Главная страница
Навигация по странице:

  • Протокол опыта

  • Ферментный метод определения фосфорорганических пестицидов в патологическом материале.

  • Материальное оснащение

  • Принцип метода.

  • Подготовка материала к исследованию.

  • Схема определения активности холинэстеразы

  • Угнетение активности холинэстеразы в зависимости от содержания хлорофоса в молоке (мг/л)

    		•

    методичка. Методические указания к лабораторнопрактическим занятиям по ветеринарной токсикологии Москва2005


    Скачать 2 Mb.
    НазваниеМетодические указания к лабораторнопрактическим занятиям по ветеринарной токсикологии Москва2005
    Анкорметодичка.doc
    Дата12.02.2017
    Размер2 Mb.
    Формат файлаdoc
    Имя файламетодичка.doc
    ТипМетодические указания
    #2601
    КатегорияМедицина
    страница13 из 24
    1   ...   9   10   11   12   13   14   15   16   ...   24

    Лабораторная работа

  • Работа № 1

  • Токсическое действие ФОС на кролика и лечение отравления.

  • Материальное обеспечение работы.

  • Кролик-1

  • Шприцы с иглами на 5 мл -2

  • Вата

  • Спирт 96% - 50мл

  • 10% раствор хлорофоса -1 Омл (или 10% раствор карбофоса -1 Омл)

  • 0,1% раствор атропина сульфата -10мл

  • Линейка

  • Фонендоскоп.

  • Ход опыта.

    • Оценить исходное состояние кролика по тестам (см.таблицу №5).

                  • Таблица №5.

  • Протокол опыта

    • № п.п

        • Тесты

    • Исходное состояние

    • Хлорофос

    • Атропин на фоне хлорофоса

        • В

    • эемя в минутах

    • 10

    • 20

    • 30

    • 10

    • 20

    • 30

    • 1.

    • ЦНС (возбуждение, угнетение)















    • 2.

    • Рефлексы (усиление, ослабление)















    • 3.

    • Тремор, судороги (есть, нет)















    • 4.

    • Величина зрачка (мм)















    • 5.

    • Саливация (усиление, угнетение)















    • 6.

    • Дефекация (есть, нет)















    • 7.

    • Пульс (уд/мин)















    • 8.

    • Дыхание (дых. движений /мин.)















    • 9.

    • Цвет слизистых















    • 10.

    • Температура













    • ,

  • Ввести под кожу 10% раствор хлорофоса в дозе 500 мг/кг (LD5o хлорофоса
    =540 мг/кг внутрь для мышей). Подбор дозы провести по содержанию Д.В. в
    препарате хлорофоса и в зависимости от индивидуальной чувствительности
    животного.

  • В течение 30 минут наблюдать за состоянием животного по тем же тестам.

  • На максимуме клинического проявления отравления ввести внутривенно
    атропина сульфат в дозе 5мг/кг (1мл 0\1% раствора на 1кг массы).

  • В зависимости от тяжести состояния ввести препараты патогенетической и
    симптоматической терапии:




    • Сульфокамфорокаин внутривенно в дозе 10 мг/кг.

    • Тиамина бромид внутримышечно в дозе 1 мг/кг.

    • Кальция хлорид внутривенно в дозе 50 мг/кг.

    • Кислоту аскорбиновую подкожно или внутримышечно в дозе 1 мг/кг.

      • Глюкозу внутривенно в дозе-500 мг/кг.

    • Объяснить механизм наблюдаемых изменений состояния животного под действием хлорофоса и атропина.

    • Работа №2.

    • Ферментный метод определения фосфорорганических пестицидов в

    • патологическом материале.

                    • >

    • Материальное оснащение: баня водяная, термометр химический до 100° С, пробирки, колбы мерные на 100 и 50 мл, пипетки по 0,2-10мл отдельно для каждого реактива, склянки с притертыми пробками, химические стаканы, весы, вата.

    • Принцип метода. В основу метода лежит способность фосфорорганических соединений (ФОС) угнетать холинэстеразу. Основное значение этого фермента- разложение избытка ацетилхолина на холин и уксусную кислоту. Последняя в ходе реакции изменяет окраску индикатора бромтимолового синего до зеленого цвета. При угнетении фермента замедляется расщепление ацетилхолина, и образование уксусной кислоты в реакционной смеси происходит в течение длительного времени, что устанавливают по скорости изменения окраски индикатора.

    • О наличии пестицидов в пробе судят по степени угнетения активности холинэстеразы, выраженной в процентах. Расчет проводят по калибровочному графику. Чувствительность метода 0,1мг/кг анализируемого продукта. Точность метода 80%. Метод рекомендуется для определения хлорофоса, метафоса, карбофоса, трихлорметафоса -3, метилнитрофоса, метилмеркапто-фоса, ДДФВ и диброма в органах и тканях животных.

    • Подготовка материала к исследованию. Исследуемый материал тщательно измельчают, после чего навеску в 20-30 г. помещают в стаканчик с притертой пробкой, заливают адекватным количеством хлороформа (20-3Омл), закрывают пробкой и экстрагируют в течении часа при периодическом встряхивании. Затем пипеткой, нижний конец которой обернут ватой, набирают 1мл хлороформенного экстракта и переносят в пробирку (или химический стаканчик). В другую контрольную пробирку ( или химический стаканчик) вносят 1мл хлороформа. Обе пробирки помещают на водяную баню при температуре не выше 40° С или под струю воздуха до полного испарения хлороформа. К сухому остатку в обе пробирки добавляют 1мл дистиллированной воды и снова помещают пробирки на водяную баню на 3 минуты. После этого охлаждают до комнатной температуры.

      • Ход опыта. В опытную(№1) и контрольную (№2) пробирки вносят по 1 мл раствора холинэстеразы или сыворотки крови лошади. Затем в пробирку №1 добавляют экстракт из патматериала, -а в пробирку №2 дистиллированную воду. Содержимое хорошо перемешивают и ставят на водяную баню при температуре 39-40°С на ЗОмин. По истечении этого времени в пробирку №3 вносят 0,5мл содержимого из опытной пробирки №1, а в контрольную пробирку (№4) — 0,5мл из контрольной (№2). В каждую пробирку приливают по 4,5мл раствора №3 и сразу отмечают время начала реакции. Затем в отдельную пробирку №5 помещают 0,5мл содержимого из контрольной пробирки (№2) и добавляют

    • 4,5мл раствора №2. Эта пробирка является колометрическим стандартом (см. схему). В дальнейшем отмечают время уравнения (в минутах) цвета жидкости в опытной и контрольной пробирках с цветом колометрического стандарта. Процент угнетения активности холинэстеразы вычисляют по формуле/

    • где X -угнетение активности холинэстеразы, %;

    • В - время уравнения цвета жидкости в контрольных пробирках с цветом

        • стандарта;

    • В - время уравнения цвета жидкости в опытных пробирках с цветом стан­дарта.

    • Схема определения активности холинэстеразы

        • Наименование компонентов

          • Номера пробирок

      • 1 опыт

      • 2 опыт

      • 3 опыт

      • 4 контроль

      • 5 колорим. стандарт

      • Экстракт из патологического материала

      • 1мл

      • -

      • -

      • -

      • -

      • Дистиллированная вода

      • -

      • 1мл

      • -

      • -

      • -

      • Сыворотка крови лошади 1 :3

      • 1мл

      • 1мл

      • -

      • -

      • -

      • Инкубация при 40°С в течение ЗОмин.

      • +

      • +

      • -

      • -

      • -

      • Содержимое пробирки № 1

      • -

      • -

      • 0,5мл

      • -

      • -

      • Содержимое пробирки №2

      • -

      • -

      • -

      • 0,5мл

      • 0,5мл

      • Раствор №3

      • -

      • -

      • 0,5мл

      • 4,5мл

      • -

      • Раствор №2

      • -

      • -

      • -

      • -

      • 4,5мл

      • Инкубация при 38-39°С до уравнения цвета

      • -

      • -

      • +

      • +

      • +

    • Угнетение активности холинэстеразы на 10% и более свидетельствует о наличии ФОС в исследуемом материале.

    • Количественное определение ФОС проводят по калибровочному графику, построенному по препарату, наличие которого предполагается в исследуемом материале. Если подозревается неизвестное ФОС, то калибровочный график строят по одному из ядохимикатов перечисленных выше. Для этого необходимо иметь химически чистое вещество или препарат с известным содержанием активно действующего вещества (ДВ). Из заведомо чистого образца исследуемого материала (мышцы, орган или другой образец) в склянки с притертыми пробками берут 5 навесок по 1 г. и вносят в них соответственно 1,0; 5,0; 10,0; 20,0; 50,0 мкг по ДВ. Через ЗОминут каждую навеску заливают 10мл хлороформа и экстрагируют один час. Хлороформенные экстракты исследуют в описанном выше порядке. По оси ординат откладывают процент угнетения активности холинэстеразы в каждой пробе, а по оси абсцисс -количество препарата (в мг/кг) по ДВ. Зависимость процента угнетения активности холинэстеразы от концентрации ФОС в исследуемом материале (примерный калибровочный график) представлена в таблице.

            • Угнетение активности холинэстеразы в зависимости от содержания хлорофоса в молоке (мг/л)



      • Концентрация хлорофоса, мг/л

    • Угнетение активности холинэстеразы, %

    • 0,050

    • 3,1

    • 0,075

    • 21,0

    • 0,100

    • 32,6

    • 0,125

    • 37,0

    • 0,150

    • 40,5

    • 0,175

    • 44,0

    • 0,200

    • 47.0

    • 0,225

    • 50,0

    • 0,250

    • 53,0

    • 0,275

    • 55,0

    • 0,300

    • 57,5

    • 0,325

    • 60,5

    • 0,350

    • 62,5

    • 0,375

    • 65,5

    • 0,400

    • 67,5

    • 0,450

    • 71,0

    • 0,475

    • 72,0

    • 0,500

    • 74,7

    • Тесты



    • t

    • ' 1. С какой целью ФОС применяются в сельском хозяйстве?

      • Инсектициды

    • 1.3. Акарициды 1.4. Дефолианты

    • 2. Какие препараты относятся к ФОС контактного действия?

      • Хлорофос

      • Карбофос

      • Меркаптофос

    • 2.4. Октаметил

    • 3. Срок ожидания после обработки растений ФОС контактного

    • действия?

      • 6 дней

      • 15 дней

      • 30 дней




    • 4. Срок ожидания после обработки растений ФОС системного действия?

      • 6 дней

    • 4.2 15 дней

      • 30 дней




    • 4.4.


    • дней 15 дней 30 дней 45 дней

    • 5. механизм токсического действия ФОС?

    • | 5.1. Образование метгемоглобина

      • Угнетение активности холинэстеразы

    • 5.3 Образование
      карбоксигемоглобина

    • 6. . Основные симптомы острого отравления ФОС на глад ко- мышечные органы?

    • Бронхоспазм

    • Расширение бронхов

    • Атония кишечника

    • 6.4. Усиление перистальтики кишечника
      кишечника

    • 7. Симптомы острого отравления ФОС на глаз

    • Миоз

    • Мидриаз

    • Спазм аккомодации

    • 7.4 Паралич аккомодац и и

    • 8. Через какой срок разрешен убой животных на мясо после отравления ФОС?

    • Через 5 дней

    • Через 15 дней

    • Через 25 дней

    • В любое время

    • Группы препаратов для лечения I ! острого отравления ФОС?

    • 9.1Стимуляторы ЦНС

    • 9.2Наркотические анальгетики

    • 9.3Реактиваторы холинэстеразы

    • 9.4Холиноблокаторы.




    • 10. Какой препарат используется для устранения параличей и слабости скелетной мускулатуры приотравлении ФОС
      отравлении ФОС?

    • 10.1Тиамина бромид

    • 10.2Сульфокамфокаин

    • 10.3 Унитиол

    • 10.4 Атропина сульфат

    • 11. Метод извлечения ФОС из патматериала для ХТА

    • 11.1 Минерализация

    • 11.2 Экстракция водой

    • 11.3 Водяным паром

    • 12.1 Ферментный

    • 12.2 тонкослойная хроматография

    • 12.3 титрометрический

    • 13.Фосфорорганические инсектициды контактного действия

    • 13.1 Байтекс;

    • 13.2 Антио;

    • 13.3. Хлорофос.

    • 13.4. Тиофосфос.




    • 14. Сроки ожидания после обработки растений фосфороргани-ч­ескими инсектицидами системного действия

    • 14.11. Не ранее 6 дней.

    • 14.2 2. Не ранее 6 недель.

    • 15.Что следует понимать под термином "летальный синтез"?

    • 15.1. Превращение пестицида в организме в менее токсическое со­единение.

    • 15.2. Превращение пестицида в организме в более токсическое соединение.

    • Фосфорорганические пестициды, присутствие которых не­ допустимо в кормах для сельскохо-зяйственных животных.

    • 16.1. Карбофос.

    • 16.2. Хлорофос.

    • 3. Фосфамид.

    • 16.4. Трихлорметафос-3

    • Указать фосфорорганические пестициды максимально допу­стимый уровень которых в кормах для животных составляет не более 2 мг на 1 кг корма.



    • I


    1   ...   9   10   11   12   13   14   15   16   ...   24

    • написать администратору сайта