отчет по бук.эпит. 2022. Оценка показателей клеток буккального эпителия детей города Нижний Тагил
 Скачать 16.41 Kb.
|
|
Оценка показателей клеток буккального эпителия детей города Нижний Тагил. Материалы и методы: Для оценки антимутагенного/антиканцерогенного действия химического фактора использовали микроядерный тест в клетках слизистой полости рта, относящийся к достаточно информативным краткосрочным тестам, используемым для оценки мутагенного риска факторов, поступающих и действующих в ротовой полости и дыхательных путях (Беляева Н.Н., 2005). У обследуемых были взяты соскобы эпителия слизистой оболочки рта. Собранный стерильным деревянным шпателем с внутренней стороны щеки материал наносили на предметное стекло и делали мазок (по одному мазку с каждой щеки). Фиксировали в метаноле, окрашивали метиленовым синем, а затем азур-эозином по Романовскому. Препараты анализировали под микроскопом в проходящем свете при увеличении 10×20, 10×40 и 10×100. Пригодными для анализа считались препараты с хорошо расправленными клетками. К микроядрам относили округлые образования с ровными краями, размером 1/20-1/5 диаметра ядра клетки и окраской, соответствующей окраске основного ядра. Подсчет проводили на 1000 клеток. В каждом препарате определяли количество клеток с микроядрами. Кроме микроядер учитывали дополнительные показатели: протрузии, многоядерные клетки, клетки с перетяжкой ядра, вакуолизацию ядра, кариорексис, кариопикноз, кариолизис, апоптозные тела. Анализ дополнительных кариологических показателей значительно увеличивает объем получаемой информации и позволяет сопоставлять цитотоксическое и цитогенетическое повреждение клеток. [Микроядра – внутриклеточные хроматиновые образования, имеющие собственную оболочку и обособленные от ядра. Микроядра делятся на центромер-позитивные (содержат целые хромосомы) и центромер- негативные (содержат фрагменты хромосом, без кинетохора). Большинство микроядер образуются из запаздывающих хромосом. Также микроядра могут спонтанно формироваться из микроядер, которые присутствуют в материнской клетке, из ядерных фрагментов, возникающих во время митоза или из хромосом, вытолкнутых в миниклетки, с последующим их слиянием с дочерними клетками (Бродский И.Б., 2012)] Микроядра - небольшие ДНК-содержащие образования, состоящие из ацентрических фрагментов хромосом или отставших на стадии ана- или телофазы хромосом. Спонтанное образование микроядер происходит при некорректном выстраивании хромосом в метафазе, при запаздывании хромосом в расхождении и при дефектах формирования хромосомных мостиков на поздних стадиях митоза, также микроядра могут образоваться из микроядер, содержащихся в материнской клетке, из ядерных фрагментов, которые образуются при митозе, и из хромосом, вытолкнутых из ядра с последующим их включением в дочернюю клетку. Микроядра являются патологической структурой, их образование связано с хромосомной нестабильностью, и они могут наблюдаться в клетках любой пролиферирующей ткани. Процессы, лежащие в основе образования микроядер, несомненно, свидетельствуют о снижении жизнеспособности таких клеток, что является маркером нестабильности их функционирования, активизации процессов воспаления и апоптоза. [+есть данные о том, что МЯ – биомаркер канцерогенного эффекта] Протрузии – шаровидные ядерные структуры за пределами основного ядра в цитоплазме, четко ограниченные от ядра и соединяющиеся с ним перемычкой. Частота клеток с протрузиями может свидетельствовать о цитогенетическом эффекте исследуемого фактора, т.к. значительная часть протрузий является результатом разрыва в анафазе митоза хромосомных или хроматидных мостов. Частота клеток с микроядрами и/или с протрузиями является индикатором мутагенного и канцерогенного действия исследуемого фактора. Микроядра и протрузии представляют собой феномен, вероятно, связанный с удалением амплифицированного в результате онкогенных процессов генетического материала (Shimuzu N. et al., 1998; Miele M. et al., 1989). Двуядерные клетки – клетки с двумя отдельно лежащими ядрами, учитывали только отдельно лежащие клетки без наложения друг на друга. Образование двуядерных клеток происходит, по-видимому, в результате деления ядра без деления цитоплазмы. Указывают, что частота двуядерных клеток является индикатором пролиферативной активности. Существуют гипотезы о наличие связи между регенерацией ткани путем увеличения доли делящихся клеток при различных внешних воздействиях и канцерогенезом (Беляева Н.Н.,1997). Клетки с перетяжкой ядра – клетки с центрально расположенной бороздой, как бы перетягивающей ядра, такая борозда может быть смещена к одному из полюсов ядра. Повышение частоты клеток с перетяжкой ядра косвенно указывает на усиление пролиферации в ткани. Такие клетки могут быть образованы в результате повреждения веретена деления или в результате амитоза (непрямого деления ядра). Вакуолизация ядра – образование округлых неокрашенных полостей в ядре в результате лизиса хроматина (Юрченко В.В., 2007). Такое нарушение относят к признакам ранней деструкции ядра (Мейер А.В., 2010). Апоптоз относят к индикаторам генотоксичности, поскольку он является основным механизмом элиминации клеток с генетическими повреждениями (Калаев В.Н., 2014). На ранних стадиях апоптоз проявляется как кариопикноз и кариорексис (Юрченко В.В., 2005). Кариопикноз – дегенеративное изменение ядра, которое сопровождается уменьшением его размена не менее чем в два раза, уплотнением, гомогенным и интенсивным окрашиванием. Кариорексис – дегенеративное изменение ядра в клетке, сопровождающееся распадом его на отдельные интенсивно окрашенные части с гомогенной структурой, которые после лизиса кариолеммы попадают в цитоплазма и подвергаются рассасыванию. Кариолизис – такое дегенеративное изменение ядра в клетке, которое сопровождается потерей способности к окрашиванию хроматина с последующим полным его исчезновением (Калаев В.Н., 2014). Результаты: У обследованного 91 ребенка были обнаружены высокие значения цитогенетических показателей (таблица 1), что говорит о высокой генетической нестабильности, отмечаемой в соматических клетках детей. В работе Беляевой Н.Н. с соавт. (2003) у детей в возрасте 5-8 лет приведена фоновая частота встречаемости клеток с микроядрами, которая составляет 0,42 ± 0,25‰. Степень нарушения генетического гомеостаза указывает на наличие генотоксических факторов в окружении данных обследованных. Дети дошкольного возраста – наиболее чувствительная группа населения, у которых иммунитет как защитная система организма сформирован еще недостаточно. Наличие у них в клетках генетических нарушений служит индикатором стресса и недостаточной способности иммунной системы элиминировать подобные нарушения (Левински М.В., 2008). Обновление буккального эпителия соответствует данным, приводимым другими исследователями (Беляева Н.Н., 2003, Юрченко В.В., 2007, Сычева Л.П., 2008), о чем судили по показателям пролиферации клеток. Повышены показатели клеточного апоптоза (высокая степень вакуолизации ядер, а также показатели поздней деструкции ядра), что является еще одним подтверждением влияния генотоксических факторов на исследованных детей. |