ГФ №11, том 2. Общие методы анализа лекарственное растительное сырье редакционная коллегия
 Скачать 1.25 Mb.
|
|
перемешивании в течение 5 мин. Затем прибавляют 30 мл 95% спирта, 3 мл 50% раствора едкого кали и нагревают в течение 30 мин на водяной бане с обратным холодильником при температуре кипения смеси. Содержимое колбы охлаждают до комнатной температуры, количественно переносят 50 мл воды в делительную воронку и извлекают 150 мл эфира для наркоза в течение 2 мин. В случае образования эмульсии проводят дополнительное извлечение эфиром 3 раза по 25 мл. Объединенные эфирные извлечения промывают порциями по 50 мл до исчезновения щелочной реакции промывных вод (проба с фенолфталеином). Промытые эфирные извлечения медленно фильтруют в колбу для отгона через бумажный фильтр, на который помещено около 8 г безводного натрия сульфата, фильтр с натрия сульфатом промывают 3 раза эфиром порциями по 10 мл, который фильтруют в ту же колбу. Эфир отгоняют в токе азота или под вакуумом на водяной бане, нагретой не выше 40 град. С. Остаток тотчас же растворяют в абсолютном спирте до получения концентрации около 60 мкг в 1 мл (раствор А). 15 мл раствора А переносят в колбу для гидрирования вместимостью 50 мл, прибавляют около 0,2 г палладиевого катализатора, перемешивают и гидрируют в течение 15 мин в приборе, изображенном на рис. 5 (см. определение ретинола ацетата и ретинола пальмитата). По окончании гидрирования в колбу прибавляют около 0,3 г силикагеля марки КСМ или ШСМ, перемешивают и фильтруют; 2 мл полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 15 мл абсолютного спирта, 1 мл 0,5% спиртового раствора о - фенантролина, 1 мл 0,2% спиртового раствора железа окисного хлорида, доводят объем раствора тем же спиртом до метки, перемешивают и оставляют в защищенном от света месте. Точно через 10 мин после прибавления раствора железа окисного хлорида измеряют оптическую плотность раствора красновато - оранжевого цвета на спектрофотометре при длине волны 520 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют абсолютный спирт. Параллельно проводят контрольный опыт на реактивы. Из величины оптической плотности испытуемого раствора вычитают величину оптической плотности контрольного опыта. Содержание альфа - токоферола ацетата в микрограммах в 1 мл находят по калибровочному графику. Содержание C31H52O3 (альфа - токоферола ацетата) в одной таблетке или драже в граммах (X) вычисляют по формуле: С х V х б С х V х б Х = --------------------- = ---------------, а х 2 х 1000 х 1000 а х 2000000 где С - содержание альфа - токоферола в 25 мл, найденное по калибровочному графику, в микрограммах; V и 2 - разведения в миллилитрах; а - навеска препарата в граммах или количество таблеток, покрытых оболочкой; б - средняя масса одного драже в граммах; 1000, 1000 - пересчет в граммы. Примечания. 1. Построение калибровочного графика: 0,1000 г Государственного стандартного образца альфа - токоферола ацетата растворяют в 30 мл абсолютного спирта, прибавляют 3 мл 50% раствора едкого кали и нагревают в течение 30 мин на водяной бане с обратным холодильником при температуре кипения смеси. Извлекают неомыляемый остаток эфиров для наркоза, как указано выше, эфир отгоняют на водяной бане в токе азота. Остаток растворяют в абсолютном спирте, переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают. 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают. Из полученного раствора отбирают 1, 2, 3, 4, 5 мл раствора в мерные колбы вместимостью 25 мл и проводят реакцию с растворами о-фенантролина и железа окисного хлорида, как указано выше. Точно через 10 мин после прибавления раствора железа окисного хлорида измеряют оптическую плотность растворов от оранжевого до красновато - оранжевого цвета на спектрофотометре при длине волны 520 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, как указано выше. Из величин оптической плотности растворов Государственного стандартного образца вычитают величину оптической плотности контрольного опыта на реактивы. Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс количества альфа - токоферола ацетата в микрограммах в 25 мл раствора, а по оси ординат - соответствующие им оптические плотности. 2. Приготовление реактивов: 0,5% раствор о-фенантролина и 0,2% раствор железа окисного хлорида готовят на абсолютном спирте. Растворы годны в течение 1 мес при хранении в банках оранжевого стекла с притертыми пробками при комнатной температуре. 12. Определение кальция пантотената Определение содержания кальция пантотената проводят микробиологическим методом с Saccharomycodes ludwigii KM в качестве тест - микроорганизма. Точную навеску порошка растертых драже, таблеток или таблеток, покрытых оболочкой, растертых в порошок, указанных в соответствующих частных статьях, помещают в мерную колбу определенной вместимости, прибавляют небольшое количество воды, взбалтывают, доводят объем раствора водой до метки и фильтруют (основной раствор). Из полученного основного раствора готовят последовательно разведения с таким расчетом, чтобы содержание в нем кальция пантотената было около 0,01 мкг в 1 мл. Готовят растворы рабочих стандартных и испытуемых образцов в конических колбах вместимостью 50 мл по следующей схеме. ------------------------------------------------------------------ | N колбы | Количество рабочего | Количество |Количество | | |раствора кальция пантотената | воды, мл | основной | | |(0,01 мкг/мл) или испытуемого| | среды, мл | | | образца, мл | | | |---------+-----------------------------+------------+-----------| | 1 | 0 | 5,0 | 5,0 | | 2 | 0,5 | 4,5 | 5,0 | | 3 | 1,0 | 4,0 | 5,0 | | 4 | 1,5 | 3,5 | 5,0 | | 5 | 2,0 | 3,0 | 5,0 | | 6 | 3,0 | 2,0 | 5,0 | | 7 | 4,0 | 1,0 | 5,0 | ------------------------------------------------------------------ Общий объем растворов в колбах 10 мл. Определение проводят не менее двух раз. Колбы закрывают ватными пробками и стерилизуют насыщенным водяным паром в паровом стерилизаторе при 1 ати (0,1 МПа) 15 мин. После охлаждения в каждую колбу вносят по 2 капли разведенной взвеси тест - культуры. Засеянные колбы инкубируют при температуре от 29 до 30 град. С 48-72 ч. Для прекращения роста дрожжевой культуры все колбы подвергают обработке текучим паром в течение 5 мин. После этого колбы охлаждают и интенсивность роста тест - культуры в колбах с растворами рабочего стандартного и испытуемого образцов измеряют на фотоэлектроколориметре - нефелометре при длине волны около 540 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Содержание C18H32CaN2O10 (кальция пантотената) в одном драже или одной таблетке в граммах (X) вычисляют по формуле: С х б х К Х = -------------, а х 1 000 000 где С - среднеарифметическое содержание кальция пантотената, найденное по стандартной кривой из 6 возрастающих концентраций растворов испытуемого образца, в микрограммах; К - коэффициент разведения; а - навеска препарата в граммах или количество таблеток, покрытых оболочкой; б - средняя масса одного драже в граммах; 1 000 000 - пересчет в граммы. Примечания. 1. Приготовление раствора рабочего стандартного образца кальция пантотената: 0,0500 г кальция пантотената в пересчете на 100% вещество по содержанию азота растворяют в 25% спирте в мерной колбе вместимостью 50 мл и доводят объем раствора тем же спиртом до метки (основной раствор). 1 мл основного раствора содержит 1 мг кальция пантотената. Раствор годен в течение 2 мес при хранении в банке с притертой пробкой при 4-6 град. С. 1 мл основного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора водой до метки. 10 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора водой до метки. 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора водой до метки (рабочий раствор). Рабочий раствор содержит 0,01 мкг кальция пантотената в 1 мл. 2. Построение стандартной кривой: на оси абсцисс откладывают содержание кальция пантотената в колбах стандартного ряда, а на оси ординат - соответствующие им значения процента светопропускания. По полученным точкам строят стандартную кривую. 3. Поддержание тест - культуры: S. ludwigii KM поддерживают на скошенном сусло - агаре, приготовленном из солодового сусла, доведенного до 7 град. Б (Баллинга) с помощью сахарометра, с добавлением 1,5% агара микробиологического. Инкубацию ведут при температуре от 29 до 30 град. С в течение 48 ч. Тест - культуру хранят при температуре от 4 до 6 град. С, пересевают не реже одного раза в месяц. 4. Приготовление основной среды. Состав среды: сахарозы 40 г аммония сульфата (х.ч.) 6 г магния сульфата (х.ч.) 1,4 г натрия хлорида (х.ч.) 1 г калия фосфата однозамещенного (х.ч.) 2 г калия фосфата двузамещенного (х.ч.) 0,2 г тиамина хлорида 0,002 г кислоты никотиновой 0,002 г пиридоксина гидрохлорида 0,0002 г биотина (ТУ 64-5-94-84 ч.д.а. или ч.) 0,000002 г воды до 1 л рН среды до стерилизации 5,5-5,7 (потенциометрически). Сахарозу предварительно обрабатывают углем активированным осветляющим. Для этого к 100 мл 20% раствора сахарозы прибавляют 5 г угля, встряхивают в течение 40 мин и фильтруют через бумажный фильтр. 5. Приготовление посевного материала: небольшое количество 48-часовой культуры S. ludwigii KM переносят петлей в 10 мл среды, состоящей из 5 мл основной среды и 5 мл воды. Инкубацию ведут в течение 2 сут. Затем от 0,2 до 0,5 мл этой суспензии переносят в 15 мл раствора натрия хлорида изотонического 0,9%; мутность используемой суспензии для засева должна быть 96-98% по шкале светопропускания фотоэлектроколориметра - нефелометра при длине волны около 540 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. СТАНДАРТНЫЕ ОБРАЗЦЫ Стандартные образцы - это вещества, с которыми проводят сравнение испытуемых лекарственных средств при проведении их анализа с использованием физико - химических и биологических методов. Стандартные образцы условно разделяют на химические и биологические. Один и тот же образец в соответствии с указаниями частной статьи может использоваться и для физико - химических, и для биологических анализов. Стандартные образцы подразделяются на Государственные стандартные образцы (ГСО), рабочие стандартные образцы (РСО) и стандартные образцы веществ - свидетелей (СОВС). Выпуск Государственных стандартных образцов осуществляют в соответствии с фармакопейной статьей. Фармакопейная статья на ГСО разрабатывается и пересматривается предприятиями (организациями), выпускающими или разрабатывающими лекарственные средства, согласовывается с Государственным научно - исследовательским институтом по стандартизации и контролю лекарственных средств (ГНИИСКЛС) и утверждается в установленном порядке. Аттестацию каждой серии ГСО в соответствии с требованиями фармакопейной статьи осуществляет ГНИИСКЛС. На этикетке ГСО указывают его активность или процентное содержание, при отсутствии этого указания стандартный образец принимают за 100%. В качестве рабочих стандартных образцов используют образцы серийных лекарственных веществ, соответствующие требованиям фармакопейной статьи. При расчете количественного содержания определяемого вещества в лекарственной форме учитывают фактическое содержание данного вещества в РСО. РСО, предназначенные для проведения анализа лекарственных средств с использованием биологических методов, аттестуют в ГНИИСКЛС. Стандартные образцы веществ - свидетелей используют для определения примесей или компонентного состава лекарственных средств. В качестве СОВС могут быть использованы ГСО, РСО, а также вещества, специально изготовленные и аттестованные в порядке, предусмотренном частной фармакопейной статьей. Нормативно - техническую документацию на ГСО необходимо разрабатывать с учетом требований к соответствующему Международному стандартному образцу ВОЗ. Настоящая статья не распространяется на стандартные образцы медицинских иммунобиологических препаратов, а также на стандартные образцы радиофармацевтических препаратов. ТИТРОВАННЫЕ РАСТВОРЫ Общие замечания Титрованными растворами называются растворы точно известной концентрации, предназначенные для целей объемного анализа. Концентрация титрованного раствора (титранта) обычно выражается его молярностью, титром или титром по определенному веществу. Молярность - это выраженное в молях количество растворенного вещества, содержащееся в одном литре раствора. Молярность вычисляется как отношение количества растворенного вещества к объему раствора (размерность - моль/л). Титр - это выраженная в граммах масса растворенного вещества, содержащаяся в одном миллилитре раствора. Титр вычисляют как отношение массы растворенного вещества к объему раствора (размерность - г/мл). Титр титранта по определяемому веществу - это выраженная в граммах масса определяемого вещества, эквивалентная одному миллилитру данного титранта. Титр по определяемому веществу вычисляют, исходя из молярности или титра титранта с учетом стехиометрических коэффициентов уравнения химической реакции, протекающей при титровании, и молярных масс реагирующих веществ (размерность - г/мл). Примечание. Моль представляет собой количество вещества, содержащее столько специфицированных структурных единиц, сколько атомов содержится в 0,012 кг (12 г) изотопа углерода-12, т. е. 23 один моль содержит 6,022 х 10 (число Авогадро) специфицированных структурных единиц вещества. В качестве специфицированных структурных единиц могут быть выбраны элементарные частицы, а также ионы, атомы, молекулы или их доли. В аналитической химии величину этих долей выбирают так, чтобы каждая из них была ответственна за передачу электрона или перенос одной единицы заряда соответственно при протекании окислительно - восстановительных или объемных реакций, лежащих в основе данного аналитического метода. Для обозначения такой доли иона, атома или молекулы принят термин "условная частица" (УЧ). В качестве единицы измерения массы специфицированных структурных единиц и в том числе условных частиц используют 23 атомную единицу массы (углеродную единицу). 6,022 х 10 атомных единиц массы составляют один грамм, следовательно, масса одного моля вещества, выраженная в граммах, численно равна массе выбранной специфицированной структурной единицы, выраженной в атомных единицах массы (углеродных единицах). Для приготовления титрованных растворов применяют химически чистые вещества. Навеску такого вещества растворяют в определенном объеме свежепрокипяченной и охлажденной дистиллированной воды или другого растворителя и тщательно перемешивают. Титрованные растворы можно готовить, пользуясь соответствующими фиксаналами. Если вещество нельзя получить в достаточно чистом виде или его концентрация изменяется при хранении раствора, то готовят раствор приблизительной концентрации, несколько большей, чем необходимо по расчету. Титр полученного раствора устанавливают по стандартному титрованному раствору (фиксаналу) или по точной навеске другого химически чистого вещества, устойчивого при хранении. При установке титра титруемый раствор берут пипеткой и обязательно проводят контрольный опыт. Концентрацию раствора вычисляют одним из указанных ниже способов. Первый способ - по навеске химически чистого вещества. Молярность (М, моль/л) вычисляют по следующей формуле: а х 1000 М = ----------, Э х V где а - навеска химически чистого вещества в граммах; Э - молярная масса условных частиц химически чистого вещества в граммах на |