1Окраска по Граму практика. Правила работы в бактериологической лаборатории. Морфология микроорганизмов. Приготовление и окраска мазков. Окраска по методу
 Скачать 152.98 Kb.
|
|
1 Правила работы в бактериологической лаборатории. Морфология микроорганизмов. Приготовление и окраска мазков. Окраска по методу Грама. Правила работы в бактериологической лаборатории. 1. не заразить себя и окружающих. 2. сохранить чистоту бактериальной культуры. Этапы приготовления мазка. 1. на обезжиренное стекло нанести каплю физиологического раствора 2. бактериологической петлей внести в каплю исследуемую культуру микробов и распределить тонким слоем на стекле 3. высушить мазок над пламенем спиртовки 4. зафиксировать мазок в пламени спиртовки или жидким фиксатором (мазки из мокроты, крови) 5. окрасить мазок Тинкториальные свойства – это способность воспринимать и удерживать красители – зависят от особенностей строения и химического состава бактериальной клетки. Методы окраски простые сложные Простая окраска – это использование одного красителя (например, метиленового синего, водного фуксина). Сложная окраска – это использование нескольких красителей и других химических веществ (спиртов, кислот, щелочей). Она служит для дифференциации микроорганизмов. Существуют специальные сложные методы окраски, которые используют для выявления структурных компонентов бактерий: жгутиков, капсул и разных цитоплазматических включений. К сложным методам окраски относится, например, окраска по Граму. Большинство кокков являются Гр + ( за исключением возбудителей менингита и гонореи), а большинство палочек Гр - Этапы окраски по Граму 1. На фиксированный мазок нанести карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 1- 2 минуты ее снять, а краситель слить. 2. Нанести раствор Люголя на 1-2 минуты. 3. Обесцветить этиловым спиртом в течение 30-60 секунд до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя. 4. Промыть водой 5. Докрасить водным раствором фуксина в течение 1-2 минут 6. Промыть водой, высушить и микроскопировать. 2 Гр + бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, а Гр - - в розово- красный. В основе этого метода лежит избирательное обесцвечивание – удаление комплекса гецианового фиолетового с йодом под действием спирта. Результат окраски по методу Гр определяется особенностями строения и химического состава клеточной стенки бактерий и зависит от способности удерживать образовавшийся в процессе окраски комплекс генцианового фиолетового с йодом. Фирмикутные бактерии окрашиваются Гр + , т.к. имеют многослойный пептидогликан связанный с тейхоевыми кислотами. Последние обуславливают прочную фиксацию красителя и резистентность к обесцвечиванию спиртом. Грациликутные бактерии окрашиваются Гр - Этапы микроскопии 1. установить свет при увеличении 7*8 2. на приготовленный, на предметном стекле и окрашенный мазок нанести каплю иммерсионного масла и поместить на предметный столик 3. повернуть револьвер на отметку иммерсионного объектива *90 4. осторожно опустить тубус микроскопа до погружения объектива в каплю масла (смотреть сбоку) 5. установить ориентировочный фокус при помощи макрометрического винта 6. провести окончательную фокусировку препарата микроскопическим винтом, вращая его в пределах только одного оборота 7. по окончании работы необходимо удалить масло с иммерсионного объектива и перевести револьвер на малый объектив *8 Практическая работа 1. Приготовлен мазок из культуры Sarcina flava, окрашенный простым методом окраски с помощью красителя генциан-виолет, и промикроскопирован. При микроскопии обнаружены фиолетовые шаровидные клетки, расположенные скоплениями в виде пакетов по 8,16… клеток 3 2. Приготовлен мазок из культуры Escherichia coli, окрашенный простым методом окраски с помощью красителя водный фуксин, и промикроскопирован. При микроскопии обнаружены маленькие розовые палочки с закругленными краями, располагающиеся хаотично 3. Приготовлен мазок из смеси культур Escherichia coli и Staphylococcus albus, окрашен по Граму и промикроскопирован. При микроскопии обнаружены фиолетовые шаровидные клетки, расположенные бессистемными скоплениями в виде гроздьев винограда (Гр + ) и маленькие розовые палочки с закругленными краями, располагающиеся хаотично (Гр - ). |