Главная страница

1Окраска по Граму практика. Правила работы в бактериологической лаборатории. Морфология микроорганизмов. Приготовление и окраска мазков. Окраска по методу


Скачать 152.98 Kb.
НазваниеПравила работы в бактериологической лаборатории. Морфология микроорганизмов. Приготовление и окраска мазков. Окраска по методу
Дата08.12.2021
Размер152.98 Kb.
Формат файлаpdf
Имя файла1Окраска по Граму практика.pdf
ТипДокументы
#297034

1
Правила работы в бактериологической лаборатории. Морфология
микроорганизмов. Приготовление и окраска мазков. Окраска по методу
Грама.
Правила работы в бактериологической лаборатории.
1. не заразить себя и окружающих.
2. сохранить чистоту бактериальной культуры.
Этапы приготовления мазка.
1. на обезжиренное стекло нанести каплю физиологического раствора
2. бактериологической петлей внести в каплю исследуемую культуру микробов и распределить тонким слоем на стекле
3. высушить мазок над пламенем спиртовки
4. зафиксировать мазок в пламени спиртовки или жидким фиксатором (мазки из мокроты, крови)
5. окрасить мазок
Тинкториальные свойства – это способность воспринимать и удерживать красители – зависят от особенностей строения и химического состава бактериальной клетки.
Методы окраски простые сложные
Простая окраска – это использование одного красителя (например, метиленового синего, водного фуксина).
Сложная окраска – это использование нескольких красителей и других химических веществ (спиртов, кислот, щелочей). Она служит для дифференциации микроорганизмов. Существуют специальные сложные методы окраски, которые используют для выявления структурных компонентов бактерий: жгутиков, капсул и разных цитоплазматических включений.
К сложным методам окраски относится, например, окраска по Граму.
Большинство кокков являются Гр
+
(
за исключением возбудителей менингита и гонореи), а большинство палочек Гр
-
Этапы окраски по Граму
1.
На фиксированный мазок нанести карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 1-
2 минуты ее снять, а краситель слить.
2.
Нанести раствор Люголя на 1-2 минуты.
3.
Обесцветить этиловым спиртом в течение 30-60 секунд до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя.
4.
Промыть водой
5.
Докрасить водным раствором фуксина в течение 1-2 минут
6.
Промыть водой, высушить и микроскопировать.

2
Гр
+ бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, а Гр
-
- в розово- красный.
В основе этого метода лежит избирательное обесцвечивание – удаление комплекса гецианового фиолетового с йодом под действием спирта.
Результат окраски по методу Гр определяется особенностями строения и химического состава клеточной стенки бактерий и зависит от способности удерживать образовавшийся в процессе окраски комплекс генцианового фиолетового с йодом.
Фирмикутные бактерии окрашиваются Гр
+
, т.к. имеют многослойный пептидогликан связанный с тейхоевыми кислотами. Последние обуславливают прочную фиксацию красителя и резистентность к обесцвечиванию спиртом.
Грациликутные бактерии окрашиваются Гр
-
Этапы микроскопии
1. установить свет при увеличении 7*8 2. на приготовленный, на предметном стекле и окрашенный мазок нанести каплю иммерсионного масла и поместить на предметный столик
3. повернуть револьвер на отметку иммерсионного объектива *90 4. осторожно опустить тубус микроскопа до погружения объектива в каплю масла (смотреть сбоку)
5. установить ориентировочный фокус при помощи макрометрического винта
6. провести окончательную фокусировку препарата микроскопическим винтом, вращая его в пределах только одного оборота
7. по окончании работы необходимо удалить масло с иммерсионного объектива и перевести револьвер на малый объектив *8
Практическая работа
1.
Приготовлен мазок из культуры Sarcina flava, окрашенный простым методом окраски с помощью красителя генциан-виолет, и промикроскопирован.
При микроскопии обнаружены фиолетовые шаровидные клетки, расположенные скоплениями в виде пакетов по 8,16… клеток

3 2.
Приготовлен мазок из культуры Escherichia coli, окрашенный простым методом окраски с помощью красителя водный фуксин, и промикроскопирован.
При микроскопии обнаружены маленькие розовые палочки с закругленными краями, располагающиеся хаотично
3.
Приготовлен мазок из смеси культур Escherichia coli и Staphylococcus albus, окрашен по Граму и промикроскопирован.
При микроскопии обнаружены фиолетовые шаровидные клетки, расположенные бессистемными скоплениями в виде гроздьев винограда (Гр
+
) и маленькие розовые палочки с закругленными краями, располагающиеся хаотично (Гр
-
).


написать администратору сайта