Главная страница
Навигация по странице:

  • 1. Исследование процессов биологического окисления в животных тканях

  • практикум строев. Практикум по биологической химии, изданный в 1986 году, подвергся существенной переработке, а также дополнен новыми лабораторными работами в разделах белки, липиды,


    Скачать 1.74 Mb.
    НазваниеПрактикум по биологической химии, изданный в 1986 году, подвергся существенной переработке, а также дополнен новыми лабораторными работами в разделах белки, липиды,
    Анкорпрактикум строев.docx
    Дата18.05.2017
    Размер1.74 Mb.
    Формат файлаdocx
    Имя файлапрактикум строев.docx
    ТипПрактикум
    #7805
    страница19 из 39
    1   ...   15   16   17   18   19   20   21   22   ...   39

    ЭНЕРГЕТИЧЕСКИЙ ОБМЕН


    (биоэнергетика)
    Существует два основных типа энергетики живых организмов – фототрофный и хемотрофный. Первым обладают растения и фотосинтезирующие микроорганизмы, которые преобразуют энергию солнечного света в энергию фосфатных связей АТФ, а вторым – клетки организмов, в том числе человека и животных, использующие для образования АТФ энергию окислительно-восстановительных реакций.

    Основная часть энергии в тканях человека и животных образуется аэробным путем в ходе окислительного фосфорилирования в митохондриях. Анаэробное образование энергии происходит в процессе гликолиза (гликогенолиза). Однако он играет вспомогательную роль.

    Упрощенно аэробное образование энергии можно представить следующей схемой:
    Эффективность этого процесса зависит от активности дегидрогеназного звена (т.е. от наличия субстратов окисления S·H2 и активности дегидрогеназ), которое обеспечивает поступление водорода, связанного с НАД или ФАД, на дыхательную цепь митохондрий, а также от сопряжения дыхания и фосфорилирования (см. учебник с.204-214).


    1. Исследование процессов биологического окисления

    в животных тканях


    Работа 39. Обнаружение цитохромоксидазы в мышечной ткани



    Цитохромоксидаза, или комплекс цитохромов а + а3, является заключительным компонентом дыхательной цепи митохондрий животных и растительных клеток. Этот фермент переносит электроны на кислород. Он прочно связан с внутренней мембраной митохондрий и извлекается только при ее разрушении. Цитохромоксидаза может окислять ряд синтетических субстратов, например, α-нафтол и N,N΄-диметил-n-фенилендиамин (реактив НАДИ, названный по первым слогам обоих соединений). Реактив НАДИ используется для обнаружения этого фермента в тканях.
    Реактивы. Реактив «НАДИ»*.

    Оборудование. Ступка с пестиком; воронка для фильтрования; фильтровальная бумага; ножницы; стеклянные палочки; марля или бинт; пипетки вместимостью 1 мл; мерный цилиндр; водяная баня; аптечные весы с разновесами.

    Материал. Мышечная ткань (свежая) забитого животного.
    Метод основан на образовании в ходе реакции окисления диметил-n-фенилендиамина и α-нафтола цитохромоксидазой индофенолового голубого, интенсивность синей окраски которого пропорциональна активности фермента:


    Ход определения. 5 г мышечной ткани измельчают ножницами и тщательно растирают в ступке, добавляя порциями 20 мл дистиллированной воды. Мышечную кашицу фильтруют через двойной слой марли и многократно промывают дистиллированной водой до бесцветной окраски промывных вод.

    Бесцветную массу, которая содержит цитохромоксидазу, комплекс цитохромов и некоторые дегидрогеназы, отжимают между листами фильтровальной бумаги. Полученный остаток кашицы делят на три части: одну переносят в пробирку, а две другие оставляют на фильтровальной бумаге.

    К кашице в пробирке приливают 1 мл дистиллированной воды и кипятят содержимое на водяной бане 1 мин. Пробирку охлаждают, осторожно сливают жидкость и мышечную кашицу с помощью стеклянной палочки переносят на другой лист фильтровальной бумаги.

    На первую порцию мышечной кашицы (кипяченую) и вторую (некипяченую) наносят по 2-3 капли реактива НАДИ, третью (тоже некипяченую) – сначала смачивают раствором азида натрия, а через 3 мин на нее наносят 2-3 капли реактива НАДИ. Сравнивают характерные окраски проб.

    Оформление работы. Результаты оформить в виде таблицы.


    № пробы

    Материал

    Фермент

    Субстраты

    Условия опыта


    Окраска пробы

    температурная обработка

    ингибиторы
    1   ...   15   16   17   18   19   20   21   22   ...   39


    написать администратору сайта