Акушерство, гинекология и биотехника размножения с.-х. животных. Методическое пособие для самостоятельной работы к лабораторно практическим занятиям по дисциплине акушерство, гинекология и биотехника размножения с. Х. Животных
 Скачать 0.52 Mb.
|
|
Цель занятия: Ознакомится с особенностью состава сред для разбавления свежеполученной спермы, в зависимости от сроков ее хранения. Важный фактор эффективности искусственного осеменения — максимальное использование выдающихся высокоценных производителей путем осеменения многих самок спермой одного эякулята. Для этого необходимо разбавить сперму, чтобы увеличить ее объем и обеспечить сохранность оплодотворяющей способности на продолжительный срок. Разбавляют сперму специальными средами — биологическими и синтетическими. Главные требования к среде — это создание условий, которые предупреждали бы расходование внутренних энергетических за- пасов в спермиях, обеспечили способность длительной выживаемости вне организма и сохранности их оплодотворяющей способности. Разбавитель, как правило, состоит из нескольких компонентов, каждый из которых выполняет определенную биологическую роль. В качестве основы синтетической среды используют растворы неэлектролита (глюкоза, лактоза, сахароза, раффиноза). Сахара нейтрализуют вредное действие электролитов, то есть защищают спермии от снятия электрического заряда (не допускают агглютинации), вместе с тем они являются материалом для гликолиза и дыхания. Для устранения или ослабления температурного шока спермиев в разбавитель вводят желток куриного яйца, который повышает их устойчивость к охлаждению. Важный компонент среды, предохраняющий спермии от самоотравления кислыми продуктами распада и создающий буферность среды, — соль лимонной кислоты — натрий лимоннокислый, трехзамещенный, пятиводный (цитрат натрия). Дополнительными компонен- тами для синтетических сред могут быть сульфаниламид (белый стрептоцид) и антибиотики (пенициллин, стрептомицин и т. д.), которые вводят в разбавитель для предупреждения развития микроорганизмов, и глицерин, применяемый при замораживании спермы во избежание стадии кристаллизации жидкости, повреждающей спермии. Кроме того, для приготовления сред также можно использовать следующие вещества: калий фосфорнокислый, натрий двууглекислый, магний сернокислый, калий хлористый, аммоний сернокислый очищенный. Среды для разбавления спермы могут быть приготовлены непосредственно на станции или из сухих заготовок, выпускаемых промышленностью. При этом они должны иметь физико-химические свойства, при которых осмотическое давление было бы наиболее благопри- ятно для спермиев. Достигается это точным взвешиванием на аналитических весах необходимых компонентов в соответствии с рецептом разбавителя. Среда не должна содержать пахнущих и ядовитых веществ, солей металлов (свинец, олово и т. д.). Качество компонентов весьма важно и к применению допускают только те из них, которые имеют этикетки с установленными обозначениями — наименование предприятия, выпустившего реактив, название и степень чистоты, номер контрольного анализа. Хранят реактивы в сухом темном месте, в стеклянных банках, плотно закрытых притертыми стеклянными или корковыми пробками. Готовят разбавитель непосредственно перед его применением с тем, чтобы от времени приготовления до использования проходило не более 3 ч. Для приготовления среды в стеклянный сосуд отвешенные по рецепту компоненты высыпают и добавляют необходимое количество прокипяченной дистиллированной воды и легким покачиванием размешивают до полного растворения. Приготовленную таким образом среду стерилизуют в водяной бане путем кипячения в течение 5 — 10 мин и после охлаждения до 35 — 40ºС в нёе добавляют антибиотики, желток и глицерин. Для получения желтка используют свежие куриные яйца, которые моют, насухо вытирают, протирают спиртовым (70%) тампоном и скорлупу раскалывают пополам. Белок отделяют в чашку, а желток, предварительно сняв с него остатки белка фильтровальной бумагой, прокалывают скальпелем и сливают в стеклянную мензурку. Необходимое количество желтка вносят в сосуд с разбавленными компонентами и тщательно размешивают. Яйца должны быть от здоровых кур, из хозяйств, благополучных по инфекционным заболеваниям птицы. Сперма должна быть разбавлена не позже чем через 10 мин после получения на вагину. Перед разбавлением сперму оценивают и определяют ее объем. При этом следует строго соблюдать предосторожность, учитывая, что спермии очень чувствительны к условиям среды. Во избежание такого влияния разбавитель и вся посуда, используемые при разбавлении, должны быть близки к температуре спермы. Среду небольшими порциями добавляют к сперме и осторожно смешивают. После разбавления сперму обязательно проверяют по активности под микроскопом. Биологический контроль среды определяют по выживаемости спермиев при температуре 2 — 4ºС при различных степенях разбавления спермы. Каждая поступившая серия компонентов, а также антибиотиков, сульфаниламидов, входивших в состав среды, должна быть проверена на безвредность. Биоконтроль позволяет установить оптимальные степени разбавления спермы. В зависимости от концентрации и активности спермиев сперму производителей сельскохозяйственных животных разбавляют: быка в 20 — 50 раз с таким расчетом, чтобы в одной дозе разбавленной спермы при всех способах хранения перед осеменением животных было не менее 10 млн спермиев с прямолинейно-поступательным движением; барана в 2 (1:1) — 4 (1:3) раза с концентрацией в дозе не менее 80 млн спермиев; хряка в 2 (1:1) — 10 (1:9) раз, с концентрацией в дозе не менее 3 млрд спермиев; жеребца в 4 (1:3) раза с концентрацией в дозе не менее 3 млрд спермиев. Для хранения спермы при температуре 2 — 4ºС ее разбавляют специальными средами, приготовленными по следующим рецептам: для быка — глюкозо-цитратно- желточная, состоящая из воды дистиллированной 1000 мл, глюкозы медицинской безводной — 30 г, натрия лимоннокислого, трехзамещенного, пятиводного 14 г, желтка куриных яиц — 200 мл; для барана — глюкозо-цитратно-желточная: на 1000 мл дистиллированной воды добавляют глюкозы медицинской 8 г, натрия ли- моннокислого трехзамещенного, пятиводного 28 г, желтка куриных яиц — 200 мл; для хряка — глюкозо-хелато-цитратно-сульфатная, на 1000 мл дистиллированной воды добавляют глюкозы 40 г, натрия лимоннокислого трехзамещенного пятиводного 3,8 г, аммония сернокислого очищенного 1,8 г, натрия двууглекислого 0,5 г, двунатриевой соли этиленди- аминтетрауксусной кислоты (трилон Б) 2,6 г; для жеребца — лактозо-хелато- цитратно-желточная, состоящая из лактозы 11 г, натрия двууглекислого 8 г, натрия лимоннокислого трехза- мещенного пятиводного 8,9 мг, двунатриевой соли эти- лендиаминтетрауксусной кислоты (трилон Б) 100 мг, желтка куриных яиц — 1,6 г, воды дистиллированной 100 мл. При замораживании спермы в форме гранул, в качестве разбавителя чаще всего пользуются лактозо-желточной средой: лактоза — 11,5 мл, желток куриных яиц — 20, глицерин — 5, вода дистиллированная 100 мл, спермосан - 3 — 50 тыс. ед. Замораживая сперму в облицованных гранулах, в качестве разбавителей используют среды № 1 и № 2 следующего состава: Среда № 1: 11%-ный раствор лактозы или сахарозы — 63 мл, желток куриных яиц — 30 мл, глицерин— 7 мл; среда № 2: вода дистиллированная — 100 мл, лактоза или сахароза — 6 г, натрий лимоннокислый трехзамещенный пятиводный — 1,4 г, глицерин — 5 мл. При замораживании спермы в полипропиленовых соломинках (пайетах), сперму после оценки разбавляют лактозо-фруктозо-рафинозо-магниево-глицерино-желточной (ЛФРМГЖ) средой, которая состоит из: лактозы — 85 г, фруктозы — 12, рафинозы пятиводной — 19,5, магния сернокислого — 0,1 г, глицерина — 50 мл, желтка куриных яиц — 200 мл, спермосана -3 — 500 — 700 тыс. ед, воды дистиллированной — 1000 мл. Полученную и оцененную сперму жеребца разбавляют синтетической средой, состоящей из лактозы — 11 г, натрия двуугле- кислого — 8 мг, натрия лимоннокислого трехзамещенного пятиводного — 89 мл, глицерина — 3,5 мл, желтка куриных яиц — 11,6 мл, спермосана-3 — 25 — 30 тыс. ед., воды дистиллированной — 100 мл. Контрольные вопросы.
Тема №18. ЗНАЧЕНИЕ АНАБИОЗА ПРИ ХРАНЕНИИ СПЕРМЫ. Цель занятия: Выяснить основные принципы хранения спермы, дать определение анабиоза, установить условия, при которых достигается анабиоз сперматозоидов. При искусственном осеменении с момента получения спермы до ее использования проходит какое-то время. В течение этого интервала оплодотворяющая способность спермиев не должна снижаться. Чем дольше можно сохранить оплодотворяющую способность, тем больше возможностей для проведения искусственного осеменения. Существует два основных принципа сохранения оплодотворяющей способности спермы. Первый заключается в обеспечении сперматозоидов необходимыми энергетическими веществами, ферментами, основными ионами и при этом постоянно удалять из окружающей среды продукты распада, ограничивающие выживаемость спермиев. Для этого необходимо знать во всей полноте о метаболических процессах, протекающих в сперматозоидах. Возможности обеспечения физиологического уровня метаболизма в спермиях во внешней среде в течение длительного времени очень ограничены. Поэтому данный принцип может служить лишь основой для методов кратковременного хранения спермы. Второй принцип основан на торможении всех метаболических процессов, протекающих в половых клетках, до минимального уровня. Снижение интенсивности биохимических процессов в клетках (тканях, целом организме) и прекращение подвижности называют анабиозом. Анабиоз – приостановка жизнедеятельности организма (клетки) при неблагоприятных условиях с возможным последующим восстановлением жизнедеятельности при наступлении благоприятных условий. Анабиоз – приспособительная реакция, переход в состояние покоя. Достигать состояния торможения метаболизма в половых клетках (анабиоза) можно несколькими способами: изменением температуры, высушиванием и химическим воздействием. Снижение метаболизма изменением температуры. Сразу же после эякуляции спермии проявляют высокую метаболическую активность и подвижность. При повышении температуры до 41-43ºС подвижность спермиев возрастает, при температуре 50ºС происходят необратимые изменения, приводящие к гибели клеток. Продолжительное хранение при 20ºС невозможно, поскольку быстро расходуются различные химические соединения, которые не могут быть восстановлены или взяты из окружающей среды. Понижение температуры приводит к уменьшению интенсивности движения, при 7ºС спермии становятся неподвижными. Интенсивность метаболизма снижается, но полностью он не прекращается. Продолжительность сохранения спермы при температуре от 0 до -5ºС увеличивается до нескольких дней. Естественно было бы предположить, что при более низких температурах продолжительность хранения спермы увеличится. Поэтому многими исследователями велись эксперименты по воздействию на сперму низких температур. В настоящее время получил широкое распространение во всем мире способ глубокого замораживания и хранения спермы в жидком азоте при температуре -196ºС. Снижение метаболизма высушивание спермы. Этот способ подразумевает уменьшение содержания воды в предварительно замороженных спермиях до такого минимума, при котором биохимические реакции приостанавливаются или интенсивность их снижается до критической черты, при добавлении воды все процессы восстанавливаются. В настоящее время данный метод хранения спермы и сам процесс высушивания не разработан полностью. Снижение метаболизма химическими веществами. В придатке семенника спермии сохраняют оплодотворяющую активность около двух месяцев, несмотря на то, что температура их хранения близка к температуре тела животного. Связано это с отсутствием в среде канала придатка семенника электролитов и свободного кислорода, а также со слабой кислотностью среды. Уровень окислительных процессов в клетках понижен, в спермиях накапливается молочная кислота, понижается рН среды, что содействует переводу спермиев в анабиотическое состояние. Принцип кислотного анабиоза в сочетании с регулированием температуры был использован при разработке метода кратковременного хранения спермы путем применения угольной кислоты. Эта кислота улетучивается при доступе воздуха, рН повышается и активность спермиев восстанавливается. Но в связи с разработкой метода длительного хранения спермы в жидком азоте метод кислотного анабиоза не получил распространения. Но подавление метаболизма в спермиях для продления их жизни путем добавления некоторых веществ актуально и сейчас. Так, введение в среду для разбавления спермы хряков натриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА, трилон Б) снижает содержан6ие ионов кальция, что способствует снижению метаболизма в спермиях и обеспечивает сохранение оплодотворяющей способности спермы в течение нескольких дней при температуре 16-20ºС. Контрольные вопросы:
Тема №19. ТРЕБОВАНИЯ К ПОМЕЩЕНИЯМ ДЛЯ ПУНКТОВ ИСКУССТВЕННОГО ОСЕМЕНЕНИЯ И ИХ ОБОРУДОВАНИЕ. Штаты, распорядок работы и оплата труда. Изучение действующих инструкций по искусственному осеменению животных. Цель занятия: Выяснить основные требования, предъявляемые к пунктам искусственного осеменения животных различных видов, изучить действующие инструкции по искусственному осеменению. Основным производственным звеном, выполняющим работу по искусственному осеменению маточного поголовья, являются пункты искусственного осеменения. Через них государственные станции искусственного осеменения (районные или межрайонные) осуществляют свою деятельность в хозяйствах закрепленной зоны. Пункты искусственного осеменения могут быть следующих видов: 1)использующие сперму от производителей своего хозяйства (основные пункты); 2) работающие на привезенной с государственных станций или основных пунктов сперме; 3) использующие сперму производителей своего хозяйства и доставленную с государственных станций. Пункт для осеменения крупного рогатого скота состоит из манежа, лаборатории, моечной, кладовой и входного тамбура, а так же станков для передержки маток после осеменения. В манеже для лучшего освещения во время осеменения необходимо сзади станка иметь окно и розетку для дополнительного освещения. В манеже устанавливают станок со свободным вводом и выводом животных с удобной и безболезненной фиксацией их при осеменении, оборудованный кормушкой. Необходимо иметь санитарное ведро, умывальник, кружку Эсмарха для раствора фурациллина, стеклянный сосуд для других антисептиков. В манеже или лаборатории оборудуют место для сосуда Дьюара с жидким азотом для длительного хранения и использования замороженной спермы, куда подводят приточно-вытяжную вентиляцию. Лабораторию размещают в наиболее светлой и теплой комнате (18 - 23°С) с входом из моечной. Здесь должен быть микроскоп для оценки спермы быков, шкаф для хранения инструментов и химикатов, холодильник Моечную располагают рядом с лабораторией с выводом в манеж. Здесь размещают оборудование и приспособления для мытья и стерилизации инструментов, посуды, и приборов, для стирки халатов, полотенец. Стол для посуды и шкаф для хранения растворов, умывальник, тазы, электроплитку, стерилизатор, шкаф для верхней одежды и обуви работников пункта. Помещения пункта должны быть светлыми, чистыми и сухими. Пункт искусственного осеменения свиней строят двух типов: для осеменения спермой хряков, содержащихся на внутрихозяйственном пункте; для осеменения спермой хряков, транспортируемой с госплемстанций. На первом типе пункта должны быть: манеж для получения спермы, лаборатория для оценки, разбавления и расфасовки спермы, моечная и манеж для осемененияматок. В манеже оборудуют водопроводный кран со шлангом для мытья полов, стен, раковину для мытья рук. Лаборатория сообщается с манежем через оконный проем, с моечной – через дверь. Моечную располагают рядом с лабораторией и дверью в манеж. Пункты искусственного осеменения овец имеют манеж, лабораторию, помещение для временного содержания осемененных и неосемененых овец. Если к пункту прикрепляют несколько маточных отар, то к нему пристраивают два оцарка под навесом для осемененных и неосемененых маток. Против окна в манеже устанавливают станок для фиксации маток. По обе стороны от станка располагаются столики, на которых размещают: справа – микроскоп, шприцы-катетеры, стеклянные баночки для спирта на 100 мл и 1%-ного раствора бикарбоната натрия, предметные и покровные стекла, банки с тампонами и стеклянную чашку; слева – влагалищные зеркала и электроплитку. Пункт искусственного осеменения кобыл следует размещать в типовых или приспособленных помещениях, отвечающих санитарным требованиям. Он должен иметь манеж, лабораторию и моечную (межхозяйственные пункты и помещение для содержания жеребцов), подсобные помещения, кладовые, для хранения сбруи и фуража, выгульную площадку для жеребцов. Для фиксации кобыл при осеменении в манеже устраивают деревянный или металлический станок. Вдоль стен лаборатории устанавливают столы для инструментов, посуды, приборов. Необходимо иметь шкаф для хранения инструментов и материалов. В моечной должна быть горячая и холодная вода, сушильный шкаф и два стола. Отопление делают общим, обогревающим все помещения пункта (стопкой со стороны моечной при отсутствии центрального отопления). Штат пункта искусственного осеменения использующего сперму от производителей своего хозяйства состоит из заведующего (он же техник), санитарки и скотника по уходу за производителями. На пунктах, работающих на привезенной с государственных станций сперме, всю работу выполняет один техник искусственного осеменения. Лишь при особо большой нагрузке пункта (свыше 800 коров и 2000 овец) ему в помощь выделяется санитар. Если нагрузка техника меньше нормы, то на него возлагают обслуживание 2-3 пунктов искусственного осеменения близко расположенных друг от друга (фермы одного хозяйства). Для этого хозяйство предоставляет технику необходимые транспортные средства. При невозможности такой организации и недогрузке техника ему поручают по совместительству и другую работу на ферме (зоотехнический учет, ведение книги учета поголовья и тд.). Контрольные вопросы:
Тема №20. МЕРОПРИЯТИЯ ПРИМЕНЯЕМЫЕ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ МАЛОМОЛОЧНОСТИ. |