13.4. Тиофосфос.
| 14. Сроки ожидания после обработки растений фосфороргани-ческими инсектицидами системного действия
| 14.11. Не ранее 6 дней.
14.2 2. Не ранее 6 недель.
| 15.Что следует понимать под термином "летальный синтез"?
| 15.1. Превращение пестицида в организме в менее токсическое соединение.
15.2. Превращение пестицида в организме в более токсическое соединение.
| Фосфорорганические пестициды, присутствие которых не допустимо в кормах для сельскохо-зяйственных животных.
| 16.1. Карбофос.
16.2. Хлорофос.
3. Фосфамид.
16.4. Трихлорметафос-3
| Указать фосфорорганические пестициды максимально допустимый уровень которых в кормах для животных составляет не более 2 мг на 1 кг корма.
| | |
|
|