П. Г. Демидова Кафедра органической и биологической химии А. С. Лебедев В. Ю. Орлов Лабораторный контроль лекарственных средств в соответствии с правилами glp и gmp учебнометодическое пособие
 Скачать 0.85 Mb.
|
|
Оборудование: пенициллиновые пузырьки, химические ста- каны на 50 мл, пипетки, мерные цилиндры на 50 и 100 мл. Ход работы Подготовка образцов дибазола Одну таблетку дибазола (0.02 г) разламывают на две части. Одну из них помещают в химический стакан и размалывают до порошкообразного состояния, последовательно приливают 2 мл ДМФА и 23 мл дистиллированной воды. Содержимое энергично перемешивают в течение одной минуты. Полученную суспензию фильтруют. Фильтрат используют для дальнейших операций. Опыт 1. К 1 мл образца дибазола приливают 2–4 капли HCl ( ω = 1 %), а затем вносят одну каплю р-ра иода. Наблюдают за изменениями. Вносят еще 2–8 капель раствора иода и наблю- дают за изменениями, результаты фиксируют в рабочем журнале. Опыт 2. Вторую половинку таблетки дибазола помещают в пенициллиновый пузырек, размалывают до порошкообразного состояния и приливают 0.5 мл H 2 SO 4 (конц.). Ждут одну минуту и фиксируют изменения. Ждут 5–7 минут и фиксируют изменения. Контрольные вопросы 1. Что такое алкалоиды? Какими свойствами они обладают? Какие атомы или функциональные группы определяют данные свойства? Назовите примеры других природных алкалоидов. 2. Опишите фармакологическое действие дибазола. Что такое фармакодинамика и фармакокинетика? 11.2. Качественные реакции на папаверин 1-(3,4-диметоксибензил)-6,7-диметокси- изохинолина гидрохлорид 45 Цель работы: провести качественные реакции на папаверин. Реактивы: таблетки «Папаверин», «Папазол» или субстан- ция папаверина гидрохлорида, азотная кислота (HNO 3 ; конц.), серная кислота (H 2 SO 4 ; конц.), формалин, р-р иода (I 2 ; с = 0.1 моль/л), соляная кислота (HCl; ω = 1 %) фосфорномолиб- деновая кислота (H 3 PO 4 *12MoO 3 *2H 2 O; ω = 10 %). Оборудование: фарфоровая (или агатовая) ступка и пестик, пипетки, пипет-дозаторы, химические термостойкие стаканы, пу- зырьки объемом 10 мл, бюксы, мерные цилиндры, воронки, филь- тровальная бумага, электроплитка, весы аналитические, шпатели. Ход работы Подготовка образца папаверина 5–6 таблеток папаверина размалывают в ступке до однород- ного порошкообразного состояния. Опыт 1. В пенициллиновый пузырек помещают 0.02 г образ- ца и приливают 1 мл HNO 3 (конц.). Раствор выстаивают 2–3 ми- нуты и наблюдают за изменением окраски. Опыт 2. В пенициллиновый пузырек помещают 0.02 г образ- ца и приливают 1 мл H 2 SO 4 (конц.). Раствор выстаивают 2–5 ми- нут и наблюдают за изменением окраски. Далее пузырек нагре- вают на электроплитке, отмечают протекающие изменения. Опыт 3. Реакция Соболевой. В пенициллиновый пузырек вносят последовательно 0.02 г размолотого папаверина, 0.5 мл концентрированной серной кислоты. Затем по каплям приливают раствор формалина. Отмечают последовательные изменения окраски. Результаты фиксируют в лабораторном журнале. Опыт 4. Реакция Бушарда, Вагнера, Люголя. В химиче- ском стакане на 50 мл взвешивают 0.05 г образца, приливают 20 мл дистиллированной воды. Суспензию встряхивают в тече- ние 3–5 минут, затем фильтруют через фильтровальную бумагу. В пузырек отбирают 4 мл фильтрата, вносят 1–2 капли HCl ( ω = 1 %) и добавляют несколько капель раствора йода (реактив Бушарда, Вагнера, Люголя). Наблюдают за изменениями. Опыт 5. 4 мл ранее полученного фильтрата вносят в пени- циллиновый пузырек, приливают 2–4 капли фосфорномолибде- новой кислоты ( ω = 10 %) и нагревают на электроплитке до нача- ла кипения. Наблюдают за изменениями. 46 Контрольные вопросы 1. За счет чего папаверин образует соль с соляной кислотой? Почему используется именно соляная кислота? 2. Каковы механизмы реакций, протекающих в данной лабо- раторной работе в опытах 1–3? Опишите атакующие агенты и то, как они образуются. 3. Что такое реактив Марки? Почему реакция не будет идти в присутствии разбавленной серной кислоты? 4. Что такое реактив Бушарда, Вагнера, Люголя? За счет чего удается растворить йод в полярном растворителе? Лабораторная работа 12 12.1. Качественные реакции на парацетамол Цель работы: провести качественные реакции на парацетамол. Реактивы: таблетки «Парацетамол-МС», раствор хлорида же- леза(III) 6-водного (FeCl 3 *6H 2 O; c = 1 г/л), раствор бихромата калия (K 2 Cr 2 O 7 ; c = 2 г/л), кислота соляная (HCl; ω = 10 %), ДМФА. Оборудование: пипетки, химические термостойкие стаканы, пузырьки объемом 10 мл, электроплитка, фарфоровая (или агато- вая) ступка и пестик, колба Бунзена, воронка Бюхнера, кониче- ские колбы, воронки, мерные цилиндры, весы аналитические. Ход работы Подготовка образца парацетамола Берут 4–5 таблеток парацетамола и при помощи пестика раз- малывают таблетки в мелкий порошок. Отбирают 0.5 г парацета- мола в емкость (например, в пенициллиновый пузырек или бюкс) и приливают 2 мл ДМФА. Полученную суспензию перемешивают 2–3 минуты. Органическую фазу количественно переносят в химический термостойкий стакан при помощи 25 мл дистиллиро- ванной воды. Полученный раствор также энергично перемешива- ют. Если есть комочки, их растирают стеклянной палочкой. Далее раствор фильтруют через фильтровальную бумагу либо под вакуу- мом. Полученный раствор используют для дальнейшего анализа. Опыт 1. В пенициллиновый пузырек переносят 2 мл подго- товленного образца парацетамола, а затем приливают 2 мл р-ра 47 FeCl 3 *6H 2 O (c = 1 г/л). Наблюдают полученный результат и фик- сируют его в лабораторный журнал. Опыт 2. В один пенициллиновый пузырек вносят 5 мл об- разца парацетамола, а в другой — 5 мл дистиллированной воды, в оба пузырька вносят 4–5 капель HCl ( ω = 10 %) и кипятят на электрической плитке 2 минуты. Далее растворы охлаждают до 50–60 o C и вносят 2 мл р-ра K 2 Cr 2 O 7 (c = 2 г/л). Растворы снова кипятят на электрической плитке 1–3 минуты. Отмечают полу- ченные изменения, делают соответствующие выводы. Контрольные вопросы 1. Какое соединение образуется в первом опыте? 2. Для чего нужен раствор бихромата калия, соляной кислоты и воды? Напишите уравнения протекающих реакций (опыт 2). 12.2. Реакции подлинности на фурацилин 2-[(5-Нитро-2-фуранил)метилен]гидразинкарбоксамид Цель работы: провести качественные реакции на параце- тамол. Реактивы: водно-органический р-р фурацилина, гидроокись натрия (NaOH; ω = 10 %). Оборудование: пипетки, пипет-дозаторы, химические тер- мостойкие стаканы, электроплитка, мерные цилиндры. Ход работы В термостойкий химический стакан на 50 мл помещают 2–4 мл водно-органического раствора фурацилина, приливают 20 мл дистиллированной воды. При наличии взвеси раствор по- догревают, не допуская кипения. Далее вносят 2 мл NaOH (ω = 10 %) и наблюдают за изменениями. Полученный раствор кипятят 10–15 минут и наблюдают за изменением окраски. 48 Контрольные вопросы 1. Что обусловливает желтую окраску соединения и раствора фурацилина? Что такое основные и дополнительные цвета? 2. Чем обусловлена смена окраски раствора фурацилина при добавлении щелочи? Лабораторная работа 13 13.1. Различие аминокислот по способности к комплексообразованию Цель работы: провести качественное определение амино- кислот при помощи реакции комплексообразования. Реактивы: раствор 2-аминоуксусной кислоты (ω = 1 %), рас- твор аминоэтансульфоновой кислоты (ω = 1 %), гидроокись натрия (NaOH; ω = 10 %), медь сернокислая 5-водная (CuSO 4 *5H 2 O; ω = 4 %). Оборудование: стаканы химические, пузырьки объемом 10 мл, пипетки, пипет-дозаторы, пробирки. Ход работы В один из пенициллиновых пузырьков вносят 2 мл раствора 2-аминоуксусной кислоты (ω = 41 %), в другой — 2 мл раствора аминоэтансульфоновой кислоты (ω = 1 %). В каждую из емкостей вносят 2 мл 10 % раствора NaOH (ω = 10 %) и 0.2 мл раствора CuSO 4 *5H 2 O (ω = 4 %). Наблюдают за ходом реакций, делают со- ответствующие выводы Контрольные вопросы 1. Назовите тривиальные названия аминокислот, используе- мых в лабораторной работе. Изобразите полученные комплекс- ные соединения. Укажите биологическое значение данных ами- нокислот. 13.2. Взаимодействие 2-аминоуксусной кислоты с ионами Fe 2+ и Fe 3+ Цель работы: провести реакции 2-аминоуксусной кислоты с солями Fe 2+ и Fe 3+ 49 Реактивы: сульфат железа (III) (Fe 2 (SO 4 ) 3 , сух.), сульфат же- леза (II) (FeSO 4 , сух.), раствор 2-аминоуксусной кислоты (ω = 1 %). Оборудование: стаканы химические объемом 50 мл, пузырь- ки объемом 10 мл, пипетки, пипет-дозаторы, пробирки, шпатели, весы аналитические, плитка электрическая. Ход работы В две химические емкости помещают 0.05 г. Fe 2 (SO 4 ) 3 (сух.) и FeSO 4 (сух.) соответственно (одно соединение — одна емкость). Приливают 10 мл дистиллированной воды и нагревают на электроплитке до растворения. В обе емкости вносят 3 мл рас- твора 2-аминоуксусной кислоты (ω = 1 %). Оба раствора подогре- вают до начала кипения, наблюдают за изменением окраски. Отме- чают протекание соответствующих реакций, делают выводы. Контрольные вопросы 1. Предположите, как в фармацевтической отрасли исполь- зуют данные реакции. 50 Литература 1. ГОСТ Р 52249-2009. Правила производства и контроля ка- чества лекарственных средств. Good manufacturing practice for medicinal products (GMP). — URL : http://docs.cntd.ru/document/ 1200071754 2. ОСТ 42-510-98. Правила организации производства и кон- троля качества лекарственных средств (GMP). — URL : http://docs.cntd.ru/document/901755081 3. ГОСТ Р ИСО 9001-2008. Системы менеджмента качества. Требования. Quality management systems. Requirements. — URL : http://docs.cntd.ru/document/1200068732 4. Приказ Минпромторга России от 14.06.2013 № 916 «Об утверждении Правил надлежащей производственной прак- тики». — URL : http://pharmacta.ru/docs/internal/ Order_Minprom_916.pdf 5. Директива 2003/94/ЕС от 08.10.2003 «Об установлении основных принципов и правил надлежащей производственной практики лекарственных препаратов для человека и исследуемых лекарственных препаратов для человека». — URL : https://ec.europa.eu/health/sites/health/files/files/eudralex/vol- 1/dir_2003_94/dir_2003_94_en.pdf 6. ICH Q8, «Фармацевтическая разработка» (ICH Q8 — Pharmaceutical Development). — URL : https://b- ok.xyz/dl/2525830/dffbb6 7. ICH Q10 «Фармацевтическая система качества» (ICH Q10 — Pharmaceutical Quality System). — URL : https://www.ich.org/fileadmin/Public_Web_Site/ICH_Products/Guide lines/Quality/Q10/Step4/Q10_Guideline.pdf 8. ОФС.l.l.0012.15. Валидация аналитических методик. — URL : http://pharmacopoeia.ru/ofs-1-1-0012-15-validatsiya- analiticheskih-metodik/ 9.ICH Q2 (R1). Руководство по валидации аналитических методик проведения испытаний лекарственных средств (Valida- tion of analytical procedures: Text and Methodology). — URL : https://www.ich.org/fileadmin/Public_Web_Site/ICH_Products/Guide lines/Quality/Q2_R1/Step4/Q2_R1__Guideline.pdf 51 Оглавление 1. Концепция надлежащих практик GxP. Жизненный цикл лекарственных средств и препаратов .......... 3 2. Валидация аналитических методик ....................................... 9 Лабораторные работы ............................................................... 21 Лабораторная работа 1 .............................................................. 21 Лабораторная работа 2 .............................................................. 23 Лабораторная работа 3 .............................................................. 25 Лабораторная работа 4 .............................................................. 27 Лабораторная работа 5 .............................................................. 29 Лабораторная работа 6 .............................................................. 31 Лабораторная работа 7 .............................................................. 33 Лабораторная работа 8 .............................................................. 37 Лабораторная работа 9 .............................................................. 39 Лабораторная работа 10 ............................................................ 41 Лабораторная работа 11 ............................................................ 43 Лабораторная работа 12 ............................................................ 46 Лабораторная работа 13 ............................................................ 48 Литература ................................................................................. 50 52 Учебное издание Лебедев Антон Сергеевич Орлов Владимир Юрьевич Лабораторный контроль лекарственных средств в соответствии с правилами GLP и GMP Учебно-методическое пособие Редактор, корректор М. Э. Левакова Верстка М. Э. Леваковой Подписано в печать 06.03.2019. Формат 60×84 1/16. Усл. печ. л. 3,02. Уч.-изд. л. 2,2. Тираж 2 экз. Заказ Оригинал-макет подготовлен в редакционно-издательском отделе ЯрГУ. Ярославский государственный университет им. П. Г. Демидова. 150003, Ярославль, ул. Советская, 14. |