Документ. Подготовка материала для гистохимического исследования
 Скачать 13.8 Kb.
|
|
Подготовка материала для гистохимического исследования. Для проведения гистохимических исследований необходима строгая прижизненная локализация искомого химического соединения, что возможно лишь при сохранении структуры тканей и клеток в состоянии, близком к тому, которое имеется в живом организме. Это достигается получением срезов свежезамороженных тканей с помощью ножа глубокого охлаждения и криостата. Каждый метод должен быть специфичным, то есть избирательно выявлять группу определенных веществ или определенное химическое вещество, а также высокочувствительным. Изготовление постоянного гистологического препарата включает в себя следующие этапы: фиксацию клеток или тканей, их обезвоживание, заливку в парафин или иную пластичную среду, изготовление срезов, монтаж срезов на предметном стекле, депарафинизация, окрашивание, обезвоживание, заключение в прозрачную среду. Для приготовления препарата, который можно наблюдать в микроскоп, необходимо обработать ткань фиксатором – веществом или смесью веществ, которые должны быстро остановить все метаболические процессы в ткани, то есть сохранить клетки и межклеточное вещество в максимально нативном состоянии. В качестве фиксаторов могут быть использованы этиловый и метиловый спирты, уксусная кислота и ее смеси с этиловым спиртом и формалином в разных соотношениях, ацетон, а также разнообразные сложные смеси на основе хромовой кислоты, двухромовокислого калия, сулемы, многие фиксирующие смеси фиксатор Бродского, фиксатор Шабадаша, фиксатор Карнуа и т.д. Для того, чтобы иметь возможность исследовать под световым микроскопом ткань, необходимо сделать ее гистологические срезы. Для изготовления срезов их необходимо заключить в плотную заливочную среду. Предназначенный для исследования зафиксированный фрагмент ткани после обезвоживают и помещают в расплавленный парафин, которым пропитывают ткань. После охлаждения получается твердый образец, который можно использовать для изготовления гистологических срезов с помощью специальных приборов – микротомов. Изготовленные на микротоме срезы переносят на предметное стекло и закрепляют. Поскольку большинство гистохимических красителей растворимы в воде, для того, чтобы окрасить смонтированные на стекле срезы, необходимо удалить парафин, а затем регидратировать срезы в спиртах понижающейся концентрации. После регидратации препарат готов к окрашиванию выбранным гистологическим красителем. Кроме парафиновых срезов также широко используют криосрезы, которые готовят из замороженных кусочков ткани. Для изготовления криосрезов используют криостаты – специальные микротомы. Депарафинирование — удаление парафина из срезов. В лабораторный стакан наливаем ксилол, составляем в него стёкла, стакан закрываем крышкой и помещаем в термостат на 30 минут t 58-59°. после стёкла переставляем в 96% спирт на 30 минут комнатная температура. После промываем в сосуде с тёплой водой и высушиваем салфеткой. |