Правила отбора проб патологического материала. Правила отбора проб патологического материала и его подготовки к исследованию
 Скачать 121.16 Kb.
|
|
ФГОУ ВПО МГАВМ и Б им. К.И. Скрябина Кафедра Микробиологии Реферат на тему: «Правила отбора проб патологического материала и его подготовки к исследованию».  Выполнила студентка2-ого курса 12 группы ФВМ Раннева Полина. Содержание: Введение……………………………………………………………………………..1 Общая информация о бактериологических исследованиях………………………1 Правила отбора проб патологического материала для микробиологического исследования…………………………………………………………………………3 Взятие и пересылка материала при микозах……………………………………….16 Взятие и пересылка материала для исследования на болезни рыб……………….17 Взятие и пересылка материала для исследования на болезни пчел и тутового шелкопряда……………………………………………………………………………19 Взятие и отправка патологического материала от трупов, павших и больных животных при подозрении на отравление……………………………………………………….19 Сопроводительные документы……………………………………………………….21 Взятие крови для серологического исследования…………………………………...22 Правила приема материала в лабораторию для исследования……………………...25 Заключение……………………………………………………………………………..26 Введение: Чтобы выделить чистую культуру, сделать посев, окрасить мазок, посмотреть чувствительность к антибиотикам, патологический материал нужно собрать и доставить в лабораторию. Естественно, при этом нужно соблюдать меры собственной безопасности, избежать риска эпизоотий, и, чтобы собранный и доставленный материал нёс интересующую нас информацию, а не все, что было в окружающей среде при его взятии. Для этого нужно знать правила и методы отбора проб патологического материала, знать, как правильно подготовить материал к исследованию, чтобы оно получилось наиболее точным и информативным. Общая информация о бактериологических исследованиях. Установление этиологии заболевания облегчает и уточняет постановку диагноза. Лабораторное исследование является одним из многих объективных методов, и пользоваться им следует рационально. Неправильная оценка данных лабораторного исследования может привести к диагностическим ошибкам. Так, получение отрицательного результата — еще не основание для исключения предполагаемого диагноза. Отрицательный результат может быть следствием неправильного забора материала, несвоевременной доставки его в лабораторию, несовершенной методики бактериологического исследования. Если материал берется не в первые дни заболевания, а уже на фоне этиотропной терапии, возбудитель может быть не выделен из-за угнетения его жизнеспособности или гибели под действием проводимого лечения. Наибольшие трудности для интерпретации положительных находок при бактериологическом исследовании представляет выделение условно-патогенных видов бактерий, широко распространенных среди семейств Micrococсаеае и Enterobacteriaceae. Поэтому при постановке диагноза заболеваний, вызванных условно-патогенными возбудителями, надо проявлять осторожность и исходить из 4 критериев: многократности обнаружения данных видов, массивности их роста в посевах на плотные питательные среды, антигенной и фаговаровой однородности выделяемых субкультур и диагностического нарастания титров гомологичных антител при серологических исследованиях. Микробиологические методы исследования делятся на методы прямого обнаружения возбудителя в организме больного — бактериоскопическое и бактериологическое исследования; методы косвенного доказательства наличия возбудителя в организме больного — серологические исследования, направленные на обнаружение специфических антигенов в инфицированном материале или антител в сыворотке крови и различных секретах организма больного. Бактериоскопическое исследование крови, мочи, спинномозговой жидкости, слизи из зева и носа, кала и различных патологических субстратов на присутствие возбудителя применяют при многих инфекционных болезнях. Этот метод имеет довольно ограниченное применение, хотя и очень важен. Преимущество бактериоскопического метода заключается в его быстроте. Результаты анализа могут быть получены через несколько часов. При некоторых заболеваниях возбудители могут быть обнаружены в организме больного уже в 1-й день болезни, что очень важно для своевременной диагностики и лечения. Значительно расширились возможности, бактериоскопической диагностики благодаря обработке препаратов специфическими сыворотками, содержащими антитела к данному возбудителю, меченные флуорохромами (иммунофлуоресцентный метод) или ферментами (иммуноферментный метод). При этом меченые антитела соединяются с антигеном, который выявляется при иммунофлуоресцентном методе под люминесцентным микроскопом, а при иммуноферментном методе — по окрашиванию продукта ферментативной реакции после введения субстратно-индикаторной смеси. Бактериологический метод диагностики основан на выделении возбудителя из крови, спинномозговой жидкости, мокроты, слизи из зева и носа, кала, мочи, желчи больного, а при летальных исходах — из кусочков органов, которые засевают на специальные питательные среды. Бактериологическая диагностика широко используется для исследования слизи из зева и носа на дифтерийные бактерии, для выделения возбудителей кишечных инфекций (например, сальмонеллезов, эшерихиозов) из кала больного, возбудителей пневмонии — из мокроты и в других случаях. При этом учитывают особенности предполагаемой инфекции, место избирательной локализации возбудителя и пути его выделения в окружающую среду. Исследование дает положительные результаты уже в первые часы или дни болезни. Однако окончательный ответ лаборатория при большинстве инфекционных болезней сообщает лишь через 2—4 дня, а при бруцеллезе, туберкулезе — через 3—4 недель. Это зависит от сроков, требующихся для роста микроорганизмов и их идентификации (биохимической и серологической). Каждый микроб для своего роста требует соответствующей питательной среды. В зависимости от того, какой микроб предполагают выделить (что определяется при клиническом и эпидемиологическом обследовании больного) , выбирают соответствующую питательную среду. Иногда посев производят одновременно на несколько питательных сред. Ценность результатов бактериологических исследований во многом определяется тем, правильно ли взят материал у больного и правильно ли он доставлен в лабораторию. Инфекционный материал собирают в стерильную посуду, соблюдая правила асептики. Материал для исследования в самые короткие сроки должен быть доставлен в лабораторию. Если такой возможности нет, его нужно сохранять в холодильнике при +4 °С или добавлять консервант. В некоторых случаях посев необходимо производить ex tempore (при коклюше, менингококковой инфекции, гонорее). После выделения и идентификации возбудителей, как правило, определяют их чувствительность к антибиотикам и другим химиопрепаратам. Это во многом помогает скорректировать терапию и подобрать эффективное этиотропное средство. При инфекциях, вызываемых условно-патогенными бактериями, выделение их из субстратов, в норме не являющихся стерильными (кал, моча, мокрота и др.), не рассматривается как безусловное доказательство этиологической роли этих микроорганизмов в генезе заболевания. Обсемененность эндогенной микрофлорой у больных значительно выше, чем у бактерионосителей. Поэтому только количественный учет высеянных микроорганизмов животных заражают подозрительным материалом (биопроба на мышах при пневмококковой инфекции). Правила отбора проб патологического материала для микробиологического исследования. Патологический материал необходимо брать стерильными инструментами в стерильную посуду. Поверхность органа (ткани), от которого берут патологический материал, на месте разреза следует обжечь над пламенем или прижечь нагретой металлической пластинкой. Патологический материал должен быть взят как можно раньше после смерти животного, особенно в теплое время года. Начавшееся разложение трупа может сделать его негодным для исследования. Патологический материал отправляют в лабораторию в неконсервированном виде; в том случае, если невозможно доставить его в лабораторию в течение ближайших 24-30 часов, патологический материал посылают только в консервированном виде. Для бактериологического исследования патологический материал (органы или их части) консервируют 30%-ным водным раствором химически чистого глицерина. Воду предварительно стерилизуют кипячением или автоклавированием в течение 30 минут. Материал можно консервировать также в стерильном вазелиновом масле. Материал заливают консервирующей жидкостью в количестве, в 4-5 раз превышающем его объем. Небольшие трупы павших животных (поросят, ягнят, телят), а также трупы мелких животных лучше посылать целыми в непроницаемой таре. Трубчатые кости. Посылаются на исследование в целом виде, с неповрежденными концами, тщательно очистив их от мышц и сухожилий. Кости завертывают в марлю или полотно, смоченное дезинфицирующей жидкостью (5%-ным раствором карболовой кислоты). Кости можно также посыпать поваренной солью и завернуть в полотно или марлю. Кишечникперед посылкой для бактериологического исследования освобождают от фекальных масс, а концы кишечника перевязывают. На исследование посылают части кишечника с наиболее характерными патологическими изменениями. Кишечник помещают в банки с 30-40%-ным водным раствором глицерина или насыщенным водным раствором поваренной соли. Объем консервирующей жидкости должен превышать объем взятого материала в 5-7 раз. Кал для исследования отправляют в стерильных стаканах, пробирках или банках, которые хорошо закрывают пергаментной бумагой. От трупов животных кал можно послать в отрезке невскрытого кишечника, завязанного с обоих концов. Кал в лабораторию должен быть доставлен не позднее 24 часов после его взятия. При посылке для исследования участков кожи берут наиболее пораженные кусочки ее размером 10×10 см. Кусочки кожи посылают в стерильной, герметически закупоренной посуде. Приготовление мазков. Кровь, гной, слизь, экссудат, мочу, желчь и другой жидкий патологический материал для бактериологического и вирусологического исследований посылают в запаянных пастеровских пипетках, стерильных пробирках или во флаконах, хорошо закрытых стерильными резиновыми пробками. Кровь, гной, выделения из различных полостей, естественных отверстий и др. посылают для микроскопического исследования (для обнаружения в них микробов, кровепаразитов и для определения лейкоцитарной формулы) в виде мазков. Предметные стекла предварительно кипятят в течение 10-15 минут в 1-2%-ном водном растворе соды, затем хорошо промывают чистой водой и насухо вытирают. Сухие стекла помещают в раствор спирт-эфира, взятых в равных частях, где и хранят до употребления. У животных кровь берут из вены ушной раковины или края верхушки уха, у птиц — с поверхности гребня или подкрыльцовой вены. Шерсть на месте взятия крови выстригают или выбривают, кожу тщательно протирают ватными тампонами, смоченными сначала спиртом и затем эфиром. Инструменты (иглы, скальпель) должны быть стерильными. Первую каплю крови удаляют стерильной ватой (исключение делается при исследовании крови на гемоспоридиозы, когда берут для мазка первую каплю крови), а следующую свободно выступившую каплю крови берут на предварительно подготовленное предметное стекло путем быстрого и легкого прикосновения к капле поверхностью стекла. Затем стекло быстро поворачивают вверх каплей и удерживают между пальцами левой руки в горизонтальном положении. К левому краю капли прикасаются под углом 45°С шлифованным краем другого предметного (или покровного) стекла. Как только капля равномерно распределится по ребру этого стекла, его быстро проводят по поверхности предметного стекла слева направо, не доводя его до края на 0,5-1 см. Ширина мазков должна быть уже предметного стекла. Для каждого нового мазка берут свежую каплю крови. Готовые мазки крови высушивают на воздухе; подсушивать их над пламенем или на солнце не рекомендуется. В холодное время года мазки делают в теплом помещении или на стеклах, подогретых на крышке теплого стерилизатора. Метод фиксации мазков зависит от цели исследования. Правильно приготовленные мазки крови должны быть тонкими, равномерными и достаточной длины. На высушенных мазках и отпечатках острым предметом делают надпись с указанием номера или клички животного и даты приготовления мазка. Мазки из тканей, гноя, органов и различных выделений готовят путем размазывания материала на предметном стекле стерильной палочкой или ребром другого предметного стекла до тонкого слоя. Частицы органов плотной консистенции, твердые узелки, а также вязкий материал целесообразно заключать между двумя предметными стеклами. После растирания помещенного между ними материала стекла разъединяют в противоположные стороны в горизонтальном направлении, в результате чего получаются два довольно тонких мазка. Иногда получают так называемые препараты-отпечатки. Для этого вырезанный острым скальпелем кусочек органа захватывают пинцетом и свободной поверхностью кусочка делают на стекле несколько тонких отпечатков. Секрет молочной железы. Сосок обмывают водой, обрабатывают тампонами, смоченными в этаноле (70%). Первые порции молока сливают, последующие сцеживают в стерильные пробирки, транспортируют в лабораторию, исследуют в течении 3-х часов. Материал при инфекции дыхательных путей. При отборе материала с поверхности слизистой носа стерильный ватный тампон вводят в носовой ход, вращательными движениями собирают материал со слизистой. Для взятия материала из зева шпателем прижимают язык, стерильным тампоном собирают материал с миндалин, задней поверхности глотки. При поражении нижних дыхательных путей наиболее доступна для исследования мокрота, которую собирают до приема корма. Из трахеи материал берут при помощи трахеотубуса и ватного тампона на проволоке. При глубоком (до бифуркации введения тампона возникает кашель, и удается получить бронхиальную слизь. Тампон с материалом помещают в пробирку со стерильным физиологическим раствором. Сроки доставки мокроты в лабораторию должны быть не более 2-х часов. Материал при инфекции глаз. Материал с конъюктивы берут увлажненным ватным тампоном вращательными движениями. При получении соскобов с роговицы предварительно закапывают 1… 2 капли анестетика, делают 3… 4 соскоба с изъязвленных участков роговицы. Внутриглазную жидкость берут путем пункции передней камеры глаза. Материал транспортируют в лабораторию непосредственно в закрытом шприце, или транспортной среде. Отбор материала при воспалении наружного уха. Кожу обрабатывают этанолом (70%)Ю промывают стерильным физиологическим раствором, материал берут стерильным ватным тампоном. Кровь. Рекомендуется брать кровь при лихорадочных состояниях стерильным шприцом в количестве 15…20 мл. Кожу предварительно обрабатывают 70 % этанолом, затем настойкой йода (1…2%) в течение 30 сек. Целесообразно из шприца материал сразу выливать во флаконы с питательной средой. Резиновую пробку флакона обрабатывают этанолом, настойкой йода, и прокаливают иглой шприца. Жидкость из стерильных полостей (плевральная, перитонеальная, суставная). Кожу в области пункции обрабатывают этанолом, настойкой йода. Материал берут при помощи стерильного шприца. Перед посевом материал центрифугируют при 3000 оборатах в минуту, в течение 20…30 минут в стерильных пробирках, посев производят из осадка. Моча. Наружные половые органы обмывают водой, ополаскивают стерильным физиологическим раствором, осушают стерильной марлевой салфеткой, тампоном. Первую порцию мочи не берут, последующую помещают в стерильную посуду. Моча даже здорового животного содержит бактерии, поэтому мочу следует доставлять в лабораторию в кратчайшие сроки. Допускается ее хранение в холодильнике в течение 18 часов. Соблюдение данных условий позволяет не только выделить возбудителя, но и провести количественную оценку содержания бактерий в моче. Взятие кала для исследования на дисбактериоз кишечника и кишечные инфекции. Показаниями для исследования на дисбактериоз являются: затянувшийся период восстановления после острых кишечных инфекций, длительные кишечные расстройства, при которых не удается выявить специфический возбудитель, длительная антибиотикотерапия и т.д. От момента последнего принятия корма до взятия материала должно пройти не менее 8…10 часов. Для количественной оценки содержания бактерий различных групп кал после естественной дефекации собирают в стерильную, герметически закрывающуюся посуду в количестве не менее 2 г и доставляют в лабораторию не позднее 2 часов после забора, посев должен быть произведен не позднее 4 часов после взятия материала. Для объективной трактовки полученных результатов целесообразно проводить 2…3 кратные исследования с интервалом в 1…2 дня. Для обнаружения возбудителей инфекционных болезней кал берут стерильным ватным тампоном, которые вводят на глубину 8…10 см в прямую кишку и затем помещают в стерильную пробирку. Взятие материала из половых органов. Вагинальное отделяемое забирают при помощи стерильного ватного тампона. У крупных животных, например, коров – цервикальную, вагинальную слизь берут с помощью пипеток длиной 40…59 см, употребляемых для искусственного осеменения. Пипетки соединяют короткой резиновой трубочкой со шприцем, набирают 2 мл стерильного физиологического раствора и вводят его во влагалище или шейку матки, а затем выливают жидкость в стерильную пробирку. Материал от самцов обычно получают в виде препуциальных смывов. Предварительно проводят санитарную обработку препуция, затем в препуциальную полость вводят необходимое количество стерильного физиологического раствора при помощи шприца и полистироловой пипетки, массируют препуций, и отсасывают смывную жидкость. |