исследование мокроты. Исследование мокроты. Микробиологические методы исследования отделяемого дыхательных путей. Мокрота
 Скачать 267.32 Kb.
|
|
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ОТДЕЛЯЕМОГО ДЫХАТЕЛЬНЫХ ПУТЕЙ. МОКРОТА. Возбудителями гнойно-воспалительных процессов дыхательных путей чаще всего являются условно-патогенные микроорганизмы следующих родов: Neisseria, Corynebacterium, Klebsiella, Citrobacter, Proteus, Candida, Actinomyces и др.; видов: Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Staphylococcus aureus, Haemophilus influenzae, Pseudomonas aeruginosa. Особенностью микробиологического исследования при инфекциях дыхательных путей является практически обязательное наличие в исследуемом материале нескольких видов микроорганизмов. Основным материалом микробиологического исследования является мокрота. Мокрота – это патологический секрет легких и дыхательных путей (бронхов, трахеи, гортани), который отделяется при откашливании. Мокрота, проходя через верхние дыхательные пути и полость рта, может контаминироваться вегетирующей в них микрофлорой. Взятие исследуемого материала. Утреннюю мокроту, выделяющуюся во время приступа кашля, собирают в стерильную банку. Перед откашливанием больной чистит зубы и полощет рот кипяченой водой с целью механического удаления остатков пищи, слущенного эпителия и микрофлоры ротовой полости. Материал собирают с соблюдением правил асептики в предварительно простерилизованные баночки или пробирки и доставляют в лабораторию. Хранение материала способствует размножению сапрофитирующей микрофлоры, развитию процессов гниения и брожения, что искажает результаты анализа, поэтому интервал между взятием материала и его посевом не должен превышать 1-2 часа. Микроскопия исследуемого материала. Из мокроты взятой стерильным ватным тампоном, одновременно с посевом приготавливают мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют с иммерсионным объективом. При обнаружении микроорганизмов отмечают их морфологические и тинкториальные свойства (кокки, палочки, отношение к окраске по Граму). При исследовании мокроты обращают внимание на наличие гранулоцитов, которые всегда можно обнаружить при воспалительных процессах в нижних отделах дыхательного тракта. Их отсутствие и большое количество эпителиальных клеток в мокроте свидетельствует о том, что материал взят неправильно (с примесью слюны) и требуется его повторное взятие. При острой инфекции в мокроте, как правило, обнаруживают не более 1-2 типов бактерий, локализованных вблизи гранулоцитов. Микроорганизмы, попавшие из ротовой полости чаще располагаются около эпителиальных клеток, и ими следует пренебречь. По результатам микроскопии могут быть внесены изменения в ход микробиологического исследования. Посев исследуемого материала Основная питательная среда: 5% кровяной агар. Так же используются желточно-солевой агар, агар с гретой кровью (шоколадный агар), среда Эндо, среда Сабуро. Культивирование. Мокроту выливают в чашку Петри. С помощью стерильных металлических толстых игл с утолщенными концами (типа зубного зонда) выбирают 2-3 гнойных комочка мокроты. С целью очистки комочков мокроты от наслоившихся обитателей верхних дыхательных путей и ротовой полости их трехкратно отмывают в стерильном физиологическом растворе, после чего засевают на питательные среды. В чашки Петри посев проводят стеклянным стерильным шпателем, равномерно растирая материал по поверхности питательной среды. Посевы помещают в термостат при 37°С. Посевы исследуемого материала просматривают после 18-24-часовой инкубации при 37°С. Учитывают количество выросших колоний, соотношение отдельных ассоциантов, описывают характер колоний. Выделяют чистые культуры микроорганизмов, проводят их идентификацию и определяют чувствительность к антибактериальным препаратам. Количественный метод Берут 1 мл мокроты, добавляют 9 мл питательного бульона или 2% пептонной воды (разведение 1:9, т. е. 10(-1)) и гомогенизируют в банке со стеклянными бусами 20 мин. Гомогенизацию можно проводить в ступке, растирая мокроту со стерильным кварцевым песком, добавляя питательный больон до конечного разведения 1:9. Из полученной эмульсии мокроты (1:9) готовят серийные разведения в бульоне (0,5 мл мокроты + 4,5 мл бульона) до 10(-7), каждый раз меняя пипетки. Посев осуществляют в обратном порядке с большего разведения. Засевают по 0,1 мл из разведений мокроты 10(-7), 10(-5), 10(-3), 10(-1) на чашку с 5% кровяным агаром и агаром с гретой кровью. Параллельный посев из указанных разведений на кровяном агаре помещают в эксикатор с горящей свечой. Посев на желточно-солевой агар, среду Эндо и Сабуро делают из исходного разведения 1:9. Инкубируют в течение суток при 37°С. На 2-ые сутки чашки просматривают и подсчитывают каждый вид микроорганизма. Количество микроорганизмов определяют в максимальном разведении мокроты, в котором еще удалось обнаружить данный вид бактерий. Например. На кровяном агаре выросли 3 колонии пневмококка при посеве 0,1 мл мокроты с разведения 10(-5). Следовательно, в 1 мл мокроты содержится 3х10 и умноженное на 100000 (степень разведения) = 3.000.000 пневмококков или 3х1000000. Диагностически значимым является обнаружение пневмококка и гемофильной палочки (до антибактериальной терапии) в 1 мл мокроты в концентрации 1000000 и выше. Аналогичные концентрации значимы и для условно-патогенных микроорганизмов в случае 2-3 кратного обнаружения с интервалом 3-5 дней. Оценка результатов Следует учитывать, что наличие или отсутствие в исследуемом материале микроорганизмов не может иметь решающего значения для диагноза. Особое значение принадлежит количественной оценке роста различных видов микроорганизмов, выросших при первичном посеве на плотных питательных средах. Для ориентировочной оценки количественного роста микроорганизмов в ассоциации целесообразно пользоваться следующими критериями: I - очень скудный рост - рост единичных колоний (до 10); II - скудный рост - рост 10-25 колоний; III - умеренный рост - рост множества сосчитываемых колоний (не менее 50); IV - обильный рост - сплошной рост несосчитываемых колоний. III и IV степени роста обычно свидетельствуют об этиологической роли данного микроорганизма, I и II степени - о носительстве или контаминации. О возбудителе необходимо судить на основании комплекса исследований: данных микроскопии первичных мазков, результатов посева на плотные питательные среды (количественная оценка роста различных видов микроорганизмов, однородность популяции при посеве на плотные питательные среды), учета анамнеза, клинических проявлений заболевания и результатов комплексной терапии. Количественный метод обеспечивает выделение чистых культур микроорганизмов и дает возможность судить более точно об этиологической значимости выделенных микроорганизмов. |